湖北宜昌奥陶纪大湾组的三叶虫新种Ovalocephalus eoprimitivus sp. nov.

本文记述湖北宜昌地区奥陶纪大湾组下部的一个三叶虫新种Ovalocephalus eoprimitivus sp.nov.,主要特征是头鞍缺失前颈环横沟。Ovalocephalus Koroleva为泛冈瓦纳的标志分子,在中国奥陶系分布极为广泛。这一新种的时代为弗洛期—大坪期,系该属目前所知地层层位最低的分子。     

多头绒泡菌PSCL32.5蛋白的性质及其含量在细胞周期中的变化

用免疫印迹技术检测到低等真核生物多头绒泡菌中含有两种与HeLa细胞SC35单克隆抗体反应的蛋白,其分子量分别为32．5kD和82．5kD,将其命名为PSCL32．5和PSCL82．5。用SDS—PAGE技术对PSCL32．5蛋白进行了纯化,用等电聚焦方法确定PSCL32．5蛋白的等电点为6．19。应用免疫印迹技术检测多头绒泡菌细胞周期不同时相的PSCL32．5含量,发现该蛋白的含量在细胞周期中是变化的,在S早期时含量最低,从S期到G2期含量逐步增高,G2期后期含量最高。     

北京房山16000—7000年以来的植被与环境变迁

对北京房山东甘地8．2m的剖面取样197块,进行高分辨率的孢粉分析和序列的~(14)C测年,对照烧失量测定、炭片统计、表土花粉和古地磁特征等分析,揭示了北京房山里今16000－7000年植被演替及环境变迁的六个阶段、约15780－14700aB．P,当时乔木稀疏,草本类以蒿、藜为优势,由于缺乏水生沼生植物,反映研究区气候干旱。约14700－13400aB．P,由于降雨增多,温度增大,平原区形成小的沼泽环境,水生植物繁盛,泥炭发育。但区域性针阀混交林中主要以寒湿性针叶树种为主,反映寒冷湿润的气候特征。在14060－13520aB．P．泥炭积累中断,为一干冷的气候突变期。约13400－12600aB．P,针阀混交林在山区又进一步发展,平原区水生植物减少,沼泽逐渐疏干,反映气候趋于暖干。约12600－11400aB．P,针阀混交林中呈现以针、阔叶树种交替占优势的现象。水生、湿生植物减少,反映气候有冷暖的波动。约11400－9600aB．P,植被稀疏。在10600－10300aB．P,出现了与新仙女木期时段相当的冷干气候。约9600－7000aBP,阔叶树种增加,反映由典型草原向森林草原的演替,水生植物不繁盛,气候由冷干向温暖转变。     

4．1B蛋白表达与非小细胞肺癌进展的关系

目的：探讨4．1B蛋白表达与非小细胞肺癌（NSCLC）进展的关系。方法：收集166例临床手术切除、石蜡包埋的原发NSCLC组织,免疫组化检测4．1B蛋白表达,分析其与NSCLC进展的关系。结果：26例4．1B蛋白表达于细胞膜上。69例4．1B蛋白表达缺失,71例胞浆表达。包括胞浆表迭在内,4．1B蛋白异常表达率为84．34％。肿瘤最大直径≤3cm组、未转移组、临床分期I和II期组4．1B蛋白胞膜表达阳性率分别高于肿瘤最大直径〉3cm组、转移组、III和Ⅳ期组,差异有统计学意义（P〈0．0．1）,但4．1B细胞浆表达阳性率在各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：在NSCLC组织内,4．1B蛋白存在表达缺失现象,也存在异常定位现象。表达于细胞膜的4．1B蛋白在NSCLC发展过程中可能发挥抑制作用,其表达缺失可能促进肿瘤进展。     

海洋真菌Xylaria sp.(No.2508)生产xyloketal B的发酵优化

对海洋真菌Xylariasp．（No．2508）生产xyloketa]B的摇瓶发酵过程进行了初步优化。结果表明,Xylariasp．（No．2508）在培养120h时xyloketalB产量最高,当培养168h后菌体进入衰亡期且xyloketalB迅速降解,因此Xylariasp．（No．2508）生产xyloketalB的最适发酵周期为120h;Xylariasp．（No．2508）合成xyloketalB的过程及用乙酸乙酯萃取xyloketalB的过程对pH非常敏感,其中最适xyloketalB生产的发酵液初始pH为5．7,利用乙酸乙酯萃取xyloketalB时的发酵液最适pH为3。0;最适接种量为10％（v／v）;接种前发酵液中加入10g／L的大孔树脂XAD-16可以降低某些代谢产物对xyloketalB合成的抑制作用,从而使产量提高2倍左右,而菌体进入稳定期以后加入大孔树脂XAD-16对产物产量没有影响。     

