植物基因转移及其应用前景

植物基因转移及其应用前景刘金元（山东省农科院原子能应用研究所,济南）自从１９７４年Ｖａｎｌａｒｅｂｅｋｅｔ［１２］等人在根癌农杆菌中发现一种与双子叶植物肿瘤诱导有关的质粒,随后Ｃｈｉｌｔｏｎ［７］等人又从分子水平证实了该质粒中的一个ＤＮＡ片段（Ｔ－Ｄ...     

重组人胰岛素研究的回顾和展望

胰岛素（ｉｎｓｕｌｉｎ）是由Ａ和Ｂ两条多肽链组成的蛋白质激素,Ａ链含２１个氨基酸残基,Ｂ链由３０个氨基酸残基组成,共有三个二硫键,其中两个连接Ａ链和Ｂ链,一个在Ａ链内。胰岛素是在胰岛的β细胞中被合成和分泌,随血液循环到达靶组织,通过与其专一膜受体结合表现出生理功能的。胰岛素用于临床已有７０多年［１］,由于它是治疗糖尿病的特效药物和糖尿病患者在人口中的比例相当高,所以对胰岛素的需求量很大。这是促使人们不断改进老工艺和采用新的科技成果生产胰岛素的动力。ＤＮＡ重组技术的出现为胰岛素的生产开创了新的途径。第一个重组ＤＮＡ分子［２］报道后不久,Ｕｌｌｒｉｃｈ等［３］,Ｉｔａｋｕｒａ及其同事（１９７８）以及Ｖｉｌ－ｌａ－Ｋｏｍａｒｏｆｆ等（１９７８）就相继报道了胰岛素在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达成功,成为最早在微生物中被表达的哺乳动物蛋白质之一。人胰岛素是第一个被投放市场的生物工程蛋白质药物［４］。十多年来,人们在胰岛素基因的制备,表达体系的选择和改进,表达产物的加工处理等方面进行了卓有成效的探索和研究。不仅实现了人胰岛素在微生物中的生物合成并推向市场,而且推动和加快了其他哺乳动物蛋白质基因工程的研究进程。     

分子伴侣 SecB 基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达

分子伴侣ＳｅｃＢ基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达周颖张青殷长传宋大新陈永青（复旦大学微生物学系和遗传研究所上海２００４３３）分子伴侣（Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ）是细胞内催化及维持其他蛋白质正确构象的一类蛋白质分子［１,２］。研究表明,分子伴...     

土壤微生物PCR及分子杂交检测

ＰＣＲ技术在环境微生物的检测方面已得到越来越广泛的应用,Ｓｔｅｆａｎ等［１］利用ＰＣＲ技术检测土壤中的转基因细菌,后来用于检测土壤中不可培养的微生物［２］,跟踪环境中的特定细菌或ＤＮＡ［３］,揭示土壤生态系统的基因多样性［４］等。利用ＰＣＲ技术来检测…     

关于植物随机引物扩增多态性DNA标记的可靠性问题

随机扩增多态性ＤＮＡ（ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）技术是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ等［１］首先创立的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＡＰＤ技术具有快速、简便、通用性好,对ＤＮＡ的需求量小,质量要求低等优点,一经问世,就受到了广泛的注意,并被成功地用于动物、植物、人和微生物的遗传多样性检测、基因定位、品系鉴定、医学诊断、遗传图谱构建和系统学研究等。在ＲＡＰＤ分子标记的应用研究过程中,人们得出了两种截然不同的结论：一部分人认为ＲＡＰＤ标记的遗传符合孟德尔分离规律,稳定…     

DNA标记和分子育种

ＤＮＡ标记和分子育种钱惠荣郑康乐（中国水稻研究所生物工程系杭州３１０００６）生物技术的发展给作物遗传育种研究带来了巨大的变化,ＤＮＡ分子标记技术的应用是其中最显著的变化之一［９,４８］。由于分子标记相对于经典遗传育种研究中的形态性状具有无可比拟的优越性,它的使用也越来越广泛。许多以前无法进行的研究,比如环境因素的影响,数量性状的多重效应等等,在分子标记的帮助下已经开展。同时分子标记直接应用于...     

