盐生植物海马齿离体再生

建立盐生植物海马齿(Sesuvium portulacastrum)的离体再生体系,为其生物技术改良奠定基础。以海马齿叶片、茎和腋芽为外植体, 在不同激素配比的培养基上进行愈伤组织诱导、继代培养以及不定芽的分化和生根培养。结果表明: 最适愈伤组织诱导的外植体为叶片, 其次为幼嫩的茎段和腋芽。以叶片为外植体, 愈伤组织诱导率最高的培养基为MS+2.0mg·L^–12, 4-D + 0.5 mg·L^–16-BA + 3%sucrose; 芽分化最适培养基为MS + 1.0 mg·L^–1 2, 4-D + 0.2 mg·L^–1 6-BA + 3% sucrose;生根最适培养基为MS + 3%sucrose + 0.1%AC。炼苗移栽后, 成活率可达80%。     

麻竹花药培养及再生植株的获得

以麻竹（Dendrocalamus latiflorus Munro）花药为材料, 于M8＋2 mg·L^–1 NAA ＋0.5 mg·L^–1 6-BA＋15 mg·L^–1 PAA＋7.5 mg·L^–1 STS＋500 mg·L^–1 CH＋100 mg·L^–1 proline＋100 mg·L^–1 glutamin＋5.4% maltose＋0.8% agar的诱导培养基上成功诱导出胚性愈伤组织, 在此培养基上继代可形成体胚并分化成苗, 初步建立了麻竹花药一步成苗的再生体系。     

普通小麦品种Alondra's遗传转化体系的建立

小麦(Triticum aestivum)幼胚愈伤组织的诱导和分化再生有高度依赖基因型特征。为了建立和优化Alondra’s的高效再生及遗传转化体系, 为小麦遗传转化提供更多的受体基因型, 以Alondra’s的幼胚为外植体, 研究了培养基种类、不同激素配比等对其幼胚愈伤组织诱导及再生的影响。结果表明, 在使用N₆培养基时, 添加3 mg·L^–1的2,4-D并附加1 000 mg·L^–1的CH对愈伤组织的诱导效果较好; 添加4 mg·L^–1的ZT、不附加IAA对愈伤组织的分化效果最好。通过构建植物表达载体pCAMBIA1301-220.6, 利用基因枪法将HYG基因导入Alondra’s幼胚愈伤组织中, 以建立Alondra’s的高效遗传转化体系。结果在含100 mg·L^–1潮霉素的选择培养基上进行筛选、分化, 获得了30棵抗性植株。经PCR检测, 其中5株为阳性转基因植株, 转化率为0.5%。Alondra's遗传转化体系的建立丰富了小麦遗传转化的基因型, 为小麦品种的转基因改良和在不同背景下研究基因的功能奠定了良好的基础。     

大花酢浆草的组织培养与快速繁殖

以大花酢浆草(Oxalis bowiei)鳞茎为外植体, 对适合大花酢浆草生长的培养基进行筛选, 并建立了大花酢浆草的无性繁殖体系。结果表明, 丛生芽诱导及增殖的最适培养基为MS+0.25 mg·L^–1 NAA, 继代苗在MS培养基中生根效果最好。     

农杆菌介导南瓜遗传转化体系的建立

以南瓜金辉一号(Cucurbita moschata ‘Jinhui 1’)为实验材料, 利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化南瓜子叶节, 研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间, 抗生素羧苄青霉素(Carb)、头孢霉素(Cef)以及筛选剂卡那霉素(Kan)等因素对离体不定芽的影响, 建立了南瓜最适遗传转化体系。结果表明: 外植体预培养0天,侵染时间30分钟, AS浓度为100 mg·L^–1, 共培养5天可获得最高遗传转化效率; 最适除菌剂为Cef, 其最适浓度为500mg·L^–1; 最适Kan筛选浓度为100 mg·L^–1; 在MS培养基上培养抗性芽生根, 经PCR和Southern blot检测, 证明为转基因植株。     

甜椒花药培养及再生植株技术体系的研究

为建立甜椒(Capsicum annuum var.grossum)花药培养及再生植株技术体系,对影响花药胚状体诱导和分化的因素进行了研究。结果表明,培养基组成对胚状体诱导率的影响以NAA基本培养基椰乳KT,最佳胚状体诱导培养基为NTH+0.1 mg L–1 NAA+10%椰乳+1 mg L–1 KT+50μmol L–1 Ag NO3+30 g L–1蔗糖+5 g L–1琼脂+2 g L–1活性炭。花药经过24 h低温预处理和8 d高温预培养后,胚状体诱导率可达23.38%。植物生长调节剂对胚状体出芽率的影响为6-BANAAIAA,最佳胚状体分化培养基为NTH+1 mg L–1 6-BA+0.3 mg L–1 NAA+0.1 mg L–1 IAA+30 g L–1蔗糖+5 g L–1琼脂。胚芽转入1/2MS+0.5 mg L–1 IBA+30 g L–1蔗糖+5 g L–1琼脂培养基后,生根率可达92.5%。     

