高效液相色谱法测定浓缩苹果汁中棒曲霉素

建立了高效液相色谱法 (HPLC)测定浓缩苹果汁中棒曲霉素含量的方法。用乙酸乙酯提取浓缩苹果汁中棒曲霉素 ,碳酸钠水溶液净化提取液 ,蒸干乙酸乙酯层 ,其残留物用醋酸缓冲液溶解。棒曲霉素的含量测定采用HypersilODS (5 μm ,2 5 0mm×4 6mmi d)色谱柱 ,流动相V(乙腈 ) :V(醋酸盐缓冲液 ) :V(水 ) =5 :3:2 ,流速 1ml min ,检测波长 2 76nm。结果表明 :棒曲霉素浓度与峰面积有很好的线性关系 ;用HPLC测定浓缩苹果汁中棒曲霉素的含量可操作性强、准确度高 ,棒曲霉素回收率高达 99 2 %,重现性好 (RSD为 0 4 %) ;灵敏度高最小检出量为 10 μg L。     

大熊猫粪便样本处理与激素萃取方法比较

通过测定圈养动物粪便中的激素水平,监测其发情与怀孕状态和评估其福利状况是目前普遍采用的一种实验手段。然而,现有研究对于圈养野生动物粪便样本的处理及其激素萃取方法存在很大分歧,研究结果也不尽一致。本研究采集了10只(雌∶雄=1∶1)圈养大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的粪便样本,分别采用冷冻干燥-研筛法和冷冻干燥-粉碎法处理粪便样本,然后分别使用80%甲醇、90%乙醇和95%乙醇3种萃取剂进行激素萃取,最后比较2种粪便处理方法和3种溶剂萃取方法所获得的粪便样本中孕酮、雌二醇、睾酮和皮质醇的浓度。结果表明,冷冻干燥-研筛法结合80%甲醇溶液萃取处理的样本中雌二醇和孕酮检测值最高,冷冻干燥-粉碎法结合80%甲醇溶液萃取处理的样本中睾酮检测值最高。冷冻干燥-粉碎法结合90%乙醇溶液萃取处理的样本与冷冻干燥-研筛法结合80%甲醇溶液萃取处理的样本中皮质醇检测值更高,且2种方法的检测结果差异不显著。综合粪便处理难易程度和萃取溶剂性质,建议雌二醇、孕酮和睾酮激素检测根据最高检测浓度的方法进行粪便前处理,皮质醇激素检测使用冷冻干燥-粉碎法结合90%乙醇溶液萃取方法进行粪便前处理。...     

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究

目的：将自制克伦特罗（CL）单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线。方法：用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELJSA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线。将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化。结果：经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2．90×10mmol／L,抗体效价最高达10^6。单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0．005％。建立的标准曲线R2=0．9812,最低检测限为1．0ng／ml。结论：建立了间接竞争ELISA检测cL的标准曲线。自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高。为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础。     

蔬菜中农药残留检测技术研究进展

对目前蔬菜中农药残留分析检测方法及其前处理过程以及快速检测技术作了综述。固相萃取(SPE)、超临界流体萃取(SFE)等新的萃取方法已逐渐代替了液-液萃取(LLE)等传统提取方法。色谱技术是农药残留分析中的重要手段。毛细管气相色谱(CGC)、高效液相色谱(HPLC)及其联用技术是现阶段农药残留分析中的主要检测方法。并指出了今后该领域的研究方向。     

