游离脂肪酸对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨游离脂肪酸(FFAs)对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响,研究游离脂肪酸在代谢综合征患者牙周病发病机制中的作用。方法:选用在牙周组织修复中起主要作用的人牙周膜成纤维细胞进行体外培养,对照组加入不含胎牛血清的DMEM,实验组分别加入不同浓度的游离脂肪酸进行刺激,在刺激24h-72h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测人牙周膜成纤维细胞的增殖情况。结果:与对照组相比,游离脂肪酸可以抑制人牙周膜成纤维细胞的生长增殖(P<0.01),并且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性,以培养72h后抑制作用最为明显(P<0.01)。结论:游离脂肪酸可以抑制牙周膜成纤维细胞的增殖,降低代谢综合征患者牙周组织的的修复能力,从而导致或加重牙周病的发生或发展。     

658 nm低能量激光照射对人牙周膜细胞生物学效应的影响

目的:探讨658 nm低能量激光照射对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶活性及纤维连接蛋白合成的影响.方法:改良组织块法体外培养人牙周膜细胞.通过658 nm激光照射人牙周膜细胞,观察能量密度为1.86 J/cm2和3.72 J/cm2激光照射后不同时间点细胞增殖效应、碱性磷酸酶活性和纤维连接蛋白的变化.结果:1.86 J/cm2和3.72 J/cm2能量密度的激光照射人牙周膜细胞,可显著促进细胞增殖效应.3.72 J/cm2能量密度的激光照射可提高人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性;能量密度为1.86 J/cm2的激光照射人牙周膜细胞72 h后,细胞中纤维连接蛋白分泌量增加.结论:658 nm低剂量激光照射可促进人牙周膜细胞增殖;适量的低剂量激光照射人牙周膜细胞可促进其碱性磷酸酶活性及纤维连接蛋白的分泌.     

苦参碱对体外人髓母细胞瘤D341细胞凋亡、增殖及凋亡相关蛋白的影响

目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞的凋亡、增殖作用及相关蛋白Caspase 3、Caspase 9表达的影响。方法:D341细胞体外成功培养后,按所加苦参碱的浓度进行分组(0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/ml,0 mg/ml为对照组),各实验重复3次。光学显微镜、透射电镜观察细胞形态、结构的改变,CCK-8法检测D341细胞增殖的影响,Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞凋亡。Western blot检测苦参碱作用D341细胞后Caspase 3、Caspase 9蛋白表达水平的改变。结果:在苦参碱作用下,细胞增殖的抑制率随药物浓度的增加而逐渐升高,抑制率有统计学差别(P0.01);药物作用时间不同对细胞增殖的抑制程度不同,24 h与72 h组的抑制率有统计学差别(P0.01)。瘤细胞的凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐升高,0.5 mg/ml、1.0 mg/ml与1.5 mg/ml、2.0mg/ml组间的差别均有统计学意义(P0.05);瘤细胞的凋亡率随着作用时间延长而升高,24 h与72 h、48 h与72 h组间的凋亡率的差别有统计学意义(P0.05)。随着苦参碱浓度的增加,细胞Caspase 3和Caspase 9的表达均逐渐增强(P0.01)。结论:苦参碱在体外对D341细胞是通过上调Caspase 3和Caspase 9蛋白来发挥其促凋亡、抑制增殖作用。     

当归水提液和醇提液体外抗脂质过氧化和红细胞溶血作用

研究当归水提液和醇提液对小鼠肝组织自发性过氧化酯质分解产物丙二醛（malondialdehyde,MDA）的生成和对红细胞膜脂质过氧化及红细胞溶血作用的影响。采用TBA比色法测定肝组织匀浆MDA生成,分光光度法测定过氧化氢诱导红细胞膜脂质过氧化和溶血。实验分为空白组、对照组、加药组。加药组分为25、50、100和200mg/mL四个浓度组。当归水提液和醇提液均在25～200mg／mL的浓度范围内,能够明显抑制小鼠肝组织匀浆自发性MDA的生成,具有抑制过氧化氢诱导红细胞膜脂质过氧化和溶血的作用,抑制效果随当归水提液和醇提液浓度的增大而逐渐增强,抑制率与药物浓度成良好的量效关系。当归水提液和醇提液具有抗脂质过氧化和红细胞溶血的作用。     

