伤寒Vi多糖结合疫苗免疫小鼠后的抗体类型及动态分析

伤寒Vi多糖结合疫苗和Vi多糖疫苗分别免疫小鼠,分离血清,采用间接ELISA法测定不同时点血清中特异性IgA、IgM、IgG及其亚类(IgG1、IgG2a、IgG3)的抗体滴度。结果显示,免疫一针后,Vi多糖结合疫苗组的IgG抗体GMT值明显升高,第二针有加强效应(P<0.01);所测3种IgG亚型中IgG2a抗体滴度升高明显;Vi多糖和结合疫苗免疫小鼠后,血清中IgA和IgM抗体滴度均有显著升高,但无加强应答。显示Vi多糖结合疫苗在诱导小鼠血清IgG应答方面有加强效应。     

福氏2a痢疾杆菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫学特性

通过己二酸二肼（ADH）将福氏2a痢疾杆菌脂多糖（LPS）经酸水解脱毒纯化后得到的O－SP和破伤风类毒素（TT）蛋白共价结合,制备了福氏2a痢疾杆菌结合物。以2.5μg多糖或含2.5μg多糖的结合物经皮下注射免疫NIH品系雌性小鼠,同时以25μg多糖或含25μg多糖的结合物经耳缘静脉注射家兔。用ELISA方法分别检测小鼠和家兔血清中抗脂多糖抗体水平及抗TT水平,并用豚鼠血清补体介导进行了体外杀菌实验。结果显示：用本实验方法提取的多糖,合成的多糖衍生物,多糖－蛋白结合物都具有福氏2a痢疾杆菌O－抗原特异性,其化学组成及结构特异性和国外文献报道基本一致。单独用多糖免疫小鼠和家兔未能诱导LPS抗体,而结合物免疫小鼠和家兔的血清诱导出了较高的抗LPS IgG抗体及抗TT抗体,并有较强的体外杀菌活性。产生的抗体存在着免疫记忆性,可以产生再次免疫应答加强反应。     

不同剂量肺炎链球菌荚膜多糖与蛋白结合物的免疫原性比较

用肺炎链球菌19F型、23F型的荚膜多糖(C-PS)分别和破伤风类毒素(TT)蛋白结合,制备了两个型别的多糖-蛋白结合物(19F-TT,23F-TT)。为探讨结合物的最适免疫剂量,以10μg多糖和含1μg、3μg、9μg、27μg多糖的结合物经腹腔免疫NIH小鼠,ELISA方法检测小鼠血清中多糖和含不同多糖的结合物所产生的特异性IgG抗体。结果在不同的剂量免疫小鼠后,3μg剂量组在免疫三针后可诱生高浓度的抗体,但随着免疫剂量的增加,9μg与27μg诱生的抗体浓度较3μg诱生的抗体浓度之间并无显著性差异。含多糖3μg的19F型和23F型多糖蛋白结合物剂量组可诱生高浓度的特异性IgG抗体。     

人参多糖对新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用

在流感灭活疫苗中添加佐剂可以提高疫苗的免疫原性,节约抗原用量。一些天然中草药多糖具有潜在的佐剂效应。本文探讨了人参多糖（ginseng polysaccharide,GPS）在新甲型H1N1流感病毒裂解型灭活疫苗中的佐剂效应。将不同剂量GPS与新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗混合,共同免疫小鼠一次,通过检测免疫后在小鼠体内诱导产生的疫苗特异性IgM、IgG、IgG1和IgG2a抗体情况来评价GPS作为流感病毒灭活疫苗佐剂的免疫增强效果,并与不添加佐剂的疫苗和加有铝佐剂的疫苗的免疫效果作比较。结果显示,GPS与铝佐剂一样能显著提高和维持疫苗特异性IgG抗体滴度,同时提高IgM抗体水平,其中800μgGPS的佐剂效果最好。因此我们认为GPS可以作为流感病毒灭活疫苗的一种候选佐剂。     

