用恶性疟原虫红内期体外培养技术筛选人疟动物模型

采用恶性疟原虫红内期体外培养技术筛选人疟动物模型,井用培养的疟原虫接种实验动物进行对比观察。 白掌长臂猿红细胞对海南两个虫株和柬埔寨株都易感,用培养海南l株的猿血接种原输血猿,引起的原虫血疟持续38天,接种后第2周原虫密度升至11.6／104 红细胞)高峰。蜂猴和猕猴对恶性疟原虫都不敏感。实验结果表明,恶性疟原虫体外连续培养技术可作为人疟动物模型初步筛选之用。     

应用间接荧光抗体技术测定免疫猴疟疾抗体

本文报告了以诺氏疟原虫(P.Knowlesi)薄血膜片为抗原,以异硫氰酸荧光黄标记的羊抗人球蛋白为荧光抗球蛋白,对被不同组分的诺氏疟原虫抗原免疫的恒河猴,用间接荧光抗体技术测定其血清中疟疾抗体的实验研究结     

约氏疟原虫蚊期体外培养：动合子和动合子形成的扫描电镜观察

为了开展疟疾防治以及疟原虫生物学的研究,进一步了解在体外培养中疟原虫的发育规律、形态结构等生物学特性,我们于1985年对离体培养的约氏疟原虫约氏亚种动合子和动合子形成进行了扫描电镜的观察。 材料和方法 约氏疟原虫约氏亚种(Plasmalium yoelii yoelii)用血传和蚊传保种。在昆明株小鼠(KM/AMS)体内多次血传做为供血鼠。C_(57)6JB/ax 小鼠保种。定期感染斯氏按蚊(Anpheles stephensis)MEM     

红内期诺氏疟原虫体外培养的研究

本文报道连续进行诺氏疟原虫(Plasmodium knowlesi)体外培养183天的试验。 试验比较了改良Harvard培养液,RPMI 1640培养液和199培养液,我们认为用199培养液为基础培养液,再加入几种生长因素和15％小牛血清,可获得良好结果。该原虫用Trager燃烛法在100毫升三角瓶内装5—6毫升于37℃培养。至少有5批培养均连续进行一个月以上,第一批培养已达l 83天,稀释倍数为5．4×1082。至于另4批,我们认为既已能超过一个月,就可以无限期地连续进行培养,故未继续。培养至6I、120、127和15l天时,取培养物静脉注射健康猴,每 次剂量为十万个已感染疟原虫的细胞,所有动物均显虫血症。除一只猴外均死于感染,存活的猴所注射的是培养1 z0天的样品。当虫血症达11％时,感染逐渐减少,形成低度带血。随后证实,培养127天和151天的疟原虫仍未失去感染性。试验还证明,低温保存的感染血液和新鲜血液同样可用于培养。     

人胚与鼠胚神经干细胞体外培养的差异

为比较人胚与鼠胚神经干细胞体外培养的差异。实验采用具有丝裂原作用的细胞生长因子。结合无血清细胞培养技术从人胚和鼠胚皮层分离神经干细胞。在连续传代过程中观察其体外培养特性,免疫荧光染色检测Nestin抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达,并用流式细胞仪检测神经干细胞分化情况。结果表明：（1）使用单一生长因子即可从鼠胚皮层分离神经干细胞,但在人胚却需同时使用多种生长因子,协同使用bFGF,EGF和LIF是人胚神经干细胞体外培养的较佳条件;（2）鼠胚皮层神经干细胞在连续传代过程中增殖速度快于人胚,其Nestin阳性率和BrdU标记的阳性率亦高于人胚,表明其增殖能力明显高于人胚,（3）人胚神经干细胞较鼠胚更易分化为神经元。     

应用脐带血清体外培养恶性疟原虫的研究

为寻找一种价廉、易得能代替正常成人血清体外培养疟原虫的代用品,本文参照Trager—Jensen蜡烛缸培养法,探讨了用新生儿脐带血清体外培养恶性疟原虫的效果,并与用正常成人血清培养进行了比较。实验结果表明脐带血清不仅能长期维持恶性疟原虫的体外生长,而且其培养效果优于成人血清(P<0.01),是体外培养疟原虫的良好血清来源。     

课堂教学中疟原虫血涂片染色方法的改进

疟原虫血涂片染色是高校寄生虫学实验课中的重要内容。传统的疟原虫血涂片染色采用的是经典的Giemsa染色法,但是染色效果受各种因素影响不稳定,严重影响教学质量。采用Diff-Quik染色方法进行染色发现,血涂片上的红细胞及疟原虫的形态与Giemsa染色结果相比更加明显和典型,染色背景干净无杂质,有利于进一步分辨疟原虫形态和进行数据统计。     

