2009～2010年北京儿童腹泻中轮状病毒新VP4基因亚型的研究

P[8]b基因亚型是国内外新近发现的A组人轮状病毒(HRV)VP4基因的一种新亚型,本研究旨在建立有效鉴别HRV P[8]a和P[8]b基因亚型及P[4]和P[6]基因型的VP4基因打点杂交分型方法,并运用此方法对2009～2010年首都儿科研究所附属儿童医院门诊及住院腹泻患儿中P[8]b基因亚型HRV的流行情况及其G/P基因组合情况进行研究。通过对GenBank序列数据库可检索到的国内外HRV各种P基因型及亚型的VP4基因序列应用相关软件进行基因分析,在不同基因型别间核苷酸变异密集而相同P基因型内核苷酸高度保守的的位置设计各型别探针,并分别以本实验室上传GenBank的北京HRV地方株P[4]和P[6]基因型及P[8]a和P[8]b亚型的VP4基因作为相应型别探针的合成引物的设计模板及探针经PCR合成的合成模板,合成地高辛素标记的DNA探针。经测序验证所建立的VP4基因杂交分型方法结果可靠。对门诊88例(55%,88/160)及住院79例(70.5%,79/112)HRV腹泻患儿的P分型结果显示P[8]a亚型仍为主要型别,前者为96.6%(85/88),而后者为62.0%(49/79);P[8]b亚型在住院HRV感染腹泻患儿中占较高比例(27.9%,22/79),虽然其在门诊HRV感染患儿中也存在,但仅占2.3%(2/88);另外单纯P[4]基因型HRV感染仅在住院腹泻患儿中检测到1例(1.3%,1/79),而P[6]基因型在门诊及住院HRV感染腹泻患儿中均未检测到;本组标本中HRV P[8]b亚型主要与G9基因型组合。本研究表明G9P[8]b型HRV在北京腹泻儿童中有流行。     

轮状病毒致腹泻机制的研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是发展中国家致5岁内婴幼儿胃肠道感染,引起感染性腹泻的重要原因,每年因此而死亡的病例高达600,000多人.[1]近年来对此的研究也越来越多,但是其引起腹泻的具体病理生理机制始终未达成统一的说法.目前主要是有两种假说,即轮状病毒非结构蛋白4 (NSP4)假说和肠道神经系统(ENS)假说.对于轮状病毒腹泻的预防及治疗,现阶段主要是进行减毒活疫苗预防,但其疗效不甚令人满意,并且有可能导致肠梗阻.[2-3]本文将对轮状病毒致婴幼儿腹泻的可能机制及其研究进展进行综述,此外,针对其独特的致病机制将讨论轮状病毒感染可能的预防策略.     

2018–2020年人轮状病毒锦州地方株VP4及VP7基因特征

【背景】人A组轮状病毒(Rotavirus Group A,RVA)是婴幼儿胃肠炎的主要病原体及发展中国家婴幼儿死亡的重要原因,目前无特效药物治疗,疫苗预防是唯一可行的预防感染方法。外衣壳蛋白VP7和VP4是疫苗设计的主要靶点,针对该基因加强RVA地方株分子流行病学监测十分必要。【目的】对锦州地方流行RVA株VP7和VP4基因进行型别鉴定和序列特征分析。【方法】收集锦州地区2018-2020年RVA感染腹泻患儿的粪便标本,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增VP7、VP4基因片段并测序,得到7株RVA VP7和VP4序列。使用在线基因分型工具Rota C V2.0对测序结果进行分型分析。应用BLAST、DNAStar、MEGA X、Bio Edit等生物软件与临床流行株及疫苗株进行系统发育分析及氨基酸序列比对分析。【结果】分型结果表明7株锦州地方株均为G9P[8]型,系统发育分析证实其VP7和VP4基因分别属于G9-Ⅵ和P[8]-3谱系,核苷酸序列相似性分别为99.32%-100%与99.41%-100%。JZ株VP7与疫苗株Rotavac和Rotasiil相比,在抗原表位区7-1a、7-1b、7-2中分别存在4个和3个氨基酸替换。JZ株VP4与疫苗株Rotarix和Rota Teq VP4氨基酸序列相比,发现7个和4个氨基酸替换,位于抗原表位区8-1和8-3。【结论】2018-2020年在辽宁锦州地区检测到7株G9P[8]型RVA株,VP7和VP4序列相似性高于99%,G9P[8]型可能是辽宁省锦州地区2018-2020年婴幼儿轮状病毒腹泻的主要流行基因型之一。与同基因型疫苗株比较,位于JZ株VP7和VP4抗原表位区的氨基酸位点差异对于野毒株免疫逃逸机制的研究具有意义。     