绒毛白蜡体胚诱导和植株再生

该文探讨了基本培养基、外植体、培养条件以及植物生长调节剂配比对绒毛白蜡(Fraxinus velutina)体胚诱导的影响。结果表明,胚根是诱导体胚发生的最佳外植体;体胚诱导的最适培养基为改良MS+2 mg·L~(–1) 6-BA+0.1 mg·L~(–1) NAA、30g·L~(–1)蔗糖、5.0 g·L~(–1)琼脂;暗培养20天后进行光照培养(14小时光照/10小时黑暗),光密度为100~(–1)20μmol·m~(–2)·s~(–1),昼温度(25±2)°C,夜温度(18±2)°C;成功诱导出体细胞胚并获得再生植株,体胚诱导率可达59.8%,体胚萌发率达81.2%。壮苗最适培养基为改良WPM+0.5 mg·L~(–1) 6-BA+0.2 mg·L~(–1) ZT+0.01 mg·L~(–1) NAA。生根最适培养基为改良1/2MS+1.0 mg·L~(–1)IBA+0.05 mg·L~(–1) NAA+20 g·L~(–1)蔗糖,生根率高达97.3%,试管苗移栽成活率达97.8%。     

珍稀濒危植物珙桐胚的萌发与快速繁殖

首次采用均匀设计和回归分析方法对影响珙桐(Davidia involucrata)胚萌发的3种因素(基本培养基、赤霉素和活性炭)进行优化, 并利用萌发胚建立了珙桐的高效再生体系。 利用回归方程得出胚萌发的最优条件为: 在含有0.5 mg.L^{- 1} IBA和1 mg.L^-1 6-BA的1/2MS培养基中添加2.85 mg.L^-1 GA3和0.25 g.L^-1活性炭。在验证实验中珙桐胚萌发率为87.72%, 与预测值无显著差异。 最优的芽诱导与增殖条件为: 添加0.1 mg.L^-1 NAA和2.0 mg.L^-1 6-BA 的WPM培养基, 增殖系数为4.34。在生根培养基中增殖的芽生根率高达90%, 移栽成活率为71%。     

乌桕不同外植体高效再生探索

以乌桕的成熟胚、胚乳、叶片和茎段为外植体,建立高效、稳定的组培快繁再生体系,并成功获得其再生苗.结果表明:(1)全胚乳带胚的愈伤组织诱导率达90%,其愈伤组织继续在MS+1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 6-BA培养基上培养,不定芽最多达15个/外植体.(2)去胚乳的胚不加调节剂则胚直接萌动成苗,萌动率和成苗率可达100%;去胚乳的胚在MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 6-BA最佳培养基中培养,其胚轴处可直接诱导不定芽,最多达6个/外植体.(3)无菌苗叶片在MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 6-BA培养基中诱导的有效不定芽数最高达18个/外植体,诱导率达90%.(4)茎段在MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1~0.3 mg·L-1 6-BA培养基上不定芽的诱导率较高(100%),直接诱导的不定芽数最多达17个/外植体.(5)芽苗在1/2MS+0.5 mg·L-1 IBA上生根率达到100%,但根系较细弱,而在MS+1.0 mg·L-1镧稀土中的生根率达100%,且根系粗壮;生根的小苗练苗移栽后温室内成活率为89.2%,移栽到室外沙质土壤中的成活率为68.9%.     

石龙尾(Limnophila sessiliflora BI.)的组织培养与快速繁殖技术研究

以石龙尾(Limnophila sessiliflora BI.)沉水枝带节茎段为外植体进行离体培养,研究外植体灭菌方法以及培养基中不同生长调节剂的浓度对其增殖、生根的影响。结果表明:以0.1%的HgCl2为灭菌剂,采用4 min+4 min、间歇4 h的间歇灭菌法,可以获得成活的无菌外植体15%;在1/2 MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.1~0.2 mg·L^-1的增殖培养基上培养35 d,试管苗的增殖系数可达30.8以上;在1/2 MS+6-BA 0.3 mg·L^-1+NAA0.5 mg·L^-1的生根培养基上培养28 d后,可获得具3~5个侧枝的生根苗,平均每株生根数4.8条;炼苗后移植成活率100%。     

