家蝇天然抗菌肽的分离纯化与活性分析

目的:纯化得到有抗菌活性的家蝇天然抗菌肽。方法:以革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)的混合菌液,在未灭活的情况下对家蝇幼虫实施带菌针刺以诱导抗菌肽的大量表达。采用固相萃取(SPE),得到三个对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有强烈抑制作用的组分Sp1、Sp3和Sp8。用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对活性最强的Sp1进行了纯化,液体生长抑制法证明其中的组分Ⅲ具有最强活性。毛细管电泳(CE)显示该组分由两种物质组成。结果和结论:家蝇血淋巴中存在大量有抗菌活性的物质。该研究利用SPE和RP-HPLC与CE联用的方法,得到了有较强抗菌活性和较宽抗菌谱的粗提物,并获得一个推测由两种阳离子型抗菌肽组成的成分,为后期研究打下了基础。     

基于烟草脆裂病毒构建同时表达2种外源蛋白的载体及其应用

目的 构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法 以烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus，TRV）基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，缺失TRV RNA2的2b基因5"端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌豆早枯病毒（pea early-browning virus，PEBV）外壳蛋白（coat protein，cp）基因启动子，获得pTRV2e²载体；在pTRV2e²载体的2b和PEBV的cp启动子下游插入不同的外源基因，测定病毒TRVe²表达外源蛋白的能力、携带外源基因后重组病毒的稳定性以及分析蛋白质的生物学功能。结果 病毒TRVe²能快速同时表达2个非融合的外源蛋白，且至少能表达70 ku外源蛋白，且该病毒携带~2.0 kb外源基因能稳定存活于寄主植物中；病毒TRVe²可用于分析蛋白质的生物学功能以及2个蛋白质间的相互作用。结论 本文构建的重组病毒TRVe²为快速有效地表达2个外源蛋白以及分析2个蛋白质间的相互作用提供技术工具。