三株抗恶性疟单克隆抗体(M26-32，F5-3F9，F5-4E9)的鉴定

用约氏疟原虫和恶性疟原虫免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与sP2／o细胞融合,获得11株抗恶性疟原虫红内期的单克隆抗体(McAb)。以多种疟原虫(恶性疟,间日疟,卵圆疟,诺氏疟、食蟹猴疟和约氏疟)的感染血片为抗原,进行间接免疫荧光测定(IFA),发现有3株McAb(M26—32,F5—3F9,F5—4E9)与所试6种疟原虫均发生阳性荧光反应。其中M26—32除能与中国海南岛的2个恶性疟分离株结合外,与东南亚、非洲、拉丁美洲的6个恶性疟分离株及卢旺达临床病人周围血中的环状体亦呈阳性反应。在与我国不同地区的间日疟反应时,几株McAb的IFA结果不同,提示不同间日疟原虫株的抗原成分有所差异。这些McAb与马媾疫锥虫和弓浆虫均无交叉免疫荧光反应。因此可能用于检测病人血中的微量疟原虫抗原,为早期诊断疟疾提供有力的工具,并可能用于鉴定不同地区的间日疟原虫。恶性疟原虫体外生长抑制试验结果表明,McAb M26—32能部分抑制疟原虫对。H－亮氨酸的掺入,并能延缓原虫血症的上升,在疟疾保护性免疫中可能起一定作用。     

鼠疟原虫动合子体外培养及其生物学活性的研究

体外形成的动合子能否感染蚊媒并继续在蚊体内发育是评价体外形成动合子发育成熟的重要指标。它关系到动合子-卵囊阶段的体外培养和整个蚊期疟原虫的培养。由于体外形成动合子的培养物中含有大量各阶段的疟原虫,对检验体外形成动合子的生物活性造成一定的困难。为此我们对约氏疟原虫动合子进行培养和分离,并检测了体外形成动合子的生物活性。     

体外培养的食蟹猴疟原虫感染斯氏按蚊初报

食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)的生物学特征、形态、生活史、致病力和引起的真正复发与人体间日疟原虫(Plasmodium vivax)相似,故作为间日疟的模型,广泛用于疟疾的各项研究。但该疟原虫需要用猴传代,保种,既不经济,猴源也很困难。Vaderberg(1977)和Campbelt(1982)用体外培养的恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)感染费氏按蚊(Anopheles freeborni)获得了成熟的子孢子,并成功地感染黑猩猩(Pontroglodytes)和夜猴(Aotus trivigatus)。但体外培养的食蟹猴疟原虫能否感染按蚊尚未见报道。因此试用液氮中保存的食蟹猴疟原虫经体外培养,…     

牛脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定

为了给组织工程提供种子细胞,对牛间充质干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)进行体外分离培养。首先应用胶原酶消化法分离牛ADSCs,进行体外培养、连续传代,并观察细胞的形态变化,通过细胞计数绘制生长曲线,细胞压片进行染色体分析,采用细胞免疫荧光化学方法检测细胞表面标记,利用成骨分化和成脂分化检测其分化能力。结果显示牛ADSCs体外培养时细胞形态呈成纤维细胞样,增殖稳定;Vimentin、CD49d、CD13表达呈阳性,CD34表达呈阴性;成骨诱导条件下的细胞碱性磷酸酶活性高,茜素红染色呈阳性;成脂诱导条件下细胞周围脂滴明显,油红-O染色呈阳性。结果证明牛ADSCs体外生长稳定、增殖速度快、定向分化能力强,简易的体外分离培养及诱导方法为其在组织工程中的应用奠定了基础。     

鼠疟原虫蚊期配子生殖的体外培养——在Eagle MEM培养基中发育的观察

为预防疟疾,开展疟原虫生物学、免疫学等方面的研究,从而设想建立疟原虫蚊期(配子生殖、孢子增殖)的体外培养系统。有关鼠疟原虫蚊期配子生殖的体外培养,国内外曾有不少的报道。近年来,国内曾用多种培养基对离体培养鼠动合子进行了初步观察;同时又在鼠疟动合子的形成和离体培养方法上进行了研究;国外学者罗萨利斯-龙奎尔(Rosales-Ronquillo)等在使用含斯氏按蚊细胞原代培养物的Eagle MEM.培养基和鲦鱼上皮细胞系Eagle MEM培养基对离体培养伯氏疟原虫的动合子进行了活体观察;斯皮尔(Speer)也使用了含该种蚊细胞的Eagle MEM培基进行鼠疟     

人二倍体细胞2BS株在不同培养瓶中的培养特性研究

目的:在同等试验条件下,比较二倍体细胞2BS株在T75培养瓶和玻璃方瓶培养的生物学特性及传代极限。方法:复苏同一批次二倍体细胞2BS株,在两种容器下进行极限传代,对各代次培养期间细胞形态进行观察、细胞计数及培养液的PH测定等。结果:T75培养瓶培养2BS细胞,细胞贴壁迅速,增值能力强,经显微镜观察细胞形态,均优于玻璃方瓶,并能连续传代至72代。结论:人胚肺二倍体细胞在T75培养瓶内连续传代,不但能迅速增殖,而且比玻璃方瓶更长期的保持细胞生物学特征。     