枸杞果实铁型超氧物歧化酶的纯化及性质

枸杞果实Ｆｅ－ＳＯＤ粗提液经硫酸铵盐析、离子交换柱层析及凝胶过滤,纯化到电泳单班点均一程度。纯化的Ｆｅ－ＳＯＤ分子量为４４．６ｋＤ,亚基分子量为２２．０ｋＤ。金属元素分析表明,每分子酸含１个Ｆｅ原子。该酶在紫外区最大吸收值为２７８ｕｍ。Ｈ２Ｏ２明显抑制该酶活性,ＫＣＮ对酶活性无影响。该酶氨基酸组成与高等植物和蓝绿藻的Ｆｅ－ＳＯＤ相似,但它具有较高甘氨酸,酸性氨基酸与碱性氨基酸比值高于高等植物而与低等植物及原核生物相近。     

电压门控快钾通道蛋白Kv4.3的抗体制备及检测

Kv4(voltagegated K^ channel4)是在哺乳动物心脏和脑组织中广泛表达的一类钾离子通道蛋白．它主要介导心肌细胞和神经细胞中的A-型(快速失活型)K^ 电流,是构成中枢神经系统和心肌细胞中的快速失活外向型电流的基础．Kv4．3是电压门控钾离子通道3种α亚基之一．通道中含有许多具有调节作用的辅助亚基,它们通过与Kv4．3互作实现对通道的调节．本研究根据人类氨基酸序列以MAPs法制备抗Kv4．3抗体．MAP由4条相同的17肽段连接成锥形结构分子．以MAP或MAP与佐剂免疫新西兰白兔,抽提了免疫前血清和免疫后血清,并对抗体的滴度进行评价．MAPs在白兔体内诱导出了效价比为1：1000的抗Kv4．3特异性抗体．     

农杆菌转化获得转B．t．基因水稻及其生物学鉴定

以水稻主栽品种"秀水11"和"春江11"预培养4d未成熟胚为转化受体,经农杆茵LBA4404／pGBI4A2B(含B．t．基因)感染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率达44％～70％,转化植株产生频率达27％～64％。转基因植物总DNA经PCR和Southernblot分子杂交试验表明,T-DNA上的外源基因已整合到水稻的基因组里。对转B．t．基因水稻植株进行了两种水稻主要害虫纵卷叶螟和二化螟的饲虫试验。与对照相比,7d后纵卷叶螟幼虫死亡率达31％～49％,同时纵卷叶螟对转基因水稻叶片的危害程度大大减轻。二化螟在咬食转B．t．基因水稻植株7d后的校正死亡率达15％～71％,30d后多数转基因水稻仍能正常抽穗,表明转基因水稻对上述害虫具有一定抗性。     

黄连细胞培养物中小檗碱的分离与鉴定

用黄连幼叶切块,接种在含1．0～2．0mg／L 2,4-D和0．1mg／LKT的6．7-v固体培养基上,诱导形成愈伤组织。选择较松散的愈伤组织转入液体悬浮培养,获得游离细胞和细胞聚集体。通过平板培养和细胞株的筛选．选择小檗碱含量较高的细胞株。经35次转代培养后,进行固体、液体培养。收集悬浮培养细胞进行化学提取和分离,获得黄色晶体,经TLc、UV、IR、MS鉴定分析为小檗碱,与天然植物提取分离的小檗碱具有相同的生理活性。     

