茶树RAPD分析体系的优化

以福鼎大白茶为材料,采用美国的PTC-100^Tm热循环仪,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的主要因素进行了研究。确定了茶树RAPD的最适反应体系和扩增程序,即在30μl反应体系中,含40ng模板,2mmol/LMgCl2,各0.2mmol/LdNTPs,0.15μmol/L引物和1.5UTaqDNA聚合酶;扩增程序为;第1步预变性94℃,180s,第2步变性92℃,50s;第3步退火35℃,50s;第4步链延伸72℃,100s;循环41次,后延伸72℃,300s。     

老年获得性肺炎病原菌及耐药分析

目的：了解老年人获得性肺炎的病原菌及耐药趋势。方法：对本院1999年6月－2001年6月两年间老年性获得性肺炎患者的痰标本进行细菌学分离鉴定及耐药分析。结果：老年院内感染以G杆菌为主67．19％,其次是真菌22．08及G^ 球菌10．73％。G杆菌中以大肠埃希菌（29．12％）,非发酵菌（24．88％）和肺炎克雷伯菌（20．19％）为主,在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,产超广谱β－内酰酶株（ESBLS）占49．52％,真菌中以白色假丝酵母菌（68．57％）为主;G^ 球菌中以凝固酶阴性葡萄球菌为主（87．88％）,耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRSCN）占63．64％。2000年6月－2001年6月所分离的细菌与上一年相比,真菌由15．43％增加到29．03％（P＜0．01）,G^＋细菌由6．17％增加到15．48％（P＜0．01）,G杆菌由78．4％下降到55．48％（P＜0．01）。所分离细菌除对亚胺培南,特治星（哌位西林／他唑巴坦）及万古霉素耐药率较低外,常用的抗生素显示较高的耐药率。结论：老年性获得性肺炎以G^- 杆菌为主,而真菌的感染也不容忽视;致病菌呈多重耐药趋势,其感染菌谱的变迁和多重耐药率的升高应该引起高度重视,合理应用抗生素应有法规制度。     

儿童乳牙根尖周炎感染根管厌氧细菌学分析

目的：报告50例5-8.5岁儿童根尖周炎患者感染根管73颗乳牙厌氧菌分离鉴定及体外药敏试验的结果,方法：采用K-B法。结果：89.04%(65/73)的患牙共检出厌氧菌150株,平均每例标本检出2.3株,常用抗厌氧菌药物替硝唑（TNZ）、甲硝唑（MNZ）对革兰阴性厌氧菌（产黑色素普氏菌,中间普氏菌,解脲拟杆菌,具核梭杆菌,牙龈二氧化碳噬纤维菌）有较好的抑菌作用;林可霉素对革兰阳性厌氧菌（厌氧消化链球菌,嗜酸乳杆菌）的作用则强于TNZ和MNZ,氯霉素（C）和乙旋螺旋霉素（AS）抗厌氧菌的作用则弱于前三者。结论：分析儿童乳牙根尖周炎感染根管菌群来决定抗菌药物的选择,在临床治疗上是必要的。     

胚特异性表达T-6b降低拟南芥种子中碳水化合物含量

T-6b为农杆菌T-DNA上的一个起致瘤作用的基因,在营养组织中过量表达后能导致突起和肿瘤的形成;在胚乳中的过表达能提高胚成熟种子的生物量与含油量。本文用油菜中胚特异性表达Napin基因的启动子启动拟南芥T-6b基因的表达。结果显示,当T-6b在胚表达以后,种子褶皱,生物量下降,种子中多种碳水化合物含量降低。这一结果与T-6b在胚乳中表达的表型结果有所差别。     

马铃薯遗传转化体系的优化及玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb的导入

以马铃薯脱毒试管苗茎段为转化受体材料,建立并优化了农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系。通过农杆菌介导法将玉米淀粉分支酶基因(Starch branching enzyme b,SBEⅡb)的过表达载体转化马铃薯,接种762个茎段,共获得35株抗性植株。经PCR检测获得了4株转基因阳性植株;对转基因植株进一步进行GUS活性组织化学染色,发现转基因植株的茎段与试管薯均被染上蓝色,表明外源SBEⅡb基因已整合到马铃薯基因组,且正常表达。     

禽流感抗原基因NA,HA的克隆及其表达载体的构建

HA和NA是禽流感病毒重要的保护性抗原基因,为了得到禽流感植物疫苗,本试验采用高保真PCR扩增方法得到目的基因,分别克隆到pMD18-T载体.经测序证实核酸序列正确后,克隆到含有GUS基因的高效植物双元表达载体pB1121上,获得含有HA/NA基因的植物双元表达载体pB1121-HA和pB1121-NA,采用冻融法将含HA/NA基因的植物双元表达载体转入根癌农杆菌LBA4404,菌液浸染生菜子叶,共培48小时后进行GUS基因表达检测,x-glue染色显蓝色,说明带有HA/NA的植物双元表达载体构建成功,为下一步的生菜转HA/NA基因研究奠定基础.     

