应用双水相萃取技术提取香菇多糖的研究

利用聚乙二醇(PEG)-硫酸铵双水相体系提取香菇多糖,研究了不同PEG-硫酸铵组成的双水相体系对香菇多糖分配比和收率的影响。结果表明:PEG分子量在6000时对香菇多糖的提取效果较好;PEG6000浓度在24%时、硫酸铵浓度在30%时组成的双水相体系提取香菇多糖的效果最好,此时香菇多糖的分配系数(K)可达到1.90,收率(Y)可达到57.42%。     

牛血清白蛋白在聚乙二醇/葡聚糖双水相体系中分配特性的研究

采用考马斯亮蓝G250染色法测得室温下BSA在PEG/dextran双水相体系中的分配系数。以BSA在PEG/dextran体系的下相富集为目标,研究了PEG的分子量、浓度、dextran浓度以及所加入中性盐的种类与浓度、体系pH诸因素对其分配特性的影响。实验结果表明,在PEG4000/dextran体系中,采用PEG质量分数9%-dextran质量分数9%的浓度组成,同时在pH=7.0,NaC l浓度为0.2 mol.L-1或pH6.0,NaC l浓度为0.34 mol.L-1的工艺条件下萃取BSA均可达最小分配系数,其值为0.014。     

高速逆流双水相色谱法纯化卵白蛋白

生物大分子的液_固色谱纯化过程中固相载体会产生产物吸附、变性等不良影响。高速逆流色谱无需固相载体 ,且具有高分便率和高回收率的优点 ,其中有机相 水相体系在分离天然产物中应用广泛 ,而应用双水相体系分离生物大分子尚处于研究阶段。双水相高速逆流色谱体系的建立与仪器设备及操作工艺条件密切相关 ,因此利用多分离柱高速逆流色谱仪 ,研究了PEG1000-无机盐双水相体系对标准蛋白质混合物以及卵白蛋白的分离。pH值和PEG浓度对不同种类蛋白质的分配系数影响不同 ,实验发现在pH9.2的150% (W/W)PEG1000 170% (W/W)磷酸钾盐体系中 ,细胞色素C、溶菌酶和肌红蛋白的分配系数差异较大 ,且分布合理 ,因而采用该体系在 0 8mL min流速 ,85 0r min转速的条件下 ,成功分离了细胞色素C、溶菌酶和肌红蛋白的混合物。实验也发现在pH9 2的 16 0 % (W/W)PEG10 0 0 17 0 % (W/W)磷酸钾盐体系中 ,鸡蛋清样品中的主要蛋白质成分:卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系数差异最大 ,因而采用该体系在 1 8mL min流速、85 0r mi转速的条件下,200min内从鸡蛋清样品中成功分离卵白蛋白,其电泳纯度为100%,收率为95%.     

超声集成双水相体系提取葡萄籽中的原花青素

采用响应面优化超声集成双水相体系提取葡萄籽中的原花青素最佳工艺条件.首先利用Plackett-Burmart(PB)实验设计对6个相关因素进行了筛选,结果表明,乙醇质量分数、硫酸铵质量分数和超声时间对葡萄籽中原花青素提取率影响较大.用最陡爬坡试验及Box-Benhnken设计进一步优化,利用Design-Expert软件进行二次回归分析,得出主要因素最佳条件为:按乙醇质量分数21.45％,硫酸铵质量分数23.46％配制双水相,在料液比1∶7,50℃温度下超声提取45.46 min,原花青素的提取率可达30.23％,分配系数可达11.5,提取率比优化前提高了6倍.     

双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的研究

建立了由高分子化合物聚乙二醇(PEG4000)与葡聚糖40000(D40)形成的双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的新方法.考察了萃取体系相图,研究了PEG4000/D40质量分数、样品溶液加入量、pH值和温度等因素对双水相成相及桃叶珊瑚甙萃取率的影响.结果表明:PEG4000的质量分数为11%,D40质量分数为8%、样品溶液加入量为8 g,温度为60℃,溶液pH为7时,双水相体系对桃叶珊瑚甙有较高的萃取率,重复三次可达到66.32%,而且萃取得到的桃叶珊瑚甙产品的纯度达到48.67%,远远高于粗提物中的8.750%.     