油菜素内酯促进绿豆上胚轴伸长与蛋白质和核酸合成的关系

用饲喂蛋白质和核酸合成的放射性前体［３ Ｈ］－Ｐｈｅ、［３ Ｈ］－尿嘧啶和［３ Ｈ］－胸腺嘧啶证实了油菜素内酯（ＢＲ）能促进绿豆上胚轴的生长和蛋白质、ＲＮＡ 及ＤＮＡ 的合成。用蛋白质和核酸合成抑制剂（ＣＨ、Ａｃｔ．Ｄ、５－Ｆｕ）进一步探讨它们对上胚轴伸长的抑制作用与蛋白质、ＲＮＡ、ＤＮＡ 和ｍ ＲＮＡ 合成之间的关系。证明了上胚轴的伸长依赖于蛋白质和核酸的合成,尤其是依赖于ｍ ＲＮＡ 的合成。说明ＢＲ是在转录水平上调节基因的表达,进而促进上胚轴的伸长     

基因工程生长激素研究进展

基因工程生长激素研究进展马昭若（中国专利局１０００８３）生长激素是一种由动物的脑垂体产生并分泌的蛋白质激素。生长激素促进骨骼生长、氮保留和蛋白质合成,并影响葡萄糖与脂类代谢。历史上,一般都是从切除的垂体组织中分离纯化生长激素［１］。八十年代初以来,随着重组ＤＮＡ技术的产业化,已可以由微生物大量产生各种来源不含其他杂蛋白的生长激素［２－３］。     

K562细胞中锌指蛋白cDNA基因片段的克隆

 Ｋ５６２细胞中锌指蛋白ｃＤＮＡ基因片段的克隆刘智,朱定尔,谢慎思,朱小湘,肖广惠,陈汉春（湖南医科大学分子生物学研究室,长沙４１００７８）１９８５年,Ｍｉｌｌｅｒ等［１］等分离并测定了非洲爪蟾卵母细胞转录因子ⅢＡ（ＴＦⅢＡ）的ｃＤＮＡ序列,推出蛋白质...     

酵母双杂合系统的改进和发展

酵母双杂合系统是在１９８９年由ＳｔａｎｌｅｙＦｉｅｌｄｓ和Ｏｋ－ｋｙｕＳｏｎｇ等提出并初步建立的［１］,该系统是在酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中研究蛋白质间相互作用的一种非常有效的分子生物学方法。近几年来随着人们对该系统的广泛应用,这一系统得到了不断的完善及改进,同时也衍生出单杂合系统,三杂合系统等一系列相关的技术。这些技术在不同研究领域中的广泛应用有力地推动了蛋白质与ＤＮＡ,蛋白质与ＲＮＡ,以及多种蛋白质分子间相互作用的研究。     

关于建立《昆虫系统生物学》的设想

<正> 昆虫生物学特性,是昆虫种性的体现,由于昆虫长期生活在各自的环境条件下,通过变异、淘汰、适应而逐步形成,并通过遗传基因,传递给下一代。每种昆虫所处的环境条件不可能完全相同,因此,正如其在外部形态上所表现出的那样,没有一种昆虫的生物学特性是完全相同     

有序差异显示:一种基因表达谱系统比较法

系统研究具有同一基因组的各种细胞群之间基因的差异表达谱十分重要。目前,研究基因差异表达的技术大致有ｍＲＮＡ差异显示［１］、ＲＤＡ［３］、ＳＳＨ［４、５］和ｃＤＮＡ阵列［６］等。近几年,还发展了一些研究基因差异表达谱系统的技术,如ＲＬＣＳ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｌａｎｄ－ｍａｒｋｃＤＮＡｓｃａｎｎｉｎｇ）［８］、ＧＥＦ（ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ－ｓｉｏｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）［２］和ＲＮＡ指纹法［９］等。然而,这些技术或较为复杂,或灵敏度偏低。本文拟介绍一种有效的基因表达谱系统比较法——有序差…     

真核生物基因组多态性分析的DNA指纹技术

真核生物的基因组大且复杂,广泛分布着各种形式的重复序列,由于它们不编码肽链,很少受到自然选择和人工选择作用的影响而保持着高度的多态性［１］。此外,ＤＮＡ分子还以一定的频率发生着各种变异,如个别碱基的突变,序列的缺失,插入或重排,所有这些导致了ＤＮＡ组...     

分子灯标:用于基因检测的荧光杂交探针

随着基因工程技术应用的日趋广泛,如何快速简便准确地检测出基因序列变得日益重要。目前,一种新型的基因检测探针——分子灯标（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎ）诞生了。它是在ＤＮＡ杂交技术和荧光共振能量转移原理的基础上开发出来的［１］,可以实现对基因序列的精...     

