小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1/NDPK A的表达

nm23家族除与肿瘤转移抑制有关,它还参与调节正常细胞的发育、增殖、分化及凋亡等过程。运用RT-PCR、Western blot 和免疫组织化学技术,分析小鼠胚泡黏附时子宫内膜着床点和着床旁组织nm23-M1/NDPK A 的表达,以未交配鼠作对照,为进一步阐明胚泡着床的机制提供有意义的实验依据。RT-PCR 结果显示,小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1/NDPK A mRNA 表达明显高于对照组,并且着床点明显高于着床旁,Western blot 和免疫组织化学分析nm23-M1/NDPK A 蛋白表达,也得到一致的结果。提示nm23-M1/NDPK A 参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1／NDPK A的表达

nm23家族除与肿瘤转移抑制有关,它还参与调节正常细胞的发育、增殖、分化及凋亡等过程。运用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学技术,分析小鼠胚泡黏附时子宫内膜着床点和着床旁组织nm23-M1／NDPK A的表达,以未交配鼠作对照,为进一步阐明胚泡着床的机制提供有意义的实验依据。RT-pCR结果显示,小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1／NDPK A mRNA表达明显高于对照组,并且着床点明显高于着床旁,Western blot和免疫组织化学分析nm23-M1／NDPK A蛋白表达,也得到一致的结果。提示nm23-M1／NDPK A参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

p16INK4a在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响

本研究旨在检测肿瘤抑制基因p16INK4a(inhibitor of cyclin-dependent kinase 4a)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨p16INK4a在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕小鼠及孕小鼠第2、3、4、5、7天子宫内膜p16INK4a mRNA和蛋白的表达;子宫角注射p16INK4a抗体观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示孕小鼠子宫内膜组织p16INK4amRNA的表达高于未孕小鼠,且随着妊娠天数的增加呈现表达逐渐增强的趋势,到妊娠第5天达到最高,后渐降.免疫组织化学分析显示p16INK4a蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射p16INK4a抗体后胚泡着床数明显减少.以上结果提示,P161INK4a在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与胚泡着床.     

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2/NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D_5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectricpoint,pI)约7.1、分子量(molecularweight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D_5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix—assistedlaserdesorpion/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(PeptideMassFingerprint,PMF),经Mascot:PeptideMassFingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2/NDPKB。RT-PCR和免疫组织化学结果也显示D_5小鼠子宫内膜nm23-M2/NDPKBmRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2/NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

PTEN在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响

本研究旨存检测肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase andtensinhomologdeletedonchromosometen)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨PTEN在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用实时荧光定量聚合酶联反应(real.time fluorescent quantitative PCR.FQ.PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕及孕1、3、4、5、7 d小鼠子宫内膜PTEN mRNA和蛋白的表达;子宫角注射PTEN反义寡核苷酸观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示,妊娠小鼠子宫内膜组织PTENmRNA的表达高于未妊娠小鼠,且随着妊娠天数的增加表达逐渐增强,到妊娠第5天达最高.免疫组织化学分析显示,PTEN蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少.结果提示,PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床.     

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2／NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectric point,pI)约7．1、分子量(molecular weight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption／ionization time of flying mass spectrometry,MALDI—TOF—MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(Peptide Mass Fingerprint,PMF),经Mascot：Peptide Mass Fingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2／NDPKB。RT—PCR和免疫组织化学结果也显示D5小鼠子宫内膜nm23-M2／NDPK B mRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2／NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

大鼠子宫内膜存在人绒毛膜促性腺激素样(hCG-like)物质结合部位的初步探讨

在胚泡着床过程中,胚泡可以产生hCG样物质,它对于着床过程可能有某种调节作用。本实验结果表明:大鼠胚泡着床前(交配后第四天)的子宫内膜存在hCG特异性结合部位。对子宫内膜及睾丸组织~(125)I-hCG结合性质测定的平行实验中,证明子宫内膜hCG的结合部位与睾丸组织hOG受体有很相似的特性,其亲和常数(Ka)值分别为9.0×10~9M~(_1)和7.7×10~9M~(_1)。子宫内膜存在hCG结合部位可能与着床过程中胚泡与子宫内膜的同步化调节有一定关系。     

妊娠早期胚泡、子宫液和子宫内膜的蛋白质及其与着床的关系

哺乳动物胚泡着床是涉及胚泡和子宫内膜之间的相互作用问题,研究着床机理或从着床途径考虑控制生育,可从如何抑制胚泡着床能力或改变子宫内膜使其不适于胚泡着床的条件着手。近年来,有关这两方面的研究已积累了不少资料,特别是蛋白质分析技术的发展。许多研究者报道了在各种动物早期妊娠过程中,随体内激素水平的变化,子宫液(包括子宫内膜和胚泡)蛋白质或小肽物质有量和种类的细微变化,这些变化关系到母体对妊娠的识别、胚泡与子宫的粘附和胚泡的侵入。     