野葛叶片和茎段高频再生体系的建立

探讨几种因子对野葛叶片和茎段高频再生体系建立的影响。采用植物组织培养、正交实验和单因子实验的方法。野葛叶片和茎段的最佳消毒方式为70%酒精处理30 s后再用0.1%HgCl₂处理15 min;野葛叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 2 mg·L^-1,野葛茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L^-1+6-BA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 2 mg·L^-1;暗培养更有利于野葛愈伤组织的诱导;野葛叶片和茎段愈伤组织诱导的最佳蔗糖浓度均为30 g·L^-1;野葛叶片愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+NAA 1.0 mg·L^-1+6-BA 3.0 mg·L^-1,而野葛茎段愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+ NAA 0.5 mg·L^-1+KT 2 mg·L^-1;光照培养更有利于野葛叶片和茎段愈伤组织芽的再分化;野葛叶片愈伤组织再生芽生根的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 0.5 mg·L^-1,而野葛茎段愈伤组织再生芽生根的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 3.0 mg·L^-1;野葛叶片和茎段愈伤组织再生芽生根的最佳蔗糖浓度均为30 g·L^-1;叶片再生苗移栽的最佳PP₃₃₃浓度为1.0 mg·L^-1,茎段再生苗移栽的最佳PP₃₃₃浓度为3.0 mg·L^-1;叶片和茎段再生苗的最佳移栽基质均为蛭石:珍珠岩（2:1）。     

桔梗花药培养初报

本试验把花粉发育至单核靠边期的桔梗花药接在6种不同组合的培养基上诱导愈伤组织,并把诱导的愈伤组织转接到分化培养基,试图得出单倍体植株。结果表明：诱导率最高的培养基组合是N6 + 2,4-D 0.2mg·L^-1 + 6-BA1.0 mg·L-1,诱导率为89.6%;在N₆+6-BA1.0 mg·L^-1 + NAA0.5 mg·L^-1的分化培养基上最高分化率可达58.4%;经根尖压片检查染色体数目结果,分化的绿苗中弱小的植株是单倍体植株。     

孝顺竹愈伤组织增殖培养基优化研究

为筛选适宜孝顺竹愈伤组织继代增殖培养基,控制褐变发生,提高再生体系效率,对培养基组成如5种基本培养基、6种有机添加物、7种糖类和5种大量元素等因子进行试验分析。结果表明：培养20 d,基本培养基以MS效果较好,愈伤组织增殖2.8倍,白至淡黄色,致密;有机添加物以1.0 g·L^-1脯氨酸效果较显著,愈伤组织增殖3.64倍,淡黄色,致密均一;碳源以30 g·L^-1麦芽糖效果较好,愈伤组织增殖2.96倍,白至淡黄色,致密。5种大量元素中NH₄NO₃对孝顺竹愈伤组织增殖的影响达到显著水平,以825 mg·L^-1为较佳浓度,培养29 d愈伤组织增殖可达5倍以上,部分出现根分化;适宜孝顺竹愈伤组织培养的大量元素组合为：KNO₃ 475 mg·L^-1+NH₄NO₃ 825 mg·L^-1+MgSO₄·7H₂O 185 mg·L^-1+KH₂PO₄ 340 mg·L^-1+CaCl₂·7H₂O 440 mg·L^-1。     

濒危植物珙桐的组织培养与植株再生

以珙桐冬芽为材料进行组织培养和植株再生研究,结果表明：珙桐冬芽直接诱导丛生芽的最适培养基为WPM+NAA 0.2 mg·L^-1+6-BA 3.0 mg·L^-1+AC 2.0 g·L^-1;珙桐带芽茎段增殖的适宜培养基为WPM+NAA 0.05 mg·L^-1+6-BA 1.0 mg·L^-1+GA₃ 2.0 mg·L^-1+AC 2.0 g·L^-1;生根最佳培养基为White+IBA3.0 mg·L^-1+6-BA 1.0 mg·L^-1+AC 2.0 g·L^-1,在此条件下,根发育良好,植株健壮;组培苗炼苗后移栽,成活率可达80%。     

江西铅山红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织诱导及其再生体系的建立

以江西铅山红芽芋脱毒苗为试材,研究不同因素对红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织诱导及其再生体系的影响,以期对红芽芋脱毒苗的再生体系进行优化。结果表明,红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+TDZ 2 mg·L^-1+2,4-D 1 mg·L^-1。红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织分化的最佳培养基是MS+TDZ 2 mg·L^-1+NAA 1 mg·L^-1。红芽芋脱毒苗不定芽生根的最佳培养基是1/2MS+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 0.5 mg·L^-1。红芽芋再生苗最好的移栽基质为发酵后的腐锯木屑。红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织再生苗移栽时最佳的PP₃₃₃浓度为20～50 mg·L^-1。本试验成功建立了红芽芋脱毒苗球茎愈伤组织的再生体系,为红芽芋脱毒苗转基因的研究和种质创新奠定了基础。     