金针菇子实体富硒栽培特性及HPLC-ICP-MS法对硒的分布研究

以金针菇子实体为富硒载体,比较研究其富硒及生长特性,同时采用高灵敏度分离和超痕量元素分析技术（HPLC-ICP-MS）分离检测其含硒生物大分子化合物,确定其分子量及硒含量。结果表明：金针菇子实体对硒的富集能力与培养基中硒浓度有关。样品中的硒浓度与培养基中硒浓度呈正相关性,同一培养基子实体中硒的分布为：菌冠＞菌柄＞菌根;培养基中硒浓度小于30mg/kg时对金针菇的生长有促进作用,富硒系数在2.8－9.9之间;培养基中硒浓度在40－200mg/kg范围时,对金针菇的生长产生抑制作用;高于200mg/kg时,不适于富硒金针菇的培养。对富硒金针菇子实体以Tris-HCl浸提,采用体积排阻色谱法（SEC-HPLC）根据蛋白分子量标样检测浸提液中可溶性生物大分子化合物的分子量分布在25kDa以下;同时与电感耦合等离子体质谱联机（SEC-HPLC-ICP-MS）将不同分子量的含硒化合物中的硒进行高温电离检测各形态硒化合物中硒的含量在68.74－2,986.00μg/kg之间,占浸提液中硒含量的71.87%;其中硒蛋白含硒量占4.88%。因此,以金针菇为载体进行硒的生物有机化不仅成本低,含硒量高,而且硒的主要存在形态安全无毒、人体利用率高。     

高压热水浸提法提取金针菇中游离氨基酸的优化研究

研究了采用高压热水浸提法从金针菇中提取游离氨基酸的最适条件。通过单因素试验和正交试验,探讨了料液比、高压热水浸提时间及高压热水浸提温度对金针菇中游离氨基酸提取率的影响。试验结果表明,此法提取金针菇中游离氨基酸的最适条件为：料液比为1∶35（g/mL）、高压热水浸提温度为108℃、高压热水浸提时间为50min。在此条件下,金针菇中游离氨基酸的提取率为3.37%。     

火菇素蛋白的免疫印迹检测*

从金针菇子实体浸提液中提取了抗癌活性物质火菇素,将纯化的火菇素用Freund佐剂乳化后注射到新西兰白兔体内,经数次加强免疫后采血并分离了抗血清,并以抗血清为探针建立了火菇素蛋白的免疫印迹法定性检测方法。应用免疫学方法检测金针菇菌丝体和子实体,结果显示,只在金针菇子实体中发现与火菇素抗体相结合的抗原信号。     

白色金针菇液体菌种制备及工厂化生产应用初探

通过对白色金针菇液体菌种制备及工厂化生产中应用的研究,确定白色金针菇液体菌种培养基配方及制备条件,建立了采用液体菌种进行白色金针菇工厂化生产的技术规程.通过对茵丝干重的测定,确定了液体菌种培养基配方、培养时间、培养温度、起始pH值等技术参数.并根据本地区的资源情况,通过比较试验,确定了白色金针菇液体菌种制备工艺,工厂化生产的培养料配方及工艺流程.结果表明:采用液体菌种进行白色金针菇的工厂化生产,发茵生长周期明显缩短,污染率显著降低,为白色金针菇工厂化生产提供了技术基础.     

椒莪脂质体的制备及其质量标准的建立

目的:将椒莪油制成脂质体,优选制备工艺,建立质量标准。方法:采用薄膜超声法制备椒莪脂质体,通过正交实验优选处方和制备工艺,HPLC、GC建立其质量标准。结果:最佳处方为卵磷脂:胆固醇7:1,卵磷脂:油3.5:1;HPLC法测定脂质体中莪术油的含量,建立标准曲线,回归方程为Y=14958X+16795,r=0.9996;椒目仁油的测定方法同前文报道。得到的脂质体形态均一,包封率在75%左右。结论:建立的制备工艺简单,便于操作;检测方法的精密度、回收率均符合要求。     

杀鲑气单胞菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank中杀鲑气单胞菌铁载受体(ferric siderophore receptor,fst A)基因序列设计并合成一对特异性引物,经过反应体系优化后建立了检测杀鲑气单胞菌的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。将fst A基因克隆到p MD18T载体上构建重组质粒pMD18T-fst A并制备标准曲线,结果显示该标准曲线的线性关系良好,扩增所得标准曲线为y=-4.255 2x+39.644,相关系数R2为0.988;熔解曲线分析显示产物为单一的特异峰。特异性检测结果表明,该方法对杀鲑气单胞菌及其亚种具有良好的特异性,与其他细菌不发生交叉反应;最低检测限为35拷贝/μL,较常规PCR的灵敏度高出约100倍。应用建立的方法对人工感染的虹鳟病样进行了检测,待检样品均呈阳性反应,表明该方法具有很好的适用性。研究表明,所建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、快速、定量的优点,可用于杀鲑气单胞菌的快速诊断及定量检测。     