结核分枝杆菌海藻糖磷酸磷酸酶诱导小鼠体液和细胞免疫应答

目的 研究结核分枝杆菌(M．tuberculosis)海藻糖磷酸磷酸酶(TPP)诱导小鼠体液和细胞免疫。方法 差速离心分离结核分枝杆菌H37Rv和卡介苗(BCG)的各细胞组分,通过Western杂交检测抗原TPP在结核分枝杆菌H37Rv和BCG中的亚细胞定位情况。分别用5×10~6CFU的BCG和50μg的TPP蛋白免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗TPP的IgG1和IgG2a抗体效价。取免疫小鼠的脾细胞,体外抗原刺激,用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测γ干扰素(IFN-γ)分泌细胞。结果 TPP亚细胞定位于结核分枝杆菌H37Rv和BCG的胞壁和细胞膜组分。TPP蛋白免疫后小鼠产生的TPP特异性IgG1和IgG2a抗体效价明显高于BCG免疫小鼠,并且IgG2a的抗体效价高于IgG1。体外抗原刺激TPP蛋白和BCG免疫小鼠的脾细胞,都能诱导较高的IFN-γ分泌。结论 结核分枝杆菌细胞壁蛋白TPP能诱导小鼠Ⅰ型辅助性T细胞介导的免疫反应,可作为抗结核疫苗的候选抗原。     

六味地黄苷糖对悬吊应激小鼠生殖内分泌及免疫系统的影响

目前尚无有效可靠的抗应激药物.传统的补益中药六味地黄汤（LW）对多种类型应激所致内分泌和免疫平衡失调具有明显调节作用,但目前已上市的LW成药缺乏可靠的质量控制方法,其临床疗效的可靠程度难以估测.本课题组在前期研究中以免疫和内分泌活性评价为导向,从LW中追踪分离并组成了质量可控且安全性好的六味地黄苷糖（LW-AFC）.本文观察了悬吊应激雌性小鼠生殖内分泌及免疫系统的变化及LW-AFC的影响.结果表明,悬吊应激小鼠皮质酮升高,动情期缩短、动情间期延长,垂体LH下降,动情间期血清E2升高;脾细胞培养上清IgG含量明显降低;口服LW-AFC能显著降低血清皮质酮,升高垂体LH,且LW-AFC能明显降低动情间期血清E2,并能明显增强脾细胞IgG分泌能力.这提示,悬吊应激可导致雌性小鼠生殖内分泌功能紊乱以及免疫功能下降,口服LW-AFC具有明显调节作用,对应激所致生殖内分泌功能紊乱以及免疫功能下降具有潜在防治作用.     

玉竹多糖对流感病毒裂解疫苗的黏膜佐剂效应

探讨玉竹多糖(Polygonatum odoratun polysaccharides,POP)对流感病毒裂解疫苗黏膜免疫的佐剂效果。以BALB/c小鼠为模型,将H7N9流感病毒裂解疫苗单独或者添加不同剂量的POP(400、600、800、1 000和1200μg)做佐剂一次性滴鼻免疫小鼠,免疫三周后小鼠以致死剂量同源病毒攻击。实验结果表明,当在疫苗中加入1 000μg POP时,与疫苗单独免疫相比,单次滴鼻免疫就明显增强了小鼠抵抗致死量病毒感染的能力,体重丢失减少,肺部残余病毒滴度下降,存活率提高;血清中疫苗特异性IgG抗体和HI抗体以及鼻洗液中SIgA抗体都提高了;IgG亚类抗体检测显示,POP的加入显著增加了IgG1的抗体滴度,但抑制了IgG2a的产生,说明诱导的免疫应答偏向于Th2型。实验表明POP在一定剂量时能增强疫苗诱导的免疫应答,显示出黏膜佐剂效应。     

