A型肉毒聚合类毒素的制备及免疫原性研究

通过制备A型肉毒聚合类毒素,研究获得较好的免疫原性和反应原性的方法.通过碳二亚胺法,聚合A型肉毒类毒素,免疫小鼠,用ELISA检测抗体,成功地制备了A型肉毒聚合类毒素,免疫小鼠获得高效价免疫血清,且该免疫血清具有中和活性,研究A型肉毒聚合类毒素抗原的作用机制,获得具有中和活性的保护性抗体,对肉毒毒素中毒的防治具有重要意...     

5型肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的不同糖蛋白比与免疫原性的关系

实验中比较了以不同糖蛋白比结合的5型肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的免疫原性。以氨还原法制备的不同糖蛋白比的5型多糖结合疫苗分别经腹腔注射NIH小鼠,共免疫3次,间隔2周。末次免疫2周后采血分离血清,以间接ELISA测定血清抗体,t检验统计分析数据。结果显示,生理盐水组(R组)无免疫原性;5型荚膜多糖组(H组)免疫原性低,无免疫加强效应;结合疫苗M组、N组第1、2针有免疫加强效应,第2、3针无免疫加强效应,而F组和Q组的两针次间均有明显的免疫加强效应。说明5型肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的糖与蛋白比较高时能获得较好的免疫原性。     

肺炎链球菌18C型糖蛋白结合物的制备及其免疫原性

制备肺炎链球菌18C型荚膜多糖－破伤风类毒素结合物（CPS－TT）,测定结合物的理化性质,抗原特异性及其在动物中的免疫原性。结果显示,结合物能与相应的多糖和破伤风抗血清形成明显的沉淀线,蛋白／多糖比率为1．86,结合物分子大小（Kd值）为0．058。注射小鼠后可诱导明显的抗体应答,而且随着注射针次的增加,抗体反应水平明显增高,显示加强效应。结果表明,制备的肺炎链球菌糖蛋白结合物抗原性良好,具有胸腺依赖性的特性,在小鼠中显示较好的免疫原性。     

检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。     

不同剂量肺炎链球菌荚膜多糖与蛋白结合物的免疫原性比较

用肺炎链球菌19F型、23F型的荚膜多糖(C-PS)分别和破伤风类毒素(TT)蛋白结合,制备了两个型别的多糖-蛋白结合物(19F-TT,23F-TT)。为探讨结合物的最适免疫剂量,以10μg多糖和含1μg、3μg、9μg、27μg多糖的结合物经腹腔免疫NIH小鼠,ELISA方法检测小鼠血清中多糖和含不同多糖的结合物所产生的特异性IgG抗体。结果在不同的剂量免疫小鼠后,3μg剂量组在免疫三针后可诱生高浓度的抗体,但随着免疫剂量的增加,9μg与27μg诱生的抗体浓度较3μg诱生的抗体浓度之间并无显著性差异。含多糖3μg的19F型和23F型多糖蛋白结合物剂量组可诱生高浓度的特异性IgG抗体。     

核磁共振波谱法在肺炎球菌荚膜多糖检定中的应用

目的 建立1 H-NMR波谱法检定23价肺炎球菌荚膜多糖结构的方法.方法 用1H-NMR方法分析肺炎球菌荚膜多糖,选择(5.89～4.64) ppm区作为‘指纹’鉴定区,以默克公司公布的肺炎球菌荚膜多糖波谱为参照谱图,将检定样品的波谱与其相比较.对1 H-NMR波谱进行专属性和耐用性验证.结果 实验中应用1H-NMR波谱分析法对23价肺炎球菌多糖疫苗包含的所有血清型多糖的检定结果与默克公司公布的结果完全一致,该方法有很好的专属性和耐用性.结论 实验中建立的1H-NMR波谱法适用于肺炎球菌荚膜多糖的检定,与传统方法相比,该方法有检测速度快,样品易于准备的优点等.