轮状病毒VP4亚单位疫苗研究进展

轮状病毒是全球范围内导致5岁以下婴幼儿严重腹泻的主要病原体,造成了巨大的经济负担和社会负担。疫苗预防接种是控制轮状病毒感染最为有效的手段,但在轮状病毒导致的死亡率较高的非洲和亚洲部分低收入国家,目前已经上市的轮状病毒疫苗的有效性较低,且会增加肠套叠的风险。更加安全、有效的轮状病毒疫苗对于降低轮状病毒感染导致的发病率和死亡率具有重要意义。目前,各国科研人员试图从多个方面提高轮状病毒疫苗的有效性,非复制型基因工程亚单位疫苗是目前轮状病毒疫苗研究的主要方向。文中就目前轮状病毒亚单位疫苗,特别是基于VP4蛋白的亚单位疫苗的研究进展进行了综述,以期对轮状病毒疫苗的发展提供借鉴意义。     

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因真核表达载体的构建及表达

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一[1],可引起母猪流产、胚胎死亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等,还可引起仔猪的皮炎和腹泻.PPV在我国污染非常严重,部分地区阳性率达90%以上[2].PPV能在大多数哺乳动物传代细胞系内长期潜伏感染,而且量少时不易检出,当细胞连续传代时可能引起细胞病变至细胞死亡,有可能给实验室带来较多麻烦.VP2蛋白是该病毒的主要结构蛋白之一,本研究构建含VP2蛋白的主要抗原表位基因的真核表达载体并获得其稳定表达的细胞株.     

病毒性腹泻

<正>急性感染性腹泻是全球性传染病,特别对婴幼儿的危害最为严重。世界卫生组织曾将人口控制、热带病和腹泻病列为三大工作目标,并于1978年制定了一项全球性腹泻病控制计划。 急性腹泻是发展中国家婴幼儿的常见病,也是婴幼儿死亡的一个重要原因。据世界卫生组织统计,1980年亚洲(除中国外)、非洲和拉丁美洲5岁以下小儿死于腹泻的共460万人,发病数为74400万人。腹泻病严重威胁小儿的生命和健康发育。在发达国家中感染性腹泻病在儿童中的发病率也仅次     

G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6和NSP4编码基因的分子特征

最近在亚洲首次发现并报道了感染人的G5型人A组轮状病毒LL36755株,为进一步探讨其进化来源,克隆了G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6、NSP4编码基因,并分析其基因序列的分子特征。结果发现卢龙株LL36755为罕见的G5P[6]型,其VP6的亚群为SGⅡ型,NSP4的基因型为B型。系统进化树分析表明,卢龙株LL36755的VP7、VP4编码基因与猪来源的毒株关系密切,而VP6、NSP4编码基因与人来源的毒株紧密相联系。可以推断新的人腹泻A组轮状病毒LL36755株是猪的VP7,VP4编码基因与人的VP6,NSP4编码基因的自然重组;而且该毒株不是G5的原型,很可能是人类轮状病毒与猪轮状病毒毒株的自然重组后逐步进化而来。     

G1型A组轮状病毒地方株VP7基因在杆状病毒系统中的表达

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原,每年因轮状病毒腹泻造成的死亡超过１００万人。ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白,具有中和抗原活性,与病毒的毒力及免疫保护性有关。也是划分血清型的主要标志,而对疫苗的研究证明,不同血清型之间的交叉保护作用甚...     

