濒危中药材太白米组织培养及总黄酮含量测定

以太白米(Notholirion bulbuliferum)地下小鳞茎为外植体,通过在MS基本培养基添加不同浓度2,4-D、KT、TDZ和NAA,研究不同植物生长调节剂对太白米愈伤组织诱导的影响.结果显示,4种植物生长调节剂在不同水平上对愈伤组织诱导有显著作用(2,4-D、TDZ,P<0.01;NAA、KT,P<0.05),诱导愈伤组织的最佳激素组合是0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.2 mg·L~(-1) KT+0.1 mg·L~(-1) TDZ,愈伤组织在该培养基上继代培养有不定芽分化,如用相同浓度ZT代替KT则分化的不定芽增多.HPLC分析显示野生小鳞茎、愈伤组织和不定芽中总黄酮含量无显著差异,分别为干重的13.3%、11.4%和11.9%.     

轮叶党参的组织培养及植株再生研究

以轮叶党参为材料,研究了不同外植体、激素组合、培养基及光照条件对愈伤组织诱导及植株再生的影响.结果表明,叶片是轮叶党参组织培养较为合适的外植体.外植体在添加0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) KT的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%;愈伤组织转移到附加0.75 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA的MS培养基进行继代培养,增殖后的愈伤组织转移到附加0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS分化培养基进行分化,其分化率达89.4%;将分化出的芽转接到附加0.2 mg·L~(-1) IAA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS培养基,生根率达92.5%.暗培养诱导出愈伤组织后转到16 h·d~(-1)光照条件下,愈伤组织增殖倍数和分化率显著提高,再生苗健壮,长势强.     

塔杨松散型均质胚性愈伤组织培养体系

为了获得塔杨(Populus×canadensis Moench‘Tower’)松散型、均质、胚性愈伤组织(LHEC),以塔杨试管苗叶片为外植体,通过不同浓度激素(BA、KT、2,4-D)、蔗糖和无机盐处理,建立了松散型愈伤组织(LC)诱导—继代培养—胚性愈伤诱导的高效体系。结果显示:塔杨叶片在低蔗糖和低无机盐(1/4MS+2 mg·L~(-1)2,4-D+1mg·L~(-1)BA+10 g·L~(-1))的培养基上培养可以诱导出完全的LC(诱导率100%)。LC在继代培养基(MS+2.0mg·L~(-1)2,4-D+2.0 mg·L~(-1)BA+Vc100 mg·L~(-1)+30 g·L~(-1))上进行2~3次转接后,再转移到LHEC培养基(MS+0.5 mg·L~(-1)2,4-D+3 mg·L~(-1)BA+Vc100 mg·L~(-1)+40 g·L~(-1)蔗糖)上培养4~5周(每7天转接1次),即可诱导出具有许多球状体(原胚状体)的松散型胚性愈伤组织。此外,适当的2,4-D与BA浓度比例,可以使LC保持细胞的松散特性、不形成根、无褐变,生长快;含有30 g·L~(-1)蔗糖的培养基利于LC生长和LHEC的形成;维生素C能较好的抑制继代培养中的褐变;BA有利于形成LC,而KT有利于紧密型愈伤组织的形成,同时BA处理的愈伤组织生长较KT处理的快;当2,4-D浓度为0.5~1 mg·L~(-1)时,随着BA浓度的增加,LHEC的数量也随之增加,当BA为3 mg·L~(-1)时,LHEC数量达到最大值100%。本文还对影响愈伤组织胚性化的主要因素进行了讨论。提出的各项建议对均质胚性愈伤组织LHEC的培养有重要的指导意义。     

射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的研究

目的:建立射干愈伤组织的诱导体系。方法:采用MS培养基为基本培养基,研究不同浓度激素配比及不同AgNO_3浓度对射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的影响,并利用显微技术鉴定其愈伤组织类型。结果:射干无菌苗真叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 5 mg·L~(-1)+NAA 1. 0mg·L~(-1)+AgNO_315mg·L~(-1),花蕾愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 0 mg·L~(-1)+NAA 1. 0 mg·L~(-1),诱导率均高于60%,其中2,4-D对射干愈伤组织诱导至关重要,AgNO_3对射干真叶胚性愈伤组织的形成有一定的影响。结论:花蕾是射干愈伤组织诱导较理想的外植体材料,获得的高效愈伤组织诱导条件将为后续射干细胞悬浮体系的成功构建奠定基础。     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径,建立了水杉（Metasequoia glyptostroboides）的植株再生体系,探讨了不同外植体（种胚、幼叶切块、茎段、根段）和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明：以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体,在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织,其中种胚诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达100%,茎诱导效果次之,诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有：MS＋1.0mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-16-BA、MS＋0.1mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA和MS＋0.5mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-1NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好,再生率为62.5%。     