不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗小鼠免疫原性对比试验

试验中以小鼠为动物模型,对不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗进行免疫效果观察。3种福氏2a痢疾结合疫苗和3种宋内氏痢疾结合疫苗分别皮下免疫NIH小鼠,同时设置O-SP(O-特异性多糖)对照组,免疫3针,在不同免疫针次间采血,用ELISA测定抗体滴度。单独使用福氏2aO-SP和宋内氏O-SP免疫后,小鼠血清中几乎没有抗LPS IgG抗体产生,而用结合疫苗免疫后,小鼠血清中产生了抗LPS IgG抗体,且第二次、第三次免疫后,小鼠血清中抗LPS IgG抗体水平有显著升高,表明结合疫苗具有加强免疫应答效应。三种不同的痢疾结合疫苗相比较,F2a-O-SP-rEPA结合疫苗较F2a-O-SP-TT结合疫苗和F2a-0-SP—DT结合疫苗的小鼠抗LPS IgG抗体水平高,S-O-SP-rEPA结合疫苗较S-O-SP-TT结合疫苗和S-O-SP—CRM9,结合疫苗的小鼠抗LPS IgG抗体水平高。以rEPA作为载体的痢疾结合疫苗比DT,TT作为载体的痢疾结合疫苗的免疫原性要强。     

H7N9灭活疫苗联合MF59佐剂在小鼠体内诱导的长效体液免疫应答

以BALB/c小鼠为模型,探讨H7N9流感病毒灭活疫苗免疫小鼠后所诱导的长效体液免疫应答的动态变化。不同剂量的流感H7N9全病毒灭活疫苗单独或辅以MF59佐剂肌肉注射免疫小鼠一次。连续采集免疫后小鼠15个月的血清,用ELISA方法检测特异性IgG抗体水平,血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和微量中和(microneutralization,MN)试验检测第15个月时的HI抗体和中和抗体效价。实验结果发现,小鼠血清中的特异性IgG抗体水平随时间变化持续缓慢上升,第5个月时达到顶峰,随后略有下降但一直持续平稳状态;IgG抗体滴度与疫苗剂量成正相关,且添加佐剂能提高抗体滴度。HI及MN抗体检测表明,免疫后第15个月产生的抗体能有效中和病毒,且抗体跟疫苗剂量成正比。以上研究表明,H7N9流感病毒灭活疫苗免疫小鼠一次诱导产生的特异性抗体能在较长期内保持比较平稳的抗体滴度,为小鼠提供免疫保护;增加抗原剂量和添加MF59佐剂能增加疫苗特异性抗体水平。该研究为H7N9流感疫苗产生的长期保护效应提供了一定的数据积累和参考。     

超抗原SEA增强小鼠对HBV DNA 疫苗的免疫反应

观察超抗原SEA(D227A)的真核表达载体（pmSEA）, 对HBV DNA 疫苗诱导Balb/c 小鼠(H2d）免疫应答的调节作用。 肌内注射空载体pcDNA3、HBV DNA 疫苗加pmSEA佐剂（pHBVS2S+pmSEA）或不加佐剂（pHBVS2S）; ELISA 法测定血清抗HBs; ELISPOT检测分泌IFN-γ的脾淋巴细胞;4 h51Cr 释放法检测小鼠脾细胞CTL 活性。HBV DNA佐剂组免疫小鼠抗HBsAg抗体滴度明显高于不加佐剂组,其IgG1/IgG2a的比例不同于多肽免疫组,二者分别为0.282与10。HBV DNA佐剂组均能增强IgG1和IgG2a的产生,是不加佐剂组的1.36、1.73倍。佐剂组小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量是不加佐剂组2～3倍。CTL 细胞杀伤活性（E:T=100）佐剂组与不加佐剂组分别为：69.77%±7.5%、 42.81%±7.7%,差异显著(P<0.05)。HBV DNA 疫苗具有较强的免疫原性, 能够诱导机体产生特异性的抗体及CTL反应;pmSEA佐剂能够提高小鼠对DNA 疫苗的免疫应答,有望成为DNA 疫苗的免疫佐剂。     