轮状病毒疫苗

<正> 轮状病毒性腹泻 轮状病毒是发达国家婴幼儿的严重脱水止腹泻的主要原因,它们常常导致40-60％的病例需要住院治疗。轮状病毒性腹泻在发展中国家也同样常见,但是,由于细菌性腹泻和原虫性腹泻的发病率较高。致使由轮状病毒引起的腹泻在总腹泻中的比例较小。然而轮状病毒性腹泻较细菌性腹泻具有更大的严重性;因此轮状病毒占有显著的地位,通常占发展中国家婴幼儿严重腹泻的20     

人A组轮状病毒北京地方株VP4血清型特异片段编码基因的序列分析

轮状病毒是引起婴幼儿严重腹泻的重要病原,其第四基因编码主要中和抗原VP4,而VP4可裂解为VP8和VP5两个片段。VP8为抗原型特异性片段。克隆并测定了具有代表性的三个轮状病毒北京株VP4编码基因5′端（VPS＋VPS一部分）887个核苷酸序列并据此推导出其氨基酸序列。结果表明,相同血清型的地方株和标准株之间具有高度同源性（92％～966％）,不同血清型间则变异较大（70．5％～71％）。氨基酸最大变异处位于aa84～172,并对胰酶作用位点在致病性中的可能性进行了讨论。     

在中国卢龙县发现G5型人A组轮状病毒

轮状病毒是引起我国儿童重症腹泻的主要病原。按照WHO轮状病毒监测方案,对2003年间河北省卢龙县开展了以医院和社区为基础的小于5岁儿童轮状病毒腹泻的监测,发现一株新型轮状病毒。该病毒用传统分型引物(G1、G2、G3、G4)扩增不出条带,对其VP7基因全序列测定和分析后确定该毒株为G5型。这是我们在亚洲首次发现的人类G5型轮状病毒。该毒株与猪的G5型C134毒株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88·6%和95·4%,与非洲发现的人的G5型毒株MRC3105核苷酸和氨基酸的同源性为89·9%和94%,与巴西发现的IAL-28毒株核苷酸和氨基酸的同源性为87·2%和93·3%。系统发生树分析表明:卢龙毒株LL36755与其他已经报告的两种猪和一种人类的G5型毒株可能具有相同的起源。这是人轮状病毒G5型首次在亚洲国家发现,而且该毒株可能是由人类轮状病毒与动物轮状病毒毒株自然重组产生。     

Genetic variation in the VP4 and NSP4 genes of human rotavirus serotype 3 (G3 type) isolated in China and Japan

Sequence analyses of the VP4 and NSP4 genes were performed on twenty human isolates of serotype G3 rotavirus obtained from China and Japan. One isolate from China, CHW17, possessed P[4] genotype VP4 and KUN group NSP4 genes which are associated with G2. One isolate (02/92) from Japan, which was shown to have a wider spacing between RNA segments 10 and 11 by RNA polyacrylamide gel electrophoretic analysis like AU-1, possessed P[9] genotype VP4 and AU-1 group NSP4 genes. The other isolates had P[8] genotype VP4 and Wa group NSP4 genes. While the nucleotide sequence conservation among the G3 VP7 genes was more than 79% (Wen et al, Arch. Virol., 1997, 142: 1481-1489), the conservation of VP4 and NSP4 genes in the same genotypes or groups was more than 85%.     

Apparent re-emergence of serotype G9 in 1995 among rotaviruses recovered from Japanese children hospitalized with acute gastroenteritis

Serotype G9 rotaviruses have been detected in about 0.5% of the circulating strains worldwide. However, G9 strains emerged globally in the middle of the 90s and thereafter. A rotavirus, contained in stool specimen 95H115, possessing a G9 VP7 emerged in Japan in the 1994-1995 season for the first time after a 9-year interval since prototype G9 strains AU32 and F45 were discovered in the 1985-1986 season. In comparison with other G9 VP7 genes thus far published, the sequencing of the VP7 genes of AU32 and 95H115 revealed that the 95H115 VP7 gene did not directly evolve from the AU32 VP7 gene but was much more closely related to the contemporary G9 VP7 genes found in the United States of America. Thus, recently emerging G9 VP7 genes were not direct descendants of the VP7 genes of the prototype strains in the 80s, rather they evolved independently into 4 phylogenetic clusters from a common ancestor.     

