蓖麻蚕(Philosamia cynthiaricini)后部丝腺体5SrRNA的核苷酸顺序

本文用凝胶直读法、末端鉴定法以及前标记指纹图谱等几种方法相配合,测定了蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)后部丝腺体5S rRNA的核苷酸顺序:(pp)pGCCAACGUCCAUACCACGUUGAAAACACCGGUUCUCGUCCGAUCACCGAAGUUAAGCAACGUCGGGCGCGGUCAGUACUUGGAUGGGUGACCGCCUGGGAACACCCGUGUUGUUGGCUU_(OH)。并比较了蓖麻蚕和家蚕、果蝇5S rRNA结构上的差异,讨论了真核生物5S rRNA结构的保守性。     

用S1核酸酶作图法测定蓖麻蚕18S rRNA基因的5′端位置

测定基因5′端位置是研究基因转录调控的一个重要前提。本文将蓖麻蚕18S rRNA基因DNA的5′端用~(32)P标记,然后与18S rRNA杂交,再用S1核酸酶水解掉非杂交区的DNA和RNA。分析放射自显影的结果,测出18S rRNA基因5′端的位置。在18S rRNA基因的BglⅡ_2位点向EcoRⅠ,方向延伸约220bp处,从这一结果,可知道蓖麻蚕rRNA基因的转录方向是5′EcoRⅠ_2→BglⅡ_23′。     

蓖麻蚕5.8S rRNA基因的结构特点

利用计算机分析已知的蓖麻蚕(Attacus ricini)5.8S rRNA顺序,发现其上有一个PstⅠ位点。因此,将rDNA上PstⅠ位点两侧的DNA片段分别克隆在pWR 13质粒上。用末端终止法测定了蓖麻蚕5.8S rRNA基因全顺序及与之相邻的上、下游部分核苷酸顺序。发现5.8SrRNA基因3′端为pGGGCCGGCT_(OH)。这个结果与Feng,Y.X.等报道的蓖麻蚕5.8S rRNA顺序3′端是pGGGCCGAUUAA_(OH)有两个明显不同:第一,从共同顺序pGGGCCG算起,5.8S rRNA基因的3′端有九个核苷酸,比Feng Y.X.等报道的rRNA顺序3′端少两个核苷酸;第二,两者在3′末端共同顺序以后的两个核苷酸是不一样的。此外,还发现在蓖麻蚕5.8S rRNA基因上游有一个约30个核苷酸的poly(A)区。     

杂交蚕后代的5S rRNA一级结构

本文用化学降解和核糖核酸酶降解凝胶电泳直读法,测定了广西蚕业指导所用人工授精方法获得的蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini♂)和家蚕(Bombyx mori ♀,)的杂交第六代个体(具有花斑)的5SrRNA的一级结构。以同法测定了其母本家蚕5S rRNA的一级结构。结果见到两者一样,说明杂交蚕的 5S rRNA基因来自母本。它们的结构与Komiya等(1981)测定的未知品种家蚕5S rRNA有二个核苷酸的差别。     

蓖麻蚕基因组中5S DNA的组织

用Southern方法研究了蓖麻蚕(Attacus ricini)5S核糖体RNA (5S rRNA)的基因在基因组中的组织情况。5S rRNA基因以顺向串联的多拷贝形式组成了5S DNA家族。家族的每个成员(5S DNA的重复单位)的大小为260bp(碱基对),即由120bp的基因区和140bp的空间区顺序所组成。在5S DNA的家族中没有限制性内切酶EcoRI、BamHI、PstI和BglⅡ的切点。限制性内切酶MboI、Hhal在每个重复单位中有一个切点,都是位于基因的顺序中。5S DNA重复单位的空间区顺序是不均一的,这一点可由限制性内切酶Hae Ⅲ和Alu Ⅰ切点的不规则分布而得以揭示。     

蓖麻蚕核糖体核糖核酸基因上18S、28S和5.8S核糖体核糖核酸基因的定位

蓖麻蚕的核糖体核糖核酸(rRNA)的基因(rDNA)是多拷贝基因,其重复单位成线性方向排列。在每一重复单位中含有18S、28S和5.8S rRNA基因各一个。了解它们的排列状况是认识rDNA结构的基础。本文将无性繁殖的该rDNA用各种限制性内切酶水解后,制成Southern转移膜与放射性同位素标记的18S、28S和5.8S rRNA杂交;又将18S和28S rRNA制成Northern转移膜与放射性同位素标记的rDNA片段杂交,从而排出18S、28S和5.8S rRNA基因在rDNA上面的相对位置。     