野黄芩苷对内毒素抑制人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察野黄芩苷对内毒素(LPS)抑制人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性的影响。方法原代培养人牙周膜细胞,采用酶动力学方法观察野黄芩苷对LPS抑制人牙周-膜细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果100μg/mL LPS可显著抑制体外培养的人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性。加入0.001-10μg/ml野黄芩苷干预后,对LPS抑制碱性磷酸酶活性有一定的拮抗作用,在1μg/ml时达到高峰。结果 野黄芩苷可能通过拮抗LPS抑制牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性,促使牙周膜细胞向成骨细胞分化而利于牙周组织再生修复。     

不同浓度尼古丁对牙周膜成纤维细胞增殖及纤维结合蛋白合成的作用

目的:探讨不同浓度尼古丁对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)增殖及纤维结合蛋白(Fn)合成的作用。方法:不同浓度的尼古丁(50 ng/ml,250 ng/ml,500 ng/ml,1μg/ml,2μg/ml,3μg/ml)作用于PDLFs,MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Fn合成含量。结果:不同浓度尼古丁作用下:人PDLFs的增殖均被抑制,且呈浓度依赖性。浓度为250 ng/ml~3 ug/ml的尼古丁有明显抑制人PDLFs增殖的作用(P0.05),3 ug/ml尼古丁显示出最强的抑制增殖作用(P0.01);人PDLFs的G0-G1期、S期、G2-M期与对照组相比,G0-G1期细胞周期分布比例逐渐增高,S期和G2-M期逐渐降低,差异均有统计学意义,呈浓度依赖性;人PDLFs合成Fn逐渐减少,呈浓度依赖性。浓度为50 ng/ml~3μg/ml的尼古丁均有明显抑制人PDLFs合成Fn的作用(P0.05),其中3μg/ml抑制作用最强。结论:尼古丁抑制牙周膜细胞的增殖及Fn的合成,呈浓度依赖性,并影响其细胞周期的进程,进而影响牙周新附着的形成,加重牙周病的病情。     

重组人E1A激活基因阻遏子/myc-His融合糖蛋白的纯化及功能鉴定

目的:纯化重组人E1A激活基因阻遏子(hCREG)糖蛋白,验证重组hCREG糖蛋白具有抑制体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖的生物学功能。方法:根据6×His亲和层析原理,应用Ni-NTA柱纯化重组hCREG蛋白,纯化后蛋白通过HiTrap脱盐柱脱盐。用流式细胞周期分析研究添加0.5μg/ml、1μg/ml及2μg/ml重组hCREG/myc-His融合糖蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。用BrdU掺入方法研究重组蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。结果:根据6×His亲和层析原理用Ni-NTA纯化重组hCREG蛋白,浓缩并脱盐后的重组hCREG蛋白浓度为1.6mg/ml,纯度为92%,此蛋白仍保留了糖基化形式。流式细胞仪细胞周期分析结果提示重组hCREG蛋白可抑制体外培养的HITASY细胞增殖,且低浓度组的抑制效应要高于高浓度组。BrdU掺入实验结果提示,添加2μg/ml重组hCREG蛋白组与对照组相比可显著抑制体外培养的HITASY细胞增殖,组间比较有统计学差异(P0.05)。结论:具有生物学功能的重组hCREG/myc-His糖蛋白的成功纯化,为hCREG蛋白的功能研究及生物工程制备提供了实验平台。     

转化生长因子β1对培养的瘢痕成纤维细胞增殖的调控作用

目的探讨TGF-β1对瘢痕成纤维细胞增殖的调控作用。方法采用细胞培养、MTT法、流式细胞仪和免疫组化方法观察TGF-β1在不同作用剂量和时间对增生性瘢痕来源的成纤维细胞的增殖影响。结果在20%胎牛血清条件下TGF-β1可刺激瘢痕成纤维细胞增殖,其作用在10ng-50ng/ml之间呈剂量效应关系;50ng/ml TGF-β1作用12h开始增殖显著,并可持续到72h。细胞周期分析表明:在TGF-β1作用下,G0/G1%呈降低趋势,而S%呈升高趋势,反映细胞增殖活力的PI值也呈升高趋势。免疫组化结果也显示增殖细胞核内抗原(PCNA)随用药浓度增加而逐渐增加。说明TGF-β1对体外培养的瘢痕成纤维细胞具有促增殖作用。结论TGF-β1可能通过调控成纤维细胞的增殖而在增生性瘢痕的形成过程中起重要作用。     