(乙醇+丙酮)/硫酸铵二元双水相萃取分离螺旋藻中β-胡萝卜素

采用(乙醇+丙酮)(v/v=1:2)/硫酸铵双水相体系分离螺旋藻β-胡萝卜素,确定其体系组成为15%(乙醇+丙酮)(v/v=1∶2)和24%硫酸铵。通过单因素和Box-Behnken实验探讨β-胡萝卜素粗提液、p H、萃取温度对萃取效果的影响。结果表明:β-胡萝卜素粗提液质量分数为6%、体系p H 8.0、萃取温度30℃时,萃取率可达94.55%。研究结果为β-胡萝卜素提取分离提供了新途径,双水相萃取技术在天然β-胡萝卜素提取中具有良好应用前景。     

pH调控双水相萃取色素蛋白复合体及其分配行为研究

为发展色素蛋白复合体分离纯化新方法,探究pH调控PEG1000/柠檬酸钾双水相系统萃取分离纯化色素蛋白复合体。优化萃取条件,光谱法研究其分配行为,检测产物纯度和生物活性。结果表明,最佳萃取条件为调节pH9.0,相组成CPEG100019.0%/C柠檬酸钾20.0%,蛋白质加量3.42 mg/g,K和萃取率达到最大,分别为8.8及86.0%。响应面分析法揭示,PEG1000和柠檬酸钾质量浓度及pH对分配系数和萃取率影响显著。调节pH7.0,反萃取分配系数和反萃取率最小为0.15及86.6%。蛋白质总回收率为74.2%。pH对色素蛋白复合体分配行为具有调控作用,pH大于8.5体系,色素蛋白趋于分配上相,反之分配于下相,PEG1000/柠檬酸钾以及蛋白质加入量不影响色素蛋白复合体分配于上相。电泳表征发现,萃取(pH9.0)上相存在2个蛋白质组分,相对分子量(MW)为7.0 kD及14.0 kD。反萃取(pH7.0)使相对分子量7.0 kD蛋白质组分分配于下相,该组分为LH2β亚基,经萃取和反萃取产物生物活性稳定。pH可调控PEG1000/柠檬酸钾双水相系统萃取分离色素蛋白复合体,产物纯度高,生物活性稳定。     

锁阳原花青素提取方法及抗氧化和抗糖基化研究

为比较不同提取方法对锁阳原花青素得率、抗氧化性和抗糖基化活性的影响,本研究分别采用超声波法、乙醇/硫酸铵双水相萃取法、水提法、微波法和酶解法提取锁阳中原花青素,用香草醛-浓盐酸法测定原花青素含量。采用DPPH·清除能力和·OH清除能力衡量其体外抗氧化能力,采用牛血清白蛋白(BSA)-葡萄糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙醛酸(MGO)模拟反应体系评价原花青素抗糖基化活性。结果表明:微波法提取得率最高,可达15. 00%,提取时间短,仅为19 min。不同提取方法对DPPH·清除能力依次为微波法酶法超声波法乙醇/硫酸铵双水相萃取法水提法;不同提取方法对·OH清除能力依次为:微波法酶解法超声法水提法乙醇/硫酸铵双水相萃取法。微波法制备原花青素在牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应中均有最高抑制率;但抗氧化和抗糖基化活性无相关性。     

锁阳原花青素提取方法及抗氧化和抗糖基化研究北大核心CSCD

为比较不同提取方法对锁阳原花青素得率、抗氧化性和抗糖基化活性的影响,本研究分别采用超声波法、乙醇/硫酸铵双水相萃取法、水提法、微波法和酶解法提取锁阳中原花青素,用香草醛-浓盐酸法测定原花青素含量。采用DPPH·清除能力和·OH清除能力衡量其体外抗氧化能力,采用牛血清白蛋白(BSA)-葡萄糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙醛酸(MGO)模拟反应体系评价原花青素抗糖基化活性。结果表明:微波法提取得率最高,可达15. 00%,提取时间短,仅为19 min。不同提取方法对DPPH·清除能力依次为微波法>酶法>超声波法>乙醇/硫酸铵双水相萃取法>水提法;不同提取方法对·OH清除能力依次为:微波法>酶解法>超声法>水提法>乙醇/硫酸铵双水相萃取法。微波法制备原花青素在牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应中均有最高抑制率;但抗氧化和抗糖基化活性无相关性。     

