用亲和层析技术分离纯化天冬氨酸酶

<正> 亲和层析技术做为现代生化实验室常用的提纯方法,具有专一性强,活力损失小,分离步骤少等优点。天冬氨酸酶是重要的酶制剂,以往见报的分离纯化工艺步骤繁琐,活力损失大。本文报道的新工艺是用聚乙二醇(PEG)/磷酸钾双水相抽提;DEAE-sophadex A-50柱层析除PEG和部分杂蛋白;环氧氯丙烷活化载体,底物作配基的亲和层析技术获得了电泳纯的天冬氨酸酶。     

非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）荧光活性测定法

建立了一种分析ＨＲＰ催化活力的新方法。该方法基于单体（底物）、聚合物（产物）的荧光发射光谱不重叠,使用荧光光谱仪,通过测量底物荧光淬灭来检测ＨＲＰ在非水介质中（二氧六环－水、乙醇－水、丙酮－水体系）催化酚类、芳香胺类物质聚合的活力。此方法迅速、简便,结果是定量并可重复的,并能定量地计算底物转化率。     

朱砂根愈伤组织诱导及其岩白菜素含量的测定

取朱砂根(Ardisia crenota Sims．)幼苗不同部位作外植体,研究不同激素组合对愈伤组织诱导的影响,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)检测愈伤组织中岩白菜素含量。实验结果表明朱砂根幼苗的不同部位(胚根、下胚轴、茎及叶)均能诱导出愈伤组织,最高诱导率都在45％以上,以MS基本培养基添加2,4—D0．5mg L^-1和KT0．01mg L^-1时愈伤组织的诱导和生长最好。这些愈伤组织均有合成岩白菜素的能力,其中以胚根诱导的愈伤组织中岩白菜素含量最高,为干重的0．076％,相当于原植物根中含量的1／9。高效液相色谱定量测定法精密度高,专一性好,能准确检测朱砂根愈伤组织中岩白菜素的含量。     

疏水吸附法稳定糖化酶的研究

 本文提出了一种新的稳定糖化酶的方法。用带有疏水基团的亲水性多糖,可以方便有效地稳定糖化酶,明显提高了糖化酶的储存稳定性。实验结果表明,在含有芳香基右旋糖酐,钙离子,甘油的缓冲溶液中,糖化酶于室温放置5个月,酶活力没有损失,放置7个月,活力只损失15.7％。     

α淀粉酶与糖化酶的共固定化研究

以纤维素为载体用重氮化法同时固定了糖化酶和α淀粉酶,确定了共固定化的最适条件,研究了共固定化酶的性质,发现共固定化酶较固定化单酶能更好地发挥协同效应,能在较低温度下将淀粉一步水解为葡萄糖。共固定化酶在３０℃下的操作半寿期可达９２０小时。     

非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）催化酚类底物聚合反应速度的影响因素

利用荧光测活法研究了非水介质中不同的对位取代基团对酚类底物ＨＲＰ催化聚合的反应速度的影响,发现反应速度既同对位取代基团的空间位阻效应有关,又同反应中间态的自由基活性有关,两者共同影响反应速度。同时还考察了有机溶剂对反应速度的影响。