TGF-β1在应力介导的牙周膜成纤维细胞增殖中的作用及其机制

目的:探讨周期性张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)转化生长因子β1(TGF-β1)对其细胞增殖的作用,及对其I型胶原基因表达的作用和影响.方法:在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养力学刺激模型的基础上,利用多通道细胞牵张应力加载系统,对细胞分别施加2、6、12与24 h的周期性张应力,以不加力组为对照组,观察各组细胞形态变化,利用细胞计数试剂8检测细胞增殖活性,并利用ELISA试剂盒检测加力后各组TGF-β1的表达,并对加力12h组加入TGF-β1抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测对I型胶原基因表达的影响.结果:与对照组比较,加力2h细胞增殖稍降低,6h增殖活性增强,12h达到峰值,24h增殖活性明显受到抑制;TGF-β1的表达与细胞增殖成正相关;TGF-β1受到抑制后细胞增殖受到影响,I型胶原的表达也受到影响.结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖在一定时间的周期性张应力作用下先增加然后再抑制,其中TGF-β1参与细胞增殖,并且TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞I型胶原的表达起促进作用.     

复方奥硝唑- 甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞凋亡及超微结构 的影响

目的:观察不同浓度复方奥硝唑-甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞(HPDLC)凋亡与超微结构的影响。方法:用含有不同浓度复方奥硝唑-甲磺酸培氟沙星缓释制剂(0、1.25、2.5、5、10、20g/L)的培养液对人牙周膜细胞进行培养,流式细胞术检测细胞凋亡指数;透射电镜下观察HPDLC超微结构的改变。结果:在1.25、2.5 g/L的浓度下对HPDLC的凋亡率和超微结构均与对照组无显著性差异;而5、10 g/L的浓度组的细胞凋亡率较对照组小且超微结构显示细胞胞质内粗面内质网和线粒体增多,细胞突起增多;而在高浓度药物20 g/L的作用下,凋亡率有所增加,细胞发生退变,溶酶体增多。结论:5、10 g/L的复方奥硝唑甲磺酸培氟沙星缓释制剂对体外培养的HPDLC的生长有一定促进作用,高浓度药物20g/L则对HPDLC生长有一定的抑制作用。     

AcSDKP对PDGF诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰（AcSDKP）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用。方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用四甲基偶氮唑（MTT）法和^3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用^3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成。结果：PD3F在1～20ng／ml浓度范围内对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成均有促进作用。且随着PDGF浓度的增加,其促细胞增殖和胶原合成作用增强,并在10ng／ml浓度时PDGF的促增殖和胶原合成效应最强。在10^-10～10^-8mol／L浓度范围内,AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成均有抑制作用,并且在10叫mol／L时,AcSDKP抑制心脏成纤维细胞增殖和胶原合成作用最强。结论：AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维增殖和胶原合成均有明显抑制作用,这可能与其抗心脏纤维化的作用相关。     

血竭素高氯酸盐在调节成纤维细胞的增殖和创面愈合中的作用

高氯酸血竭素(dracorhodin perchlorate, DP)是一种具有多种药理活性的天然药物,本研究旨在揭示血竭素高氯酸盐在调节成纤维细胞的增殖和创面愈合中的作用。本研究显示,DP处理促进NIH/3T3成纤维细胞增殖,并促进体外和体内的伤口愈合。DP处理24 h显著诱导成纤维细胞增殖,这与磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)水平增加有关。ERK用siRNA阻断则可降低成纤维细胞的增殖。与对照组相比,在大鼠体内应用2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL剂量的DP可促进大鼠伤口愈合。DP处理7 d后,Serpin家族H成员1 (SERPINH1)染色证实创面组织中成纤维细胞增殖升高。因此,DP可促进体外培养的成纤维细胞的增殖,并诱导大鼠体内伤口愈合。     