森林脑炎中和抗体蚀斑减少试验方法的建立及疫苗免疫人体后抗体检测

为评价森林脑炎疫苗的免疫效果,采用森林脑炎病毒的BHK细胞适应株,以BHK细胞为培养基质,建立了检测森林脑炎中和抗体的蚀斑减少试验方法,并用蚀斑减少法、小鼠法及ELISA法检测了原制森林脑炎灭活疫苗免疫人体后的中和抗体水平;免疫血清为按疫苗免疫程序免疫健康志愿者采血分离而制备。结果表明蚀斑减少法与小鼠法的特异性相近且敏感性较好、简便快速,缩短检测周期,为疫苗流行病学调查及新型疫苗的研究提供了快速的检测方法;原制灭活疫苗人体二针免疫后,人体血清中和抗体阳转率仅30％左右,急需提高现用原制灭活疫苗的质量。     

汉滩病毒囊膜糖蛋白G1、G2腺病毒载体的表达及免疫分析

为了研究利用腺病毒载体表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1、G2的可行性及免疫原性。通过克隆76-118株G1、G2基因至腺病毒表达载体pAdTrackCMV,得到阳性克隆padTrackCMV-G1、G2。PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdeasy-1共转化BJ5183宿主菌,经同源重组后得到重组病毒rAdeasy-G1、rAdeasy-G2。重组病毒经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,使重组病毒得到扩增。将重组病毒免疫Balb／c小鼠,并通过ELISA和间接免疫荧光对免疫小鼠血清进行了分析。结果表明,rAdeasy—G1组六只免疫小鼠、rAdeasy—G2组4只免疫小鼠均产生了能与汉滩病毒抗原发生反应的特异抗体。该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的汉坦病毒工程疫苗奠定了基础。     

Mutagenic alterations of antibody biosynthesis

The investigations of changes of antibody affinities were carried out with 182 immuned CBA mice under the influence of the mutagens. The mice were injected with ethylene imine and its derivatives, 6-azauridine, cyanurchloride, theobromine, glyoxal, at a dose of 100 mg/kg 2 days before, simultaneously and in 2 and 5 days after the immunization. The indices of the functional affinity of antibodies (the mean constant of true association, the standard free energy, the concentration of the hapten binding sites, the heterogeneity index, the level of IgG and its Fab- and Fc-fragments) were determined within 5, 10 and 20 days. Three groups of changes of antibody affinities in immuned mice were observed under the influence of mutagens: a) disassotiative changes with acute fall of affinities; b) erase changes; c) variable changes with discrete and corrective displacement of some affinities indices. Analysis of the data obtained suggests the existence of two forms of the mutagen immunodepression: 1) real immunodepression with a parallel fall of primary and secondary indices of antigen-intibody interaction; and 2) functional immunodepression with a fall of secondary indices. Polyfunctionality of the inhibition effect of alkyl mutagens is demonstrated.     

益生元对抗生素引起的肠道菌群失调的作用

目的 评价益生元菊糖和大蒜多糖在治疗肠道菌群失调中的作用.方法 72只Balb/c小鼠随机分为6组,随机取出12只作为正常对照组,其余灌胃盐酸林可霉素和头孢曲松钠混合抗生素溶液3d,建立小鼠肠道失调模型后,以生理盐水灌胃作为自然恢复组,其余4组分别灌胃菊糖、低剂量大蒜多糖、高剂量大蒜多糖以及丽珠肠乐5d.受试小鼠无菌取粪,观察各组肠道菌群的数量变化、测量血清IgG,粪便内毒素含量、有机酸含量变化.结果 菊糖和大蒜多糖高剂量灌胃能加速恢复抗生素导致的小鼠肠道菌群失调,这两种益生元对内毒素的清理、免疫力的恢复也有积极的效果,效果均优于丽珠肠乐和自动恢复.结论 益生元有加快肠道菌群恢复和降低抗生素的破坏效果,有益于小鼠肠道健康.     