聚乙二醇-4000对暗纹东方鲀肠上皮电生理的影响

以暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)为研究对象,采用Ussing chamber技术研究了聚乙二醇-4000(PEG-4000)对肠上皮开路电压、短路电流(Isc)、短路电流变化("Isc)、电导(G)、跨膜电位(TEP)的影响。结果表明:PEG-4000在肠道中6 h残留浓度为1.83 g·L-1,显著高于其在水中浓度(P0.05),残留率达184%; PEG处理组暗纹东方鲀离体肠上皮Isc为69.20μA·cm~(-2),显著低于对照组(P0.05);ΔIsc显著低于对照组(P0.05),仅为对照组的68.57%; PEG处理组暗纹东方鲀离体肠上皮电导为24.97 m S·cm~(-2),显著低于对照组(36.22 m S·cm~(-2))(P0.05); PEG-4000在暗纹东方鲀肠道中极易残留、不易渗透,使得肠道上皮的转运蛋白或者离子通道受阻,从而显著影响肠上皮Isc、"Isc以及电导,降低了离子的主动流动量。本研究结果为鱼类肠道电生理平台的构建提供了技术参数,该平台不仅能用于评估PEG等污染物对鱼类肠道的影响,还能用于鱼类肠道上皮细胞离子转运机制的研究。     

Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶的双水相萃取和酶学性质

初步研究双水相体系对Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶的萃取分离效果,选用PEC4000／NaH2 PO4作为戍相系统进行系统研究,考察影响脂肪酶萃取的各种因素（如PEG相对分子质量及质量分数、NaH2PO4质量浓度、pH）,并采用正交实验进一步优化实验条件,确定双水相萃取体系为PEG质量分数为30％、NaH2PO4质量分数为20％、体系pH为6,在此条件下Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶经硫酸铵沉淀和双水相萃取两步纯化的纯化倍数达到最大,较Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶粗酶纯化了22倍。Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶纯酶为低温碱性脂肪酶,最适反应温度为15oC,最适pH为9．5,相对分子质量为3．58×10^4。     

PEG-柠檬酸盐双水相体系纯化α-淀粉酶及模型构建

探索了采用PEG-柠檬酸盐双水相体系纯化α-淀粉酶的可行性和工艺条件,实验考察了PEG分子量。结线长度、pH、上清加入量和NaCl浓度对α-淀粉酶的分配的不同影响。双水相分离体系复杂,影响因素多,为进行分析、预测和优化,采用了响应面方法,以PEG3350浓度、柠檬酸盐浓度和NaCl浓度为自变量进行了α-淀粉酶分配系数、总蛋白分配系数、纯化因子和α-淀粉酶收率的优化,确定了特定的系统组成区域,通过实验验证了该区域内纯化因子大于2,收率约90％,并且具有较低的系统粘度。     

星点设计—效应面法优化红梅消总皂苷双水相提取工艺

为得到红梅消中总皂苷的最佳提取工艺参数,首次采用硫酸铵-乙醇双水相体系对其进行提取;以双水相中两相的质量百分比为自变量,以红梅消总皂苷得率为因变量,通过确定中心点及缩小变量取值范围,用星点设计-效应面分析法进行优化,得到双水相最佳提取条件:硫酸铵12.14%,乙醇40.00%,总皂苷得率为2.95%。结果表明用星点设计-效应面分析法筛选双水相各相的质量百分比方法可行性高,结果可靠;双水相体系对红梅消总皂苷有较好的提取作用,工艺简单、节能、易放大于工业生产。     

海洋真菌Caldariomyces fumago产氯过氧化物酶的双水相提纯条件

采用聚乙二醇(PEG6000)在(NH4)2SO4高饱和度下沉淀夹带蛋白质富集氯过氧化物酶,再利用磷酸盐溶液复溶解共沉淀物形成的双水相萃取体系高浓度回收酶蛋白,最后再经Sephadex G100柱层析纯化获得高纯度酶试样。结果显示:氯过氧化物酶与PEG共沉淀总活力回收率达85.5%,酶在优化的PEG/磷酸盐双水相系统中上下相分配系数k在0.341以下,酶活力回收率达到69.1%,纯度提高了21.57倍,柱层析可使酶纯度进一步提高到24.79倍,总回收率为37.75%。     