蓖麻蚕18S rRNA基因3′末端的顺序特征

本文测定了蓖麻蚕18S rRNA基因(rDNA) 3′末端及其外侧的DNA顺序。将这一顺序与家蚕、果蝇、大鼠 18S rDNA 3′末端顺序以及大肠杆菌16 S rDNA 3′末端顺序作了比较,发现它们间有惊人的同源性。不仅如此,这些基因的3′末端所形成的茎环结构也十分相似,在3′末端还有保守的EcoRI切点。这些研究结果对了解18S rRNA 3′末端在蛋白质合成中的功能及在rRNA前体加工成熟中的作用;对于了解rRNA基因的进化打下了基础。     

基于18S rRNA和线粒体16S rRNA基因序列的柳蚕进化分析

为探讨柳蚕Actias selene Hübner与鳞翅目昆虫的系统发育关系,本研究利用PCR扩增获得了柳蚕核糖体18S rRNA和线粒体16S rRNA基因的部分序列,长度分别为391bp和428bp。并采用邻近距离法(NJ)、最大简约法(MP)、类平均聚类法(UPGMA)构建系统进化树。结果表明,柳蚕线粒体16SrRNA基因序列与大蚕蛾科昆虫的16SrRNA基因序列均表现出偏好于碱基AT的倾向。柳蚕与所研究的其它蚕类的遗传距离介于0.016至0.140之间,其中与温带柞蚕Antheraea roylii的遗传距离最小,与野桑蚕Bombyx mandarina的遗传距离最大。而基于鳞翅目昆虫18S rRNA基因部分序列的进化分析显示,柳蚕与柞蚕Antheraea pernyi之间的遗传距离最小(0.010),与蓖麻蚕Samia ricini的遗传距离最大(0.017)。     

幼龄小白鼠全脑5SrRNA的全核苷酸序列测定

<正> 5S rRNA是一种稳定的独立小分子,在原核和真核细胞中都牢固地结合在核糖体的大亚基上。它在蛋白质生物合成过程中具有重要作用。微生物、大鼠肝细胞及某些植物细胞5S rRNA的一级结构都已经测定,脑细胞5SrRNA的一级结构尚未见报道。因此,我们对幼龄小鼠全脑5S rRNA的序列进行了分析。我们用辜祥荣等人的方法分离和纯化5S rRNA,5S rRNA3′-末端标记参照Peattie的方法(2)。3′-末端标记5S rRNA的序列分析用化学降解-凝胶直读法及特异RNa8e降解直     

蓖麻蚕rDNA转录起始区核酸酶S1的敏感位点的特征结构

曾报道,蓖麻蚕rRNA基因的非转录间隔区内有1个单链核酸酶S1的超敏感位点,它具有d(AT)₁₈的特征结构^[1] .蓖麻蚕经饥饿,再食后.发现在该S1超敏感位点的下游还存在1个敏感位点,而在饥饿的情况下,未能检测到染色质上的这个敏感位点^[2].新确定的这个可诱导的单链核酸酶的敏感位点,它是一个d(GT)₁₀…d(AT)₁₀的特殊结构,具有易解链的特征.这个新确定的核酸酶S1的敏感点结构可能直接参与了rDNA的转录和复制的调控.     

芹菜(Apium graveolens L.)叶绿体4.5S rRNA的序列分析及与其它植物4.5S rRNA的比较

 本文应用RNA序列分析直读技术测定了芹菜叶绿体核糖体4.5rRNA核苷酸顺序;5’_(OH)GAA GGUCACGGUGAGACGA GCCGUUUAUCA UUACGAUAGGUGUCUAGUGGAAGUGCAGU G AUGUAUGCA G CUGAGGCAUC CUAACAGACCGGCAGAUUU GAAC_(OH)3’。由103个核苷酸组成,5’-末端木磷酸化,与已知的几种植物叶绿体4.5S rRNA序列进行了同源性比较,发现不同植物4.5S rRNA序列之间有很大的保守性。我们在芹菜4.5S rRNA一级结构的基础上按碱基最大配对原则绘出了其二级结构。     

数种昆虫5S rRNA结构特点的比较

比较已知结构的昆虫5S rRNA的核苷酸顺序,发现同科、同目的昆虫比不同科、不同目的昆虫有较少的核苷酸差别.根据Kimura和Ohta(1972)提出的经验公式,绘制了数种昆虫的系统发育图.结果表明,从分子进化得到的结论和经典分类基本上是一致的.根据DeWachter等(1982)提出的二级结构模型,归纳分析这些昆虫5S rRNA,发现保守位点与半保守位点(同一位点仅出现二种核苷酸残基)之和几乎占整个5S rRNA分子的100%.     