一株抗蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体识别的线性抗原表位的鉴定

为研究本实验室制备的一株抗蓝舌病病毒8型(BTV-8)VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)3G11识别的B细胞抗原表位,利用噬菌体肽库展示技术对3G11识别的抗原表位进行筛选并鉴定。经过4轮淘选后挑取蓝斑测序,测序结果经分析后获得KLLAT序列,与BTV-8 VP2蛋白氨基酸序列比对后获得共同的短肽序列为283LL284;合成4种短肽序列:KLLAA、KALAT、KLAAT和KLLAT,与3G11细胞上清和腹水分别进行间接ELISA鉴定,结果表明,短肽KLLAA和KLLAT与3G11细胞上清及腹水具有较强的结合能力;与24种BTV标准阳性血清反应结果表明,这两种短肽都可与BTV-8阳性血清发生特异性反应;序列分析结果可见,该表位的氨基酸序列283LL284在不同来源的BTV-8毒株间保守,确定283LL284为MAb3G11识别抗原表位的关键氨基酸。本研究为建立8型BTV特异性的免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。     

Distribution of human rotaviruses, especially G9 strains, in Japan from 1996 to 2000

A 4-year (1996-2000) survey of rotavirus infection involving 2,218 diarrheal fecal specimens of children collected from five regions of Japan was conducted. A total of 642 (28.9%) specimens were found to be rotavirus positive. A changed prevalence pattern of rotavirus G serotype was found with an increase of G9 and G2 and a decrease of G1, although G1 remained the prevailing serotype. Serotype G9 was unexpectedly determined to be the prevailing serotype in Sapporo (62.5%) and Tokyo (52.9%) in 1998-1999, and in Saga (78.4%) in 1999-2000. G9 strains isolated from 1998-1999 belonged to the P[8]-NSP4-Wa-group with long RNA pattern, while, G9 strains isolated from 1999-2000 belonged to three groups, the P[8]-NSP4-Wa-group with long RNA pattern, the P[4]-NSP4-KUN-group with short RNA pattern and a mixed-type group (P[4]/P[8]-NSP4-KUN/Wa-group with long RNA pattern). Both sequence and immunological analysis of VP7 revealed that the G9 strains from 1999-2000 were much more closely related to the G9 strains isolated worldwide in the 1990s, including G9 strains found in Thailand in 1997. However, the G9 strains from 1998-1999 were distinct from these and more closely related to the G9 prototype strains F45, AU32 and WI61 discovered in Japan and the US in the 1980s. Thus the G9 strains isolated in 1998-1999 had progenitors common to the G9 prototype strains, while the strains isolated in 1999-2000 did not directly evolve from them but were related to global G9 strains that have emerged in recent years. These data supported our previous report that G9 rotavirus might exist as two or more subtypes with diverse RNA patterns, P-genotype and NSP4 genogroup combinations (Y.M. Zhou et al., J. Med. Virol. 65: 619-628, 2001) and suggested that G9 rotavirus prevalent in Japan during two successive years belonged to different subtypes. The nucleotide sequences presented in this paper were submitted to DDBJ, EMBL and GenBank nucleotide sequence databases. The accession numbers are: 00-Ad2863VP7 (AB091746), 00-OS2986VP7 (AB091747), 00-SG2509VP7 (AB091748), 00-SG2518VP7 (AB091749), 00-SG2541 (AB091750), 00-SG2864 (AB091751), 00-SP2737VP7 (AB091752), 99-SP1542VP7 (AB091753), 99-SP1904VP7 (AB091754), 99-TK2082VP7 (AB091755) and 99-TK2091VP7 (AB091756).     

Longitudinal analysis of VP7 gene of group A human rotavirus G2P[4] strains circulating in the pre‐vaccine era in Sapporo,Japan from 1991 to 2011

Sequence analysis of the VP7 gene in 23 group A human rotavirus G2P[4] strains obtained during 1991–2011, that is, the pre‐vaccine era, in Sapporo, Japan showed considerable genetic diversity, mainly in variable regions. Recent G2P[4] epidemic strains were located in sublineage IVa with a distinctive substitution of D96N. This study provides background data on the genetic variability of G2P[4] rotavirus‐VP7 gene prior to the widespread use of rotavirus vaccines in Japan.