蓝舌病病毒4型特异性竞争ELISA检测方法的建立

旨在建立蓝舌病病毒4型(BTV-4)特异性抗体ELISA检测方法,为蓝舌病的免疫学诊断提供新的技术。利用制备的两株抗4型BTV VP2蛋白的单克隆抗体4A-1G7和4B-1B6,建立BTV-4特异性竞争ELISA抗体检测方法。利用该方法同时对50份羊和牛BTV阴性血清进行检测,分别确定两种方法阻断率临界值为49%和40%。利用标准阳性血清检测的试验结果表明,该方法的敏感性、特异性和重复性符合OIE通用标准。同时,4A-1G7和4B-1B6两种竞争ELISA方法联合作用,可以检测感染4、18和20型BTV的血清。研究结果为建立以上各型BTV的检测方法提供了基础。     

一株抗蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体识别的线性抗原表位的鉴定

为研究本实验室制备的一株抗蓝舌病病毒8型(BTV-8)VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)3G11识别的B细胞抗原表位,利用噬菌体肽库展示技术对3G11识别的抗原表位进行筛选并鉴定。经过4轮淘选后挑取蓝斑测序,测序结果经分析后获得KLLAT序列,与BTV-8 VP2蛋白氨基酸序列比对后获得共同的短肽序列为283LL284;合成4种短肽序列:KLLAA、KALAT、KLAAT和KLLAT,与3G11细胞上清和腹水分别进行间接ELISA鉴定,结果表明,短肽KLLAA和KLLAT与3G11细胞上清及腹水具有较强的结合能力;与24种BTV标准阳性血清反应结果表明,这两种短肽都可与BTV-8阳性血清发生特异性反应;序列分析结果可见,该表位的氨基酸序列283LL284在不同来源的BTV-8毒株间保守,确定283LL284为MAb3G11识别抗原表位的关键氨基酸。本研究为建立8型BTV特异性的免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。