蓖麻蚕核糖体RNA基因外转录间隙区(ETS)部分顺序

根据rRNA杂交定位的结果,分离了带有外转录间隙区(ETS)的蓖麻蚕rRNA基因次级克隆pARⅡ的BamHI-PstⅠ片段。利用部分酶解法作了较精细的内切酶谱,测定了各片段的大小。由BamHI5′端,对该片段进行了顺序分析,在已测定的BamHI-Al(?)I片段的219个校苷酸顺序中,酶切位点的识别顺序的定位与部分酶切法的定位结果一致,片段中可能存在4个反向重复顺序。     

蓖麻蚕rDNA核骨架结合元件SAR的检测和特征分析

采用二碘水杨酸锂盐 (LIS)制备细胞核骨架 ,Southern杂交法检测与细胞核骨架结合的rDNA片段 ,发现蓖麻蚕rRNA基因 5′非转录间隔区 (NTS)内存在一个很强的核骨架结合元件 .外切核酸酶Ⅲ消化限定表明 ,该SAR位于SacⅡ -EcoRⅠ限制酶片段内 ,长度约 1kb .经DNA顺序分析表明 ,该片段AT碱基富集 ,A +T >70 % ,含有拓扑异构酶Ⅱ保守序列和ATATTT结构花式 ,以及酵母自主复制序列(ARS)的同源序列 ,该SAR内含有 (AT) ₁₈序列已证明是核酸酶S1的超敏感位点 ,这种核酸酶S1的超敏感性可能是SAR元件的信号特征之一 .     

乌鳢肝5S rRNA的核苷酸序列

应用Peattie,Maxum等化学裂解法,辅以酶解直读法等测定了乌醴(Ophiocephalus argus)肝5S rRNA的核苷酸序列;与已知的虹鳟鱼和纵带泥鳅5S rRNA序列比较,发现它们之间的核苷酸序列具有高度的保守性.利用其一级结构所给出的信息,初步提出二级结构模型.     

乌鳢肝5S rRNA的核苷酸序列

应用Peattie,Maxum等化学裂解法,辅以酶解直读法等测定了乌醴(Ophiocephalus argus)肝5S rRNA的核苷酸序列;与已知的虹鳟鱼和纵带泥鳅5S rRNA序列比较,发现它们之间的核苷酸序列具有高度的保守性.利用其一级结构所给出的信息,初步提出二级结构模型.     

油菜叶绿体基因组文库的构建和16S rRNA基因及16S-23S rDNA间隔顺序的分离

油菜ct-DNA经Bam H1酶解在0.7％琼脂糖上电泳呈现出27条DNA带,其中最大的为12.4kb,最小的为1kb。我们以pBR322为载体构建了油菜ct-DNA Bam HI片段文库。用烟草的16S和23S rRNA标记探针和油菜ct-DNA Bam HI带型杂交,证明F_5、F_(12)和F_(14)含有16S-23S rDNA。根据植物叶绿体rRNA基因的大小及排列,推算出F_(12)含有完整的16S rDNA及16S-23S rDNA的间隔顺序(spacer)。对携带F_(12)的杂合质粒pBN119做了一些初步的研究。     

含蚕豆叶绿体rRNA基因重组质粒物理图谱的构建

以 pBR322 DNA 为载体,Escherichia coli HB101为受体菌,克隆了含蚕豆叶绿体 rRNA基因的二个 BamHI 片段。应用几种限制性内切酶酶切以及 Southern 印迹法构建了这二个特异片段的物理图谱。重组质粒 pVFB16含有一个4.70kb 的 BamHI 片段,其上含有完整的16S rRNA 基因;重组质粒 pVFB32含有一个5.65kb 的 BamHI 片段,其上含有23S rRNA基因,23S—4.5S/5S rRNA 基因的间隔区及4.5S/5S rRNA 基因。     

蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体RNA基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖

利用质粒pBR322作运载体,获得了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体rRNA基因(rDNA)的部分片段在E.coli中的无性繁殖株。酶切图谱分析及Southern法分子杂交鉴定证明,重组质粒pARI含有1.95MdrDNA EcoRI-BamHⅠ双酶切片段;pARⅡ含有2.6Md的rDNABamHⅠ片段。并测定了BamHⅠ片段与pBR322连接方向。     

蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体RNA基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖

利用质粒pBR322作运载体,获得了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体rRNA 基因(rDNA)的部分片段在E.coli 中的无性繁殖株。酶切图谱分析及Southern 法分子杂交鉴定证明,重组质粒pARI 含有1.95MdrDNA EcoRI-BamHI 双酶切片段;pARⅡ含有2.6Md 的rDNABamHI片段。并测定了BamHI 片段与pBR322连接方向。