红皮云杉胚性愈伤组织诱导技术研究

以红皮云杉未成熟胚为外植体进行胚性愈伤组织诱导实验,利用L₁₆(4²×2)混合水平正交设计研究基础培养基、光照条件、未成熟胚采集时期对胚性愈伤组织诱导的影响,以此为基础对不同的培养温度梯度进行了筛选。结果表明：改良RJW基本培养基为最适宜的基础培养基,光照条件以暗培养为宜,未成熟胚的最适宜的采集时间7月20日,适宜培养温度为22℃。当未成熟胚在添加1.0 mg·L^-1 BA,5.0 mg·L^-1 NAA,20 g·L^-1蔗糖,450 mg·L^-1 L-谷氨酰胺、750 mg·L^-1水解酪蛋白的改良RJW培养基,22℃下暗培养时,胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.3%。     

怀山药种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生

通过对怀山药(Dioscorea opposita)种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生进行研究,结果表明:将低温下锻炼7天的怀山药试管苗带芽茎段放入预培养基中,低温下培养3天,然后在室温下用3%的海藻酸钠和0.5mol·L-1CaCl2包埋,包埋珠用MS+0.2mol·L-1蔗糖+2mol·L-1甘油+50g·L-1二甲基亚砜在0°C下装载60分钟,用30%甘油+15%乙二醇+10%二甲基亚砜+15%聚乙二醇+0.4mol·L-1蔗糖在0°C下脱水60分钟,迅速投入液氮,24小时后立即用40°C水浴快速化冻,再用MS+0.5mol·L-1蔗糖溶液洗涤2次,转入再生培养基中培养,可获得再生植株。再生植株成活率因基因型而异,铁棍山药、太谷山药、怀庆1号山药和B号山药的成活率分别为64.29%、49.21%、13.11%和39.81%。     

珍稀濒危植物香果树种质离体保存技术的研究

以香果树(Emmenopterys henryiOliv.)带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验和单因子实验方法研究了培养温度、无机盐水平、蔗糖、甘露醇和植物生长抑制剂PP333对香果树试管苗离体保存的影响。结果表明,香果树带芽茎段在9℃低温下保存于附加2.0 mg.L-1KT、2.0 mg.L-16-BA、0.1 mg.L-1NAA、50 g.L-1蔗糖和10 g.L-1甘露醇的1/2MS培养基上,180 d后其成活率可达80%。PP333对香果树的离体保存也有显著影响,其中最适合的PP333浓度为6 mg.L-1,180 d后其成活率可达95%以上。离体保存后的试管苗经形态指标和生理生化指标测定以及RAPD分析检测没有发生遗传变异。本实验结果为珍稀濒危植物香果树的种质保存提供了一条简单有效的途径。     

加拿大金露梅离体培养与快繁体系的建立

以加拿大金露梅嫩芽、叶片为外植体进行试验,通过观察确定嫩芽为初代培养的外植体。运用L₉(3⁴)正交试验筛选出最适合的腋芽初代培养、芽苗继代增殖及组培苗生根的最佳培养基,从而为金雨点建立了一套“腋芽诱导—继代增殖—生根培养”的快速繁殖体系。结果表明,诱导腋芽的分化培养基为MS+6-BA 2 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1,其中MS、6-BA和NAA均为诱导的主要因子,影响顺序为MS＞6-BA＞NAA,诱导率达96.33%;继代增殖培养中激素6-BA是影响加拿大金露梅芽增殖生长的主要激素,差异极显著（p=0.000 1）,并且以浓度为2.0 mg·L^-1的增殖效果最好,确定最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.6 mg·L^-1+KT 0.2 mg·L^-1,半月增殖倍数达6.12;对生根培养3种激素（KT、NAA、IBA）进行方差分析, KT和NAA的影响均达到了显著水平(p=0.000 1; 0.001 0),是影响生根的主导因子,而IBA的p值为0.424 5,因此可以忽略其影响,在诱导时确定用NAA和KT两种激素。之后对生根数量、生根率进行多重比较表明最终确定生根培养基为MS+NAA 0.1 mg·L^-1+KT 1.0 mg·L^-1,生根数为8.63条,生根率为95.33%。