昆虫细胞色素P450研究:P450酶系的可诱导性

细胞色素Ｐ４５０酶系是生物体中的一类重要的代谢酶系,它的一个重要特征是它的可诱导性［１］。自Ｂｒｏｗｎ等［２］发现一定的化合物可以促进ＭＦＯ的活性以来,诱导现象得到深入细致地研究,并成为了解Ｐ４５０分子遗传学的工具［３］。诱导是指通过暂时的、加速合成产生正常水平以上的附加蛋白的现象［４］。昆虫中诱导现象的首篇报道是ＡｇｏｓｉｎａｎｄＤｉｎａｍａｒｃａ［５］,他们发现施用ＤＤＴ于侵扰锥猎蝽Ｔｒｉａｔｏｍａｉｎｆｅｓｔａｎｓ（Ｋｌｎｇ）这种吸血昆虫时,昆虫的ＮＡＤＰ含量上升,后来Ｍｏｒｅｌｌｏ［６］…     

用PCR分析HCV－RNA NS5部分序列变异

用ＰＣＲ分析ＨＣＶ－ＲＮＡＮＳ５部分序列变异魏来,王宇,陈红松,陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所,北京１０００４４）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ｃＤＮＡ的序列分析是验证ＨＣＶ基因分型,确定新的型与亚型的基础￣［１］．经典的序列分析方法需经繁琐的分子...     

植物发育基因克隆技术的新进展

过去２０年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作,以前广泛应用的主要方法有ＤＮＡ标签法（ＤＮＡｔａｇｇｉｎｇ）［１,２,３］,作图克隆法（ｍａｐ－ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ）［４］,差别筛选法（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）［５］和扣除杂交法（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）［６,７,８］。这些方法虽然都取得了一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更加广泛的应用。近年来在ＰＣＲ技术的基础上,人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。１９９２年,ＬｉａｎｇＰ和ＰａｒｄｅｅＡ［９］首次提出并运用了ｍＲＮＡ差别显示技术（ｍＲＮＡｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ,ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）来进行基因的分离。实践表明,ｍＲＮＡ差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性,但同时它也存在着重复性较差等缺点。因此,最近研究工作者又在其基础上,发展了诸如代表性差式分析（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ,ＲＤＡ）［１０,１１］和抑制性扣除（或减去）杂交（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＳＳＨ）［１２］等一些更新的方法。下面就此作一简要概述。     

应用5SrDNA间隔序列分析鉴定体细胞杂种

近年来,由于分子生物学的飞速发展,极大地推动了生命科学各分支学科在ＤＮＡ水平上的研究力度。就体细胞杂种的鉴定而言,仅形态、细胞学、生化方面的证据还远远不足,直接从ＤＮＡ水平上鉴定其杂种性质已成为必然。目前,从分子水平上鉴定体细胞杂种的方法有多种,如ＲＦＬＰ图谱分析、ＲＡＰＤ分析等。由于ＲＦＬＰ分析需要特异探针,ＲＡＰＤ分析的重复性较差,在一定程度上限制了两种方法在体细胞杂种鉴定方面的应用。据报道［１］,５ＳｒＤＮＡ（即５ＳｒＲＮＡ基因）在至今研究的所有真核生物中是以串联重复单位组成的,与卫星ＤＮ…     

短杆菌肽S与脂膜结合前后的H／D交换动力学的研究

短杆菌肽Ｓ（ＧＳ）是一个十肽分子（环－（Ｌ－Ｖａｌ－Ｌ－Ｏｒｎ－Ｌ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）２）,是由两个β转角和两个β片层结构所构成［１］。ＧＳ的功能是通过破坏葛兰氏阴性菌的膜结构来完成其抗菌活性。迄今为止,人们对ＧＳ与膜结合特点的研究结果还不一致。Ｄａｔｅｍａｎ等人利用２Ｈ－ＮＭＲ,３１Ｐ－ＮＭＲ和ＤＳＣ等技术研究了ＧＳ与ＤＰＰＣ多层脂膜的相互作用,指出肽仅仅作用于膜表面［２］;而Ｈｉｇａｓｈｉｊｉｍａ等［３］及张凤立等用２Ｄ－ＮＭＲ的研究结果［４］表明,ＧＳ的疏水部分应插入膜内。蛋白质及多肽的Ｈ／Ｄ交换动力学受其分子内氢键,分子空间结构的致密度及其周边环境如膜环境［５］的影响。我们利用衰减全反射红外光谱（ＡＴＲ－ＦＴＩＲ）对与脂膜结合前后的短杆菌肽Ｓ的Ｈ／Ｄ交换动力学进行了研究,实验结果提示ＧＳ插入了脂膜双层。     

电泳核型分析在丝状真菌研究中的应用

电泳核型分析在丝状真菌研究中的应用邢来君,李明春（天津南开大学微生物学系,天津３０００７１）ＤＮＡ分子的分离技术是分子生物学研究中的关键技术之一。目前最通用的分离技术是琼脂糖凝胶电泳［１］,但分离的ＤＮＡ分子大于５０ｋｂ时,该方法已不能获得令人满意的...