省沽油种子超临界CO2 萃取物中角鲨烯和维生素E的GC-MS分析

用气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法对超临界CO2萃取出的省沽油种子油中角鲨烯和维生素E进行分析。省沽油种子油的萃取采用超临界CO2萃取技术,压力25MPa,温度50℃,时间2h;种子油用GC-MS方法分析,以正三十二烷为内标,用内标标准曲线法同时测定省沽油种子油中角鲨烯和维生素E的含量。结果表明:超临界CO2萃取种子油的收率为28.83%;所建立的定量分析方法平均回收率在96.0%~99.0%之间,相对标准偏差小于2.8%,线性相关系数大于0.999,方法检测限在2.0~2.5mg/L之间;省沽油种子油中含角鲨烯4.65%,维生素E1.58%。     

高效液相色谱法测定大鼠血清染料木素浓度

目的:建立大鼠血清中染料木素浓度的HPLC测定方法.方法:大鼠血清以叔丁基甲醚萃取,萃取物用氮气吹干后,用甲醇溶解用于色谱分析.色谱条件:采用Thermo C18柱(250ram×4.6mm,5μm);以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(35:65,pH=4.3)为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为260hm;柱温为40℃;进样量为10μL.结果:染料木素最低检测浓度为0.01mg/L;标准曲线线性范围为0.01～10.00μg/mL(r=0.9998);相对回收率为(101.31±3.47)%;日内RSD与日间RSD均小于10.00%.结论:该方法简便、快速、灵敏度高,重现性及稳定性较好,适用于大鼠血清染料木素浓度测定和药代动力学的研究.     

紫云英叶蛋白提取工艺研究

本文采用正交试验对紫云英叶蛋白提取工艺进行了研究,结果表明:蛋白质萃取工艺较优条件为:萃取剂与紫云英鲜叶料液比为5:1,萃取温度为20℃,萃取pH值7.0,萃取剂中盐浓度为0.5％;绿色蛋白质在50℃时沉淀,白色蛋白质在pH=5.0时沉淀。采用此工艺提取得率为25.4％,每吨紫云英鲜叶可得粗蛋白0.04吨,所得粗蛋白含真蛋白50％左右。     

(乙醇+丙酮)/硫酸铵二元双水相萃取分离螺旋藻中β-胡萝卜素

采用(乙醇+丙酮)(v/v=1:2)/硫酸铵双水相体系分离螺旋藻β-胡萝卜素,确定其体系组成为15%(乙醇+丙酮)(v/v=1∶2)和24%硫酸铵。通过单因素和Box-Behnken实验探讨β-胡萝卜素粗提液、p H、萃取温度对萃取效果的影响。结果表明:β-胡萝卜素粗提液质量分数为6%、体系p H 8.0、萃取温度30℃时,萃取率可达94.55%。研究结果为β-胡萝卜素提取分离提供了新途径,双水相萃取技术在天然β-胡萝卜素提取中具有良好应用前景。     

发酵酒中氨基甲酸乙酯的研究进展

对发酵酒中氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamate,EC）的致癌机理、检测方法、形成机制、前驱物质及控制方法等方面进行综述。阐述目前研究进展的同时,对存在问题进行分析并提出解决设想及应用展望。氨基甲酸乙酯可由自然反应及添加前驱物质两种方式形成,其致癌机理是通过两种不同途径破坏DNA结构。通常情况,主要通过减少前体物质的添加和形成抑制氨基甲酸乙酯的生成。氨基甲酸乙酯的通用检测方法为色谱与不同检测器结合使用或色谱与质谱联用,其中,检测前的样品前处理有液液萃取,固相萃取等不同形式。目前,我国检测控制工作虽然已经取得一定进展,但是检测方法不够经济有效,控制方法不能够普遍应用。关于控制方法的最新研究中,基因工程技术与系统生物技术的相关应用纳入进程,后基因组研究和蛋白质学等对基因的应用改造处于探索阶段。随着关于氨基甲酸乙酯的危害、形成机理等方面的研究不断深入,不同机制的控制方法不断出现。EC的处理逐步进入更加完善的状态。     