妊娠早期胚泡、子宫液和子宫内膜的蛋白质及其与着床的关系

哺乳动物胚泡着床是涉及胚泡和子宫内膜之间的相互作用问题,研究着床机理或从着床途径考虑控制生育,可从如何抑制胚泡着床能力或改变子宫内膜使其不适于胚泡着床的条件着手.近年来,有关这两方面的研究已积累了不少资料,特别是蛋白质分析技术的发展.许多研究者报道了在各种动物早期妊娠过程中,随体内激素水平的变化,子宫液(包括子宫内膜和胚泡)蛋白质或小肽物质有量和种类的细微变化,这些变化关系到母体对妊娠的识别、胚泡与子宫的粘附和胚泡的侵入.     

早孕小鼠子宫内膜M2型丙酮酸激酶基因表达的研究

该研究分析了M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)基因在早孕小鼠子宫内膜的表达规律。通过建立正常妊娠小鼠模型,收集孕D1、D4、D5、D6、D7小鼠子宫内膜组织及孕D5小鼠着床点及着床旁子宫内膜组织。构建假孕小鼠模型,收集假孕PD1、PD4、PD5、PD6和PD7小鼠子宫内膜组织。用Real-time PCR和Western blot方法检测PKM2 m RNA和蛋白质表达水平;免疫组织化学方法检测PKM2蛋白质在孕D5着床点与着床旁子宫内膜的分布。研究结果显示,在正常妊娠小鼠子宫内膜,PKM2 m RNA表达从孕D5开始出现明显升高,孕D6达高峰,孕D7略有下降,孕D6、孕D7与孕D1相比有明显差异。PKM2蛋白质从孕D6开始出现明显升高,孕D7略有下降,孕D6、孕D7与孕D1相比有明显差异。假孕小鼠子宫内膜PKM2 m RNA水平从PD6开始有明显升高,PD7与PD6水平相当,PD6、PD7与PD1相比有明显差异。PKM2蛋白质水平每两组间无明显差异。孕D5小鼠子宫内膜组织中,PKM2 m RNA及蛋白质水平均呈现着床点明显高于着床旁趋势。该研究初步揭示了PKM2基因在早孕小鼠子宫内膜表达规律,为深入探讨PKM2在维持早孕小鼠子宫内膜正常功能的机制上的作用提供了重要线索。     

siRNA作用效果的靶点依赖性

小分子双链RNA(siRNA)可以高效、特异地沉默目的基因表达 ,为基因功能研究及基因治疗提供了新工具。近年来研究表明针对基因mRNA不同位点随机设计的siRNA在作用效果上存在差异 ,siRNA作用效果有序列依赖性 ,而且与其在基因mRNA上的结合部位的高级结构有关 ,与反义核酸发挥作用的靶点依赖性类似。这一性质对设计高效siRNA为基因功能和基因治疗研究提供指导作用。     

mRNA靶点筛选方法研究进展

mRNA靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题。近年来出现了多种筛选mRNA上可接近位点以确定靶位点的方法,包括mRNA实测分析法和计算机模拟分析两大类。其中mRNA实测分析法又包括多种针对自然折叠mRNA的实验分析技术;即基因walk技术,RNaseH作图技术、寡核苷酸微阵列技术,酶作图法确定二级结构技术,核酶导向型随机RNA库位点筛选技术和随机寡核苷酸库结合逆转录位点筛选技术。这些方法在鉴定RNA可接近位点及反义核酸的设计方面均有重要作用。     

蔷薇科植物S-RNase特异性区域分析

S-RNase在配子体型自交不亲和性反应中起关键作用,HV区段被认为是雌蕊与花粉间特异识别的关键部位。应用生物信息学方法,对蔷薇科植物的S-RNase序列分析,并对HV区段一级结构邻近区和空间邻近区作物理化学性质分析,发现HV区C端的一段氨基酸序列符合蛋白质相互作用位点的特征;HVP区也是一个多态性区段,可能参与分子识别过程。因此,蔷薇科植物中,S-RNase与花粉S基因产物的作用方式可能为S-RNase的HVC区与花粉S基因产物先非特异性结合,再以HV区和HVP区进行分子间特异识别。     