E.tenella感染雏鸡特异性抗体的动态变化和母源免疫的研究

本实验用斑点酶联免疫试验 (Dot ELISA)检测了E .tenella感染雏鸡特异性抗体、免疫母鸡卵黄和后代血清中特异性母源抗体的动态变化及不同日龄雏鸡的抗球虫水平。结果表明 :(1)雏鸡感染E .tenella后第 6d即可在循环血液中检测到特异性IgG ,于第 18天达到峰值 ,第 30天降至感染后第 7天时的水平。 (2 )母鸡二次免疫后第 5天卵黄中即有高水平的母源抗体 ,免疫母鸡后代 1日龄时母源抗体滴度高达 9.83,与未免疫对照组差异极显著 (P <0 .0 1) ,二者都随着日龄增长降低 ,但免疫组下降幅度很小 ,2 9日龄时仍和对照组 18日龄水平相当。 (3)免疫母鸡后代对再感染的抵抗力显著增强 ,卵囊减少率高达 93%,抗球虫指数和相对增重率都与对照组差异极显著 (P <0 .0 1) ,雏鸡的抗球虫水平随着日龄增长逐渐降低 ;母源抗体、抗球虫指数和相对增重率三者之间两两呈现明显的正相关 ,而这三者又都与卵囊产量呈明显的负相关。     

关于细胞毒因子抗肿瘤活性的研究

用抗肿瘤免疫RNA诱生家兔,用体外细胞毒实验证明.i—RNA致敏血清对人和鼠的肿瘤细胞株有不同程度的杀伤作用,从血清中的细胞毒活性粗提液经局部和静脉注入实体瘤鼠体内,见肿瘤组织有出血、坏死、细胞核溶解,消失等现象。     

N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究

prME和NS1为乙型脑炎病毒两个主要的免疫保护蛋白,且均为N-糖蛋白。为研究N-糖基化对乙型脑炎病毒免疫保护的作用,本研究用PCR介导的定点突变方法,分别消除乙型脑炎病毒prME和NS1基因的不同N-糖基化位点,并构建了prME和NS1突变基因的真核表达质粒。将质粒免疫四周龄雌性小白鼠,经两次免疫后,采集血清检测体液免疫反应,最后对小鼠用强毒进行攻击,观察并记录免疫保护力。研究结果显示,与野生型prME基因免疫组相比,消除单个糖基化位点后prME基因诱导的ELISA抗体、中和抗体和免疫保护力均略有升高,而同时消除两个糖基化位点的则会降低。NS1基因消除单个糖基化位点后保护率高达到100%,但消除两个糖基化位点后则免疫保护率略有降低(75%)。通过本研究证明,N-糖基化在维系乙型脑炎病毒prME和NS1蛋白的免疫保护中具有重要的作用,单个糖基化的缺失可增强蛋白的免疫原性,而两个糖基都缺失后,则造成了免疫效率的降低。     

丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位.设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白.ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性.包装HCV假病毒(HCV pseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用.结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8).表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用.结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值.     

中药地黄饮子对小鼠抗体激发水平的影响

目的:探讨地黄饮子对小鼠抗体激发水平的影响。方法:将40只经卵核蛋白免疫过的小鼠随机分A、B两组,分别灌服地黄饮子和葡萄糖,1次/d,每次0.5mL只,连续7d后,加强免疫,再经7d,用ELISA法检测血清中相应抗体生成水平。结果:与葡萄糖组比较,地黄饮子组小鼠抗体水平升高,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:地黄饮子有可能促进小鼠抗体激发水平和免疫水平的提高。     

Antigenic Determinants of Salmonella for Production of “Clearance” Factor in Mouse Typhoid

The “clearance” factor produced in the peritoneal cavity of mice immunized with killed vaccines prepared from Salmonella typhimurium or S. enteritidis was identified as the specific antibodies elicited by the O side chain of the cell wall polysaccharides in the organisms used as immunogens. After immunization of mice with vaccines prepared from virulent Salmonella strains, complement-dependent antibacterial antibodies in the serum and “clearance” factors in the peritoneal cavity were found to appear coincidentally, to last for more than one year, and to have the same specificity against the virulent bacterial strains. The relationship between the complement-dependent antibacterial antibodies and “clearance” factor, and the mechanisms of bactericidal action of these antibacterial agents in experimental typhoid were discussed.