伤口感染病原菌分布及耐药谱分析

目的探讨创伤患者伤口感染的常见病原菌及其耐药性,指导临床合理用药。方法回顾分析2010年至2012年创伤患者感染伤口分泌物的细菌分离培养及体外药物敏感试验,对感染的主要病原菌及耐药性进行分析。结果分离到细菌1086株,居于感染首位的是金黄色葡萄球菌（23．6％）,其次是大肠埃希菌（23．2％）,肺炎克雷伯菌（10．2％）,鲍曼不动杆菌（8．8％）,铜绿假单胞菌（6．6％）,分离到8株白色假丝酵母菌（0．7％）;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（metieillin—multiple resistance S．attrelts,MRSA）检出率为71．5％,MRSA除对万古霉素、利奈唑胺100％敏感外,对其他常用抗菌药物均存在较高的耐药性,与MRSA的耐药性明显高于MSSA（P〈0．01）。产超广谱B一内酰胺酶菌株（extended—spectrumbeta—lactamase,ESBLs）的检出率为64．5％,除碳青霉烯类抗菌药物外,ESBLs对喹诺酮类、氨基糖甙类等的常用抗菌药物存在较高的耐药率;其耐药率远高于非ESBLs（P〈0．01）;多重耐药的铜绿假单胞菌（multi—drug resistant Pesudomonas aeruginosa,MDRPA）检出率为40．3％（29／72）,耐碳青霉烯的鲍曼不动杆菌（Carbapenems—resistant Acineto—bacterbaumannii,CA—Ab）的检出率为43．2％（41／95）。仅头孢哌酮／舒巴坦及阿米卡星有良好的敏感性（〉50％）,而对其余绝大部分常用抗菌药物的耐药性相当严重。结论伤口感染以革兰阳性球菌为主,感染病原菌多为多重／泛耐药菌株,对常用抗菌药物甚至碳青霉烯类耐药性严重,应该引起高度重视,临床应据细菌药物敏感性试验报告选用抗菌药物。     

非淋菌性泌尿生殖道炎支原体感染及耐药变迁

目的探讨解脲支原体（Uu）及人型支原体（Mh）在非淋菌性泌尿生殖道炎的感染状况,分析近3年来支原体的感染及耐药变迁。方法采用培养法（Mycoplasma IST）对NGGU的分泌物进行支原体的培养、体外药敏试验及分析。结果支原体阳性率为47．0％,其中Uu阳性率为34．0％,Uu＋Mh阳性率为11．4％,Mh阳性率为1．6％;交沙霉素、强力霉素等药物的敏感率无明显变化,而喹诺酮类的耐药率则呈逐渐上升趋势,环丙沙星及氧氟沙星的耐药率分别从2002年的38．9％及40．0％上升到了2004年的79．2％及66．4％。结论支原体的耐药率正逐步增加,其中喹诺酮类的高耐药率提示其在治疗支原体感染中的地位改变,泌尿生殖道支原体的药物敏感监测对临床治疗具有重要意义。     

中国棉田和稻田茧蜂近缘种的RAPD分子标记研究

我国棉田和水稻田分别有寄生棉红铃虫和稻纵卷叶螟的茧蜂近缘种 ,著者以RAPD分子标记构建此 4种茧蜂基因组的RAPD多态性图谱 ,根据这 4种茧蜂的DNA多态图谱和遗传相似系数 ,明确这 4种茧蜂是 4个不同种。证实黄胸茧蜂Braconisomera (Cushman)和黑胸茧蜂B .nigrorufum (Cushman)仍为独立的姊妹种。菲岛折脉茧蜂CardiochilesphilippensisAshmead和褐翅折脉茧蜂C .fubscipennic Szpligeti为不同种。