出芽短梗霉菌株CBS591．75和DSM2404发酵生产聚苹果酸的研究

研究了出芽短梗霉蕾株CBS591.75和DSM2404在2L发酵罐中发酵生产聚苹果酸的过程。并以CBS591．75为菌种进行了20L规模的初步放大试验。结果表明,发酵过程可以分为3个阶段,第一阶段从接种开始。到发酵液的pH上升到最高点并开始下降为止．这一阶段中细胞缓慢增长,没有聚苹果酸产生;第二阶段以pH迅速下降和聚苹果酸大量产生为特征。这一阶段中聚苹果酸的产生与细胞增长相平行;在第三阶段中,聚苹果酸产生速度减慢．pH趋于稳定。试验结果还表明。菌株CBS591．75产生聚苹果酸的能力大于DSM2404,发酵结束时,前者聚苹果酸的产量为6．9g／L,而后者为5．4g／L。CBS591．75菌种在20L规模的初步放大试验表明,发酵144h后发酵液中聚苹果酸浓度为8．Og／L,稍高于2L发酵罐的结果,为今后的放大提供了依据和参考。     

简讯

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枯草杆菌蛋白酶E的蛋白质工程

用定点突变和随机突变的方法,对枯草杆菌碱性蛋白酶E基因进行改造。突变后的基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pBE-2中,在碱性和中性蛋白酶缺陷型的枯草杆菌DBl04中进行表达,得到突变种的碱性蛋白酶．它们的突变位点分别是(M222A)、(M222A、N118S)、(M222A、N118S、Q103R)、(M222A、N118S、Q103R、D60N)。各突变种酶的性质测定 结果表明．M222A突变使酶抗氧化,N118S突变使酶增加热稳定性,Q103R和D60N突变虽然能增加酶的比活,但使酶的热稳定性大大下降,尤其是D60N突变使酶变得极不稳定。野生型碱性蛋白酶与(M222A)突变种的等电点均为8．92．而M222A,N118S)。(M222A,N118S ,Ql03R)和(M222A,118S．Q103R,D60N)突变酶分别为8.88．9.10和9．17。用Nsuc-AAPF-pNA作为底物时酶反应景适pH值为7.5～9.5,而用酪蛋白底物时最适pH值为10～12。     

非洲爪蟾孵化酶的cDNA结构及其部分生物化学特性的研究

以UVS．2为探针从第25期非洲爪蟾胚胎头背部的cDNA文库中筛选出了一个1．8kb的孵化酶基因(xhe),其转录产物最早出现于第17期胚胎的头背部,在第30期转录量达到高峰,随后便逐渐减少。该基因含有编码514个氨基酸的一个开框阅读框架,含有信号肽和原酶序列。所推测出的成熟蛋白有425个氨基酸,包括位于N一端的含有200个氨基酸的金属蛋白酶序列和位于C端的两个各110个氨基酸的CUB重复区。而UVS．2只代表该基因C端大约3／4的部分。同时还发现该酶分子量为60kDa,是一种胰蛋白酶类型的金属蛋白酶。它很不稳定,在纯化过程中极易降解为40kDa分子。60kDa分子具有很强的卵黄膜溶解活性和蛋白酶活性。其中CUB重复区很可能在介导卵黄膜和40kDa分子中起着重要作用,而40kDa分子很可能是在纯化操作过程中,由60kDa分子发生降解或自身降解丢失了两个CUB重复区而形成的,它只是60kDa分子中的一个金属蛋白酶主功能区,所以它没有卵黄膜溶解活性,尽管仍具有很强的蛋白酶活性。     

日本龟蜡蚧卵期的预测预报研究

日本龟蜡蚧是园林花卉、林木和果树的重要害虫,繁殖量大,除初孵若虫外,体被较厚蜡质,为各种防治增加了难度．准确测报若虫盛孵期,是防治该虫的关键．利用自然变温测定卵期的发育起点温度和有效积温,经测定悬铃木：C=18.02±1.69（℃）,K=142.68±29.21（DD）;大叶黄杨：C=18.54±0.74（℃）．K=129.34±11.93（DD）,桅子花：C=19.97±0.87（℃）,K=106.81±13.92（DD）,这种测定简便易行而又更符合实际,仅计算较为复杂．     