双水相-微波提取苎麻皮中总黄酮及抗氧化性研究北大核心CSCD

在乙醇-硫酸铵双水相体系中,以苎麻皮为原料,采用微波法提取苎麻皮中的总黄酮。通过单因素实验考察了乙醇浓度、料液比、硫酸铵用量、提取功率、提取时间对提取率的影响。用正交试验确定了最优提取条件,即在料液比1:50 g/mL、硫酸铵用量为0.2 g/mL、提取功率为200 W、提取时间为120 s,乙醇体积浓度为70%时提取率可达2.442%。采用了水杨酸法和邻苯三酚自氧化法对黄酮抗氧化性进行了研究,结果表明苎麻皮黄酮对O-·2和·OH具有较强的清除作用。     

双水相-微波提取苎麻皮中总黄酮及抗氧化性研究

在乙醇-硫酸铵双水相体系中,以苎麻皮为原料,采用微波法提取苎麻皮中的总黄酮。通过单因素实验考察了乙醇浓度、料液比、硫酸铵用量、提取功率、提取时间对提取率的影响。用正交试验确定了最优提取条件,即在料液比1:50 g/mL、硫酸铵用量为0.2 g/mL、提取功率为200 W、提取时间为120 s,乙醇体积浓度为70%时提取率可达2.442%。采用了水杨酸法和邻苯三酚自氧化法对黄酮抗氧化性进行了研究,结果表明苎麻皮黄酮对O-·2和·OH具有较强的清除作用。     

双水相体系萃取人参根中人参皂苷的研究

建立稳定的聚乙二醇(PEG)与(NH4)2SO4双水相体系以分离人参根中人参皂苷。通过上下相体积比(R)、分配系数(K)和回收率(Y)分析双水相体系对人参皂苷的萃取效果,研究了PEG分子量、PEG/(NH4)2SO4质量分数、pH值和温度等因素对双水相成相及人参皂苷萃取的影响。结果表明:PEG分子量为3350、PEG3350的质量分数为12%、(NH4)2SO4质量分数为16%、溶液pH为7.0、温度为60℃时,双水相体系对人参皂苷有较高的萃取率,回收率可到达88.94%。     

不同来源溶菌酶的性质比较

比较两种从新鲜鸡蛋清中提取溶菌酶的方法。采用较为简单的并且产率较高的结晶法分别从鸡蛋清、鹌鹑蛋清中提取了溶菌酶 ,并分别测定了各溶菌酶的酶活力、最适pH值和最适温度。同时 ,证明了该法无法从鸭蛋清中提取出纯溶菌酶 ,故仅对粗提物进行了酶活力、最适 pH值和最适温度的测定     

用亲和层析技术分离纯化天冬氨酸酶

<正> 亲和层析技术做为现代生化实验室常用的提纯方法,具有专一性强,活力损失小,分离步骤少等优点。天冬氨酸酶是重要的酶制剂,以往见报的分离纯化工艺步骤繁琐,活力损失大。本文报道的新工艺是用聚乙二醇(PEG)/磷酸钾双水相抽提;DEAE-sophadex A-50柱层析除PEG和部分杂蛋白;环氧氯丙烷活化载体,底物作配基的亲和层析技术获得了电泳纯的天冬氨酸酶。     

双水相萃取丽江山慈菇中的秋水仙碱

建立了由聚乙二醇(PEG6000)与(NH4)2SO4形成的双水相体系萃取丽江山慈菇中秋水仙碱的新方法。考察了PEG分子量、PEG的浓度、(NH4)2SO4的浓度和pH值对双水相成相及秋水仙碱萃取率的影响,并结合HPLC对萃取相进行检测。结果表明:PEG6000质量分数为8%,(NH4)2SO4质量分数为20%,pH为7.0时,双水相体系对丽江山慈菇粗提液中秋水仙碱萃取率达82.09%,富集倍数为6.84倍。此方法可用于丽江山慈菇中秋水仙碱的初步分离富集,且操作简单,绿色无污染。