刺葡萄幼胚愈伤组织诱导及其高产原花青素细胞系筛选

以刺葡萄幼胚为材料,研究不同培养方式、培养基配方和培养条件对其愈伤组织诱导的影响,采用正交试验设计法筛选刺葡萄愈伤组织继代增殖的培养基配方,并对继代保持的培养条件和方式进行优化,同时进行了高产原花青素刺葡萄愈伤组织细胞系的筛选研究。结果表明,刺葡萄幼胚以平放的方式接种到MS＋1.0 mg·L^-1 2,4-D或MS＋1.0 mg·L^-1 2,4-D＋0.5mg·L^-1 KT的固体培养基上,在黑暗的条件下,能有效的诱导出愈伤组织,诱导效率为80%;刺葡萄愈伤组织继代增殖以MS＋1.5 mg·L^-1 2,4-D或MS＋1.5 mg·L^-1 2,4-D＋0.5 mg·L^-1 KT的固体培养基为佳,并且采用此两种培养基交替继代培养,在光照条件下能长期保持旺盛且生长一致的刺葡萄愈伤组织;筛选出了紫红色松脆状的高产原花青素的刺葡萄愈伤组织细胞系,培养35 d后每克鲜样的原花青素含量可达1 671.16μg。     

菘蓝两种外植体愈伤组织诱导研究

为寻找菘蓝愈伤组织诱导的最佳外植体,最佳培养基及愈伤组织继代增殖的最佳培养基,选用叶片和叶柄两种外植体,在添加不同种类植物激素处理组合的培养基上,对不同外植体进行愈伤组织的诱导和继代增殖研究.结果表明叶片比叶柄愈伤组织的诱导能力强,表现为出愈时间早,诱导率高,出愈多且质量好.叶片愈伤组织诱导培养基:MS 6-BA1.0mg/L 2,4-D0.3～0.5mg/L;继代增殖培养基:MS 6-BA0.5mg/L 2,4-D0.3mg/L.因此,采用菘蓝叶片为外植体,能高效的诱导出愈伤组织并能快速增殖.     

绿花百合胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

建立绿花百合(Lilium fargesii Franch.)胚性愈伤组织诱导体系,为保护和合理利用这一重要植物资源提供高效、稳定的再生技术途径。以绿花百合鳞片为外植体,通过正交实验研究不同激素种类及其质量浓度对绿花百合胚性愈伤组织诱导、胚状体和小鳞茎分化及植株再生的影响。结果表明:较适宜诱导胚性愈伤组织的培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+2,4-D 0.1 mg·L~(-1),出愈率达89.29%,小鳞茎发生系数亦达4.7;胚性愈伤组织增殖及小鳞茎发生培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.1 mg·L~(-1),繁殖倍数5.0/35 d;根的诱导则在1/2MS+NAA 0.2 mg·L~(-1)的培养基上进行,生根率达100%,幼苗移栽至排水良好的沙土中,保温保湿培养35 d后,成活率可达90%以上。本研究为保持绿花百合优良品种特性、种苗繁育提供了有效途径,也为保护其野生资源,发展人工栽培和利用胚状体进行无性育种奠定了基础。     

盐生植物海马齿离体再生

建立盐生植物海马齿（Sesuvium portulacastrum）的离体再生体系,为其生物技术改良奠定基础。以海马齿叶片、茎和腋芽为外植体, 在不同激素配比的培养基上进行愈伤组织诱导、继代培养以及不定芽的分化和生根培养。结果表明： 最适愈伤组织诱导的外植体为叶片, 其次为幼嫩的茎段和腋芽。以叶片为外植体, 愈伤组织诱导率最高的培养基为MS＋2.0mg·L^–12, 4-D ＋ 0.5 mg·L^–16-BA ＋ 3%sucrose; 芽分化最适培养基为MS ＋ 1.0 mg·L^–1 2, 4-D ＋ 0.2 mg·L^–1 6-BA ＋ 3% sucrose;生根最适培养基为MS ＋ 3%sucrose ＋ 0.1%AC。炼苗移栽后, 成活率可达80%。     

6-BA、NAA和2,4-D不同配比对荠菜愈伤组织诱导、生长及植株再生的影响

以野生荠菜[Capsella bursa-pastoris （L.） Medic]无菌苗为试材,选取下胚轴、子叶、真叶和叶柄作为外植体,研究了不同外植体的出愈情况,不同植物生长调节剂及配比对愈伤组织诱导、继代及植株再生的影响。结果表明：（1）下胚轴作为外植体出愈情况最好,继代后生长快;（2）下胚轴愈伤组织的最适植株再生培养基为MS＋2～3mg·L-16-BA＋0.2~0.6mg·L-1NAA;（3）愈伤组织培养阶段的2,4-D浓度对其植株再生能力有影响。     