北京地区油菜软腐病病原菌的鉴定

摘要:【目的】确定引发北京地区油菜［Brassica campestris L．ssp．chinensis (L.) Makino var． communis Tsen et Lee］软腐病的病原。【方法】结合病原菌形态、BIOLOG 及生理生化、16S rＲNA 基因序列及亚种IGS区特征分析,对从北京大兴和通州区油菜软腐病样中病原菌进行生物学鉴定。【结果】分离的40 个菌株均能引发 油菜软腐病,但分别为胡萝卜果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum) 的2个不同亚种,其中13株为P．carotovorum subsp．carotovorum(Pcc),另27株为P．arotovorum subsp． brasiliensis(Pcb)。接种白菜(Brassica campestris L．ssp．pekinensis)致病力测定分析表明,亚种内、来源相同与16S rRNA基因序列相同的菌株间均存在明显的致病力分化。【结论】Pectobacterium carotovorum subsp．carotovorum和Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliensis是引发北京地区油菜软腐病的致病菌,后者为首次报道能引起白菜类蔬菜软腐病的常见致病菌。     

蚕丝固定化脂肪酶的研究

研究了蚕丝固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化脂肪酶的稳定性。试验结果表明：蚕丝与对-β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)进行反应的最适条件是PH=10．8,SESA：2．0g／g蚕丝,反应生成的对氨基苯磺酰乙基蚕丝(ABSE-蚕丝)经重氮化后与脂肪酶偶联的最适条件是：pH=7．5,偶联时间>10h。加酶量为168～308u／g蚕丝时,所得固定化脂肪酶活力为106～160u√g蚕丝．此时固定化冀的活力回收率较高(>52％)。固定化脂肪酶稳定性较高．其操作半衰期约为250h。     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达

为了得到t—PA组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达,将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子(enhancer)去除．构建了FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。酶切线性化后．采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr^-)。氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞,混合加压．挑选克隆。在1×10^-7mol／L MTX压力下。获得表达水平达1 500～2500Iu/106细胞·24h的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好．倍增时间约为36h．且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。     

贵州三都地区阿仑尼格期同高组疑源类Striatotheca的两个新种

Ｓｔｒｉａｔｏｔｈｅｃａ是地中海疑源类生物区的特征分子，该属主要分布于阿仑尼格期至兰维恩期。描述了产于贵州三都地区同高组下段（Ｎ２—Ｎ４笔石带）Ｓｔｒｉａｔｏｔｈｅｃａ的两个新种，它们是Ｓ．ｇｒａｎｕｌａ－ｔａｓｐ．ｎｏｖ．和Ｓ．ｓａｎｄｕｅｎｓｉｓｓｐ．ｎｏｖ．     

与细胞周期G2/M期进程相关的H2AX磷酸化

γH2AX焦点(foci)被普遍当做DNA双链断裂（DSB）损伤的分子标志物.为探 讨细胞周期进程相关的H2AX磷酸化规律特征,采用胸腺嘧啶双阻滞结合噻氨酯哒唑(nocodazole)的后续处理,将HeLa细胞同步于有丝分裂的前中期．然后,用流式细胞仪检测细胞周期、Western印迹和免疫荧光法,观察γH2AX表达和γH2AX焦点的形成．结果显示,细胞进入G2/M期和有丝分裂过程中,γH2AX水平显著增加 ;在无DNA DSB发生的情况下,部分M期细胞中也存在大量的γH2AX焦点．随着细 胞完成有丝分裂从M期退出再进入G1期,γH2AX的表达水平逐渐降低．这种 γH2AX表达变化特征与G2/M期密切关联的PLK1和Cyclin B1的表达规律相类似． 在4 Gy大剂量照射下,HeLa细胞于照后8 到12 h出现明显的G2/M期阻滞．γH2AX 焦点数在照后1 h达高峰,随后降低,照后8 h又上升,出现了第2个峰值．与之不同的是,在1 Gy低剂量照射下,细胞的G2/M期阻滞微弱,γH2AX焦点数在照后 0.5 h最高,随后下降,且无反弹,符合DNA DSB的修复动力学特征．因此,将γ H2AX当做DNA DSB分子标志物时,还需要考虑细胞周期变化的影响．γH2AX适合 作为1 Gy以下照射的DNA双链断裂损伤的分子标志．     

小麦品种联合试验效应及理论依据──Ⅱ.联合方差分析的一些理论考虑

本文以一个国家级的小麦品种试验结果为材料,检验了方差分析的基本假定相符情况．结果表明,在总体上14个试点间方差不同质．对14个试点分别进行3项检验,其中有7个试点的结果违背了假定．对违背假定的试点数据在统计分析前应先作数据转换后再作方差分析．