大鼠骨髓基质干细胞的分离培养与向神经元样细胞诱导分化的实验研究

目的 探讨大鼠骨髓基质干细胞的提取、分离培养和体外扩增的最佳条件,研究其在体外培养中定向诱导分化为神经元样细胞的可能。方法 通过密度梯度离心和贴壁培养法从成年大鼠骨髓中分离骨髓基质干细胞,进行培养扩增,观察其生长特性;用2-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)对传代细胞诱导分化,并通过免疫细胞化学染色鉴定分化细胞的类型。结果 原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落14d时接近融合,传代后,细胞体积变大,约5～7d传代一次。β-ME诱导后,70％以上的细胞在形态上呈神经元样,免疫细胞化学染色呈NSE阳性,GFAP阴性,说明诱导分化的细胞为神经元,而不是星形胶质细胞。结论 骨髓基质干细胞在体外培养条件下生长良好,并可连续传代;在β-ME作用下可被诱导分化为神经元样细胞。     

贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法。研究MSCs的生物学特性,为血管组织工程提供理想的种子细胞。方法贴壁培养法分离纯化大鼠MSCs体外培养和连续传代,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化;利用MTT法测定MSCs的生长曲线;行免疫组化方法鉴定MSCs膜抗原;分别加成骨、成脂肪诱导剂后MSCs体外培养1到3周,分别做碱性磷酸酶(ALP)、VonKossa染色及油红O染色,观察细胞形态变化、成骨及成脂肪分化结果。结果MSCs体外培养生长状况良好,呈均一的成纤维细胞样,表达波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),不表达层粘连蛋白(Laminin)、CD34、VIII因子相关抗原(VIII)。经体外诱导后具有多向分化潜能。结论贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSCs,用此方法培养的细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,为其成为血管组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。     

诺氏疟原虫感染四川短尾猴的研究

诺氏疟原虫(Plasmodium knowlesi)红细胞内期裂殖周期短(为24小时),毒力强,因而可利用此二特点观察感染动物的实验效果,是在疟疾研究工作中较常采用的虫种。也曾有用其红内期制备抗原,检测恶性疟患者血清中抗体效果甚好的报道。过去,多用恒河猴作为诺氏疟原虫的实验动物,在国内恒河猴产量尚远不能满足科研工作需用时,有必要探寻新的猴种,以补充恒河猴数量的不足。     

用“199”及“RPMI1640”在体外连续培养红内期猴脆疟原虫

脆疟原虫(Plasmodiumfragile)是寄生于印度及斯里兰卡的猴子(Macacaradiata及M.sinica)体内的一种疟原虫,在实验室可以感染恒河猴(M.rhesus)。感染恒河猴的脆疟原虫与感染人的恶性疟原虫有很多相似之处。1979年W.Chin等用Trager—Jensen培养恶性疟原虫的方法在体外用RPMI1640连续培养红内期脆疟原虫7个月以上,并应用于恒河猴模型研究疟疾疫苗(Collins,1979)。W.Chin于1979年10月来我国讲学时,将保存于美国疾病控制中心(CDC)实验室的Nilgiri株脆疟原虫赠送我国供研究用。我所获得此株疟原虫后,即接种保存于四川产的恒河猴及青猴体内,…     

牛肾细胞传代稳定性研究

为了掌握牛肾细胞在体外连续传代过程中的增殖特点,将原代牛肾细胞培养形成良好单层后,按4×104个细胞/cm2连续进行传代,测定毎代次收获的细胞数,并记录每代细胞培养时形成良好单层的时间。结果显示,原代牛肾细胞传代至24代时,培养96h仍能形成良好单层,且细胞形态基本保持一致,遗传物质稳定,为建立牛肾细胞库奠定了基础。     

诺氏疟原虫不同组分的抗原抵抗疟疾感染的实验研究

我们用乳剂制造器崩解原虫,以分级离心的方法提纯抗原,并将不同组份的抗原分别进行动物实验,结果表明,此抗原可能属于原虫胞膜微粒体成分的l号抗原。在不加任何佐剂的条件下,对诺氏疟原虫的攻击感染有较强的抵抗能力。     

诺氏疟原虫裂殖体期感染红细胞的分离方法

在疟疾免疫学研究中,为了制备裂殖子抗原,需要从感染血中分离出裂殖体期疟原虫昕寄生的红细胞,并对其进行短期培养,以收集细胞外的游离裂殖子。我们借用木下喜博用阿拉伯胶液密度梯度离心分离淋巴细胞的方法,分离诺氏疟原虫裂殖体期感染的红细胞。获得了一些初步结果。