火龙果愈伤组织诱导与植株再生

为了建立火龙果愈伤组织诱导与植株再生体系,以火龙果茎段、幼苗和子叶为外植体进行离体培养试验。结果表明：茎段诱导愈伤组织的最优培养基为1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BAO．5mg·L^-1,诱导子叶愈伤组织的最适培养基是1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BA1．0mg·L^-1,诱导愈伤组织分化的最优培养基为1／2MS＋6-BA4．0mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1,最佳生根培养基为1／2MS＋6．BA1mg·L^-1＋NAA0-3mg·L^-1。     

药用植物金荞麦愈伤组织诱导与植株再生

目前转基因技术已成为植物定向遗传改良的重要手段,而建立稳定高频的离体再生系统是实现遗传转化的基础和前提.本试验以25 ～30 d苗龄的金养麦(Fagopyrum dibotrys)无菌苗叶片、茎节间、叶柄为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究.结果表明:叶片在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 1.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率达到89％.茎节间在MS +2,4-D 2.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率为87％.叶柄在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L+ IBA 0.2 mg/L培养基上的最高诱导率仅为54％.愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为MS +6- BA2.0 mg/L +TDZ0.2 mg/L +NAA0.2 mg/L;金荞麦不定芽在1/2 MS +NAA 0.5 mg/L的培养基上生根效果最好.组培再生植株经炼苗后移栽到田间成活率达80％以上,且生长表现正常.高频完整再生体系的建立,为金荞麦进一步遗传操作和扩大药材资源奠定了基础.     

小叶龙竹（Dendrocalamus barbatus）愈伤组织诱导及植株再生

以小叶龙竹种子为外植体,通过研究MS培养基中不同植物生长调节剂浓度组合对外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响以及不同配比对生根的作用,建立了稳定的繁殖再生体系。试验结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS＋2,4-D5．0mg·L-1;不定芽分化的最适培养基为MS＋2,4-D0．5mg·L-1＋6．BA1．0mg·L-1＋KT0．25mg·L-1;小苗的最适生根培养基为1／2MS＋6-BA0．5mg·L-1＋NAA1．0mg·L-1＋IBA0．4mg·L-1,建立的繁殖再生体系将为进一步利用分子生物学技术对竹类植物进行遗传改良奠定基础。     

多花黄精诱导愈伤组织与不定芽培养基筛选

以多花黄精Polygonatum cyrtonema的根状茎为外植体,通过L9(34)正交试验比较不同植物生长调节剂及其组合对多花黄精愈伤组织诱导的影响,筛选最适生长调节剂配方,同时筛选通过器官发生方式直接成芽较为合适的培养基。结果表明,含有2,4-D和KT的培养基诱导愈伤组织效果显著,多花黄精愈伤组织诱导的最适培养基为MS + 6-BA 2.0 mg·L-1 + 2,4-D 0.5 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1 + KT 1.0 mg·L-1,该培养基的愈伤组织诱导率可达39.10%;培养基MS + 6-BA 4.0 mg·L-1 + NAA 0.2 mg·L-1可诱导多花黄精根状茎直接产生不定芽。     

甜高粱再生体系的建立

利用甜高粱成熟种子和成熟胚作为外植体,通过愈伤组织再生途径建立了植株再生体系。结果表明,成熟种子在添加1.38 g·L^-1脯氨酸、500 mg·L^-1水解酪蛋白和3.0 mg·L^-1 2,4-D的MS培养基上可以较快地诱导出生长状态良好的愈伤组织;成熟胚在添加1.38 g·L^-1脯氨酸、500mg·L^-1水解酪蛋白、2.5 mg·L^-1 2,4-D和0.1 mg·L^-1KT的MS培养基上也能诱导出生长良好的愈伤组织。将愈伤组织转移到MS＋1 mg.L^-1 IAA＋0.5 mg·L^-1 6-BA培养基上诱导芽,然后再转移到MS＋3 mg·L^-1IBA培养基上生根后,可发育成为完整的植株。     

陇东地区野生紫花苜蓿植株再生体系的建立

以陇东地区野生紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,MS为基本培养基,研究划破种皮以及不同生长调节物质种类与配比对愈伤组织诱导和分化影响的结果表明：划破种皮可提高种子发芽率;在外植体中下胚轴的愈伤组织诱导率最高,达92.2%;最佳愈伤组织诱导培养基为MS＋2,4-D2.0mg·L^-1（单位下同）＋NAA1.0＋2.5%蔗糖＋0.6%琼脂,最佳分化诱导培养基为MS＋KT0.5＋NAA0.3＋2.5%蔗糖＋0.6%琼脂,成苗培养基为1/2MS＋NAA0.1＋1%蔗糖＋0.6%琼脂。