葡萄果实香气成分的厌氧萃取研究

采用厌氧液-液萃取对葡萄果实中的香气成分进行了萃取,用气相色谱-质谱联用技术对其进行成分分析,并与葡萄果实常规萃取方法得到的香气成分进行比较。结果显示,采用厌氧萃取方法得到的萃取物含有的香气成分较多,一次性萃取可分析得到39种香气成分,且以内标物2-辛醇表示的香气成分含量明显高于常规萃取方法;香气成分归属的化学类别更多,比分液漏斗萃取方法多出2类香气成分。结果表明,厌氧萃取所得果实香气成分更真实,更典型,为葡萄果实香气成分的分析提供了一种有效的提取方法。     

棒曲霉素检测方法研究进展

棒曲霉素(Patulin)是由部分曲霉、青霉等霉菌产生的次级代谢产物,主要污染水果及其制品.本文时目前常见检测方法薄层色谱法(TLC)、微乳电动色谱法(MEECK)、液相色谱法(LC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、和免疫法等进行了分析.棒曲霉素属小分子弱抗原物质,很难免疫动物,描述了用噬菌体抗体库筛选棒曲霉素抗体来开发ELISA快速检测试剂盒用于现场检测的优越性,并就噬菌体抗体库技术用于小分子弱抗原物质抗体筛选前景进行了展望.     

枣疯病植原体实时荧光定量PCR检测方法的研究

目的:建立枣疯病植原体拷贝数检测实时荧光定量PCR方法,为枣疯病植原体定量检测提供技术支持。方法:构建质粒标准品,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,建立标准曲线,并进行重复性验证。结果:制备了枣疯病植原体标准质粒,建立了稳定的质粒标准品检测体系(R2=0.998,检测限10拷贝,定量限100拷贝)。结论:实时荧光定量PCR检测方法重复性好,可用于枣疯病植原体的拷贝数检测,为枣疯病植原体检验检测和病害防治提供了技术支持。     

生物检材中佐匹克隆的GC/μECD测定

目的：建立液-液萃取、GC/μECD气相色谱测定生物检材中佐匹克隆的方法。方法：以家兔为模型动物,500 mg佐匹克隆标准品灌胃家兔,6.5小时后处死,取其胃、肝、血、脑、心脏、尿,采用乙醚液-液萃取提取,Rtx-5毛细管柱分离,电子捕获检测器检测,标准曲线法定量。结果：该方法灵敏度达0.02μg/mL,在0.05-50μg/mL范围内线性关系良好;低、中、高3种浓度的加样回收率分别为91.7%、99.5%、94.4%,相对标准偏差（RSD）均小于5%;佐匹克隆在家兔脏器中的浓度分别为7.31μg/mL（血液）、7.63μg/g（肝脏）、7.96μg/g（脑）、14.67μg/g（心脏）、32.18μg/g（胃组织）、42.65μg/mL（尿液）,在各脏器中呈特异性分布。结论：该法操作简单、灵敏度高,结果可靠,完全满足临床检测及公安机关在办理佐匹克隆麻醉案件中的需要。     

金针菇菌种诱变选育的研究

目的:比较紫外线、微波单因子对金针菇J05Y-C单细胞悬液的诱变效应,并筛选获得优势突变菌株.方法:分别采用不同强度的紫外线、微波单因子对金针菇单细胞悬液进行诱变处理,以出发菌株作为对照,比较诱变致死率、正变率、HC值、菌丝生长量,进行优势菌株筛选、传代稳定性试验.结果:诱变效应的最佳剂量范围在致死率75%～90%的处理组;相同处理时间内,微波诱变的正变率大于紫外诱变的正变率,分别为85.00%和76.67%.采用最大功率700W、脉冲频率2540MHz的微波炉,以中等功率强度处理80s,获得HC值、菌丝生长量比出发菌株提高32.38%、62.16%的优势突变株W8011,连续8次传代遗传性能稳定.结论:在试验的金针菇菌种诱变选育中,微波诱变效应优于紫外线诱变效应.