静电纺丝制备担载神经生长因子的聚乳酸纤维的工艺研究

目的:研究担载神经生长因子(NGF)的聚乳酸纤维乳液法静电纺丝的制备工艺,从电压、溶液浓度等工艺条件进行探索,通过扫描电镜对纤维的形态结构进行观察,旨在找到最佳纺丝制备条件,并观察该条件下纤维的体外释放行为和细胞活性。方法:将NGF水溶液分散于聚乳酸(PLLA)溶液中,通过W/O乳液法制备静电纺丝纤维。分别从电压8 k V、10 k V、12 k V,浓度梯度90mg/m L、100 mg/m L、110 mg/m L进行静电纺丝纤维的制备,对纤维的形态等进行表征。使用ELISA对NGF体外释放动力学进行检测,用Alamer Blue试剂考察纤维释放液对于PC12悬浮细胞增殖的影响。结果:浓度和电压对电纺纤维制备影响很大。当浓度过大时,易堵塞纺丝喷头且纤维弯曲,过小时纤维粗细差异较大。电压过大或过小时纤维弯曲情况严重,甚至出现缠绕现象。当浓度为100 mg/m L,电压为10 k V时制备的乳液法静电纺丝聚乳酸纤维直径粗细均匀,具有较好形态。在该条件下的制备的纤维NGF体外有效释放13天,释放液可以促进PC12细胞的增殖。结论:担载NGF的聚乳酸纤维乳液法最佳静电纺丝制备条件为:PLLA溶液浓度100 mg/m L、电压10 k V,该条件下制备的担载NGF的聚乳酸纤维体外释放可累计释放13天,其释放液可有效促进PC12细胞的增殖,为进一步研究担载NGF的聚乳酸纤维导管奠定了一定的工艺基础。     

miRNA-145通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移

目的:研究微小核糖核酸-145(microRNA-145,miRNA-145)对人牙周膜成纤维细胞迁移的影响及其作用机制。方法:体外采用酶消化法培养人牙周膜成纤维细胞并传代,将其分为对照组和转染miRNA-145组,按50 ng/mL的miRNA-145浓度转染人牙周膜成纤维细胞,转染72 h后提取各组蛋白,用Western blot检测miRNA-145的靶蛋白ROCK1的表达水平的相关变化;采用划痕试验检测各组划痕细胞间距离的相关变化,选取划痕后的0 h、24 h、48 h、72 h时间点,测量各时间点划痕细胞间的距离并计算平均值。结果:与对照组相比,转染miRNA-145后,miRNA-145靶蛋白ROCK1的表达量显著降低(p0.05);转染24 h、48 h后细胞间距离的均值大于对照组(p0.05)。结论:miRNA-145可能通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移。     

复方奥硝唑-甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞凋亡及超微结构的影响

目的：观察不同浓度复方奥硝唑．甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞（HPDLC）凋亡与超微结构的影响。方法：用含有不同浓度复方奥硝唑一甲磺酸培氟沙星缓释制剂（0、1．25、2．5、5、10、20g／L）的培养液对人牙周膜细胞进行培养,流式细胞术检测细胞凋亡指数;透射电镜下观察HPDLC超微结构的改变。结果：在1．25、2．5gm的浓度下对HPDLC的凋亡率和超微结构均与对照组无显著性差异;而5、10g/L的浓度组的细胞凋亡率较对照组小且超微结构显示细胞胞质内粗面内质网和线粒体增多,细胞突起增多;而在高浓度药物20g/L的作用下,凋亡率有所增加,细胞发生退变,溶酶体增多。结论：5、10g／L的复方奥硝唑甲磺酸培氟沙星缓释制荆对体外培养的HPDLC的生长有一定促进作用。高浓度药物20g/L则对HPDLC生长有一定的抑制作用．     

鱼鳞胶原蛋白提取及对成纤维细胞功能的影响

通过水提法提取鱼鳞胶原蛋白,分离大鼠皮肤成纤维细胞,观察鱼鳞胶原蛋白对成纤维细胞增殖,细胞内血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)mRNA表达、蛋白合成及cGMP含量的影响。结果发现:鱼鳞胶原蛋白可促进成纤维细胞增殖,并呈一定的剂量依赖关系,当质量浓度达到40mg/L时,增值率可达42.75%;鱼鳞胶原蛋白能通过促进cGMP合成,明显促进成纤维细胞PDGF、TGFβmRNA表达及蛋白合成,当质量浓度为40mg/L时,PDGF、TGFβmRNA表达量分别为对照组的1.514±0.047和1.595±0.032倍。水提法提取的鱼鳞胶原蛋白具有良好的相容性,可促进成纤维细胞增殖及活化,具有潜在的临床应用价值。     

匹伐他汀对体外培养人脐静脉血内皮祖细胞数量及功能的影响

目的:通过体外培养人脐静脉血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs),观察他汀类新药(匹伐他汀)对EPCs数量及增殖、迁移和粘附功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离培养人脐静脉血单个核细胞,将其接种在包被有人纤维连接蛋白培养板上,培养7 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度匹伐他汀(分别为0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L)培养24h,用免疫荧光法观察EPCs吸收FITC-UEA-I和Dil-acLDL情况对EPCs进行鉴定,然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验对各实验组测定,来观察匹伐他汀对EPCs数量及增殖、迁移和粘附功能影响。结果:匹伐他汀组与对照组相比,匹伐他汀显著提高了体外培养EPCs的数量及增殖、迁移与粘附能力(P0.05)。匹伐他汀浓度在0.1μmol/L时对EPCs影响达到最大。随着药物浓度的继续增大,EPCs的上述功能反呈下降趋势,但1.0μmol/L组仍高于对照组。结论:匹伐他汀能增加体外培养EPCs的数量及增殖、迁移和粘附能力,可作为EPCs培养的一种改良方法,为其更好的应用于临床具有重要的意义。     