慈菇蛋白酶抑制剂A和B的活性中心探讨

慈菇蛋白酶抑制A和B（APIA和APIB）是一种双头多功能抑制剂。它们的一级结构和cDNA序列已经被阐明。为了找到它们的活性中心,利用定点诱变的方法将APIB中根据与其他抑制剂家族的序列比较所推断的可能的活性中心残基;Lys^44,Arg^76和Arg87分别用Pro替代,所得到的突变基因分别在酵母分泌体系中得到了表达,与天然的APIB相比,K^44P-APIB对脂蛋白酶的抑制活力没有改变;而R^76P-APIB和R^87P-APIB对胰蛋白酶的抑制活力都分别下降了一半,由原料的抑制两分子变成了一分子,表明Arg^76和Arg^87分别是APIB的两个活性中心残基,而Lys^44则不是,为了证实以上结论,进一步制备了另外3种突变体（K^44P-R^76P-APIB,K^44P-R^87P-APIB,R^76P-R^87P-APIB)。在每个突变体中,3个可能的活性位点中只保留1个,有关的抑制活力测定表明,K^44P-R^76P-APIB(只保留Arg^87)和K^44P-R^87P-APIB(只保留Arg^76)分别只抑制一分子胰蛋白酶,而R^76P-R^87P-APIB(只保留Lys^44)对胰蛋白酶基本不抑制,从而肯定了以上结论,经过测定,两个突变体K^44P-R^87P-APIB对胰蛋白酶的抑制常数Ki分别是0.39nmol/L和0.47nmol/L。突变体R^87L-APIB(APIA中87位是Leu)丧失了接近一半的胰蛋白酶抑制活力,但同时对胰凝乳蛋白酶的抑制活性由原来的基本不抑制变成和APIA相同的可以抑制一分子,证明了Leu^87是APIA的抑制胰凝乳蛋白酶的活性中心位点。     

转基因动物整合位点的研究进展

转基因动物整合位点克隆及相关序列特征研究是探索外源基因整合机制和整合稳定性的重要手段。转基因整合位点序列的克隆方法主要有：个体基因组文库筛选法、反向PCR法、热不对称交互式PCR法和质粒回收法。4种方法各有优缺点,可根据不同条件选用。克隆到的整合位点序列表明,整合位点可能存在一定的共同特征。 Integration Sites of Transgenes in Transgenic Animals WU Bo,ZHU Zuo-Yan State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology,Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Science,Wuhan 430072,China Abstract:To study the mechanism of transgene ' s integration in the host genome,first step is to clone the integration-site sequence.The method employed for this purpose includes selection from genomic pool,IPCR,TAIL-PCR and plasmid rescued.Different method fits different cases depending on how the transgenics have been produced.The data of integration-site sequences showed some similar features existed. Key words：transgene; integration site; clone method     

人类囊胚期胚胎培养-移植的研究现状

传统的体外受精-胚胎移植选择卵裂期胚胎进行移植,然而,多胎率高、成功率低始终困惑着生殖医学者,囊胚移植更符合生理过程,胚胎与子宫内膜更为同步性,因而可获得更高的胚胎种植率及临床妊娠率,且减少胚胎的移植数量,降低了多胎妊娠发生率,具有广泛的应用前景。     

作物区域试验点区辨力估算方法的比较研究

对三种估算作物区域试验点区辨力方法（变异系数指标法、回归系数指标法和ＡＭＭＩ模型Ｄｊ值法）进行了比较研究,研究表明,三种方法的结论总体上相近,但ＡＭＭＩ模型Ｄｊ值法相对较科学准确。     

辽宁省冰砬山森林立地分类的研究

森林立地的研究是人工林集约经营的基础,正确地选择宜林地,科学造林,真正做到适地适树,必须进行森林立地分类。森林立地分类应是以现代森林生态学和生态系统理论为依据,研究植被(立木、下木、地被物)和地形、植被与土壤以及地形和土壤的关系。在揭     

Linear and Conformation-Dependent Antigenic Sites on the Nucleoprotein of Rabies Virus

A set of 29 monoclonal antibodies (MAbs) specific for the rabies virus nucleoprotein (N protein) was prepared and used to analyze the topography of antigenic sites. At least four partially overlapping antigenic sites were delineated on the N protein of rabies virus by competitive binding assays. Indirect immunofluorescent antibody tests using MAbs with a series of rabies and rabies-related viruses showed that epitopes shared by various fixed and street strains of rabies virus were mainly localized at antigenic sites II and III, while epitopes representing the genus-specific antigen of Lyssavirus were widely presented at sites I, III and IV. All but one of seven MAbs specific for antigenic sites I, IV and bridge site (I and II) reacted with the antigen that had been denatured by sodium dodecyl sulfate or 2-mercaptoethanol, as well as with the denatured N protein in Western blotting assays. However, none of the MAbs against antigenic sites II and III reacted with the denatured antigen. These data indicate that antigenic sites I and IV, and sites II and III on the N protein of rabies virus are composed of linear and conformation-dependent epitopes, respectively.