黑果腺肋花楸花色苷对人皮肤成纤维细胞紫外辐射损伤的保护作用

为了探讨黑果腺肋花楸花色苷对紫外辐射所致人皮肤成纤维细胞氧化损伤的保护作用,将体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、辐射组和辐射给药组。采用MTT法检测不同浓度花色苷添加量对细胞增殖的保护作用,以选择最优添加浓度。采用化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,ELISA法检测细胞MMP-1分泌水平。结果表明:UVA辐照剂量为10 J/cm2条件下,与辐射组相比,MTT法显示花色苷添加组浓度为125μg/m L对损伤细胞增殖保护作用有极显著的提高(P0.01),同时,125μg/m L花色苷添加组能够显著降低辐射损伤后细胞ROS含量以及MMP-1分泌水平(P0.01)。由此可见,适宜浓度的黑果腺肋花楸花色苷能够降低细胞ROS含量及MMP-1分泌水平,从而对辐射损的细胞起到一定的保护作用。     

bFGF和BMP-2联合应用对体外培养兔骨髓间充质干细胞增殖与骨向分化的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和骨形成蛋白-2(BMP-2)联合应用对体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与骨向分化的影响.方法:体外培养兔骨髓间充质干细胞,在第2代细胞培养液中加入不同浓度的bFGF和BMP-2,依据加入bFGF和BMP-2浓度的不同分为5个实验组(组1:80 ng/ml bFGF;组2:80 ng/ml BMP-2;组3:30 ng/ml bFGF 30 ng/ml BMP-2;组4:50ng/ml bFGF 50ng/ml BMP-2;组5:80ng/ml bFGF 80ng/ml BMP-2)和对照组(不加任何生长因子),采用绘制生长曲线,四唑盐比色法(MTT),碱性磷酸酶(ALP)活性检测法和碱性磷酸酶(ALP)免疫组化染色法比较各组间差异,观察不同浓度的bFGF和BMP-2联合应用对兔骨髓间充质干细胞增殖与骨向分化的影响.结果:与对照组相比,单独应用80 ng/ml bFGF可显著促进BMSCs的增殖,但对BMSCs的骨向分化显著抑制;单独应用80 ng/ml BMP-2对BMSCs的增殖和骨向分化均有促进作用;30ng/ml bFGF 30 ng/ml BMP-2、50 ng/ml bFGF 50 ng/ml BMP-2和80 ng/ml bFGF 80 ng/ml BMP-2可显著地促进BMSCs增殖和促进BMSCs的骨向分化,且呈正性剂量-效应关系,联合应用两种生长因子较二者单独应用促细胞增殖及骨向分化的效果更为显著.结论:一定浓度范围内,bFGF和BMP-2的联合应用促进BMSCs增殖的同时也促进其骨向分化,两者对BMSCs有明显的协同增强的生物学效应.     

甲2巨球蛋白制剂对正常人外周血淋巴细胞周期的影响

采用外周血淋巴细胞姐妹染色单体差别法(SCE)检测技术,研究甲_2巨球蛋白制剂α_2M对人外周血淋巴细胞周期的影响,在人外周血淋巴细胞培养中加入α_2M制剂浓度在≤0.5mg/ml培养液时,第一次细胞周期(M_1)、第二次细胞周期(M_2)、第三次细胞周期(M_3)、细胞增殖速度指数(PRI)改变不大。在加入的α_2M制剂浓度(?)1.0 mg/ml培养液时,M_1百分数增加(r=0.977,P<0.001)、M_2百分数也随α_2M浓度递增而增高(r=0.956,P<0.001)而M_3百分数则随α_2M浓度递增而减少(r=-0.979,P<0.001)、细胞增殖速度指数则随α_2M浓度递增而减少(r=-0.983,P<0.01),表明在人外周血淋巴细胞离体培养时,当每毫升培养液中α_2M浓度等于或大于1mg时,细胞分裂周期延缓。讨论了它的意义和可能作用的环节。