用改进的往复式凝胶电泳法检测类病毒

描述了改进的快速灵敏诊断类病毒的方法,通过对马铃薯纺锤块类病毒(PSTV)、菊花矮化类病毒(CSV)和苹果锈果类病毒(ASSV)的检测表明,该方法快速灵敏、经济、可靠。     

菊花矮化类病毒cDNA的分子克隆

菊花是世界上重要花卉品种之一,由菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSV)引起的矮化病,近些年来在一些国家中有不断扩展的趋势。由于类病毒感染的潜伏期较长,所以早期诊断十分重要。我们曾用互补DNA(cDNA)探针和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测我国的菊花矮化类病毒。分子杂交技术检测类病毒比生物学方法快速,较电泳方     

我国菊花褪绿斑驳类病毒鉴定

从我国广州地区发现的带有褪绿斑驳症状的“广白”菊花病株中分离到一种小分子核酸,经鉴定其性质与国外报道的菊花褪绿斑驳类病毒(Chrysanthemum Cholrotic Mottle Viroid,ChCMV)的性质完全一致。病株用酚提取后的粗核酸和制备的纯核酸经正反双向或垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明为具有单链环状的RNA分子,其分子量与菊花矮化类病毒(Chrysanthemum Stunt Viroid, CSV)的相似。根据病株症状、寄主范围以及分段自我杂交等试验分析,证明这种小分子核酸是类病毒——chcMV,而不是CSV。在检测过程中,我们改进了提取和鉴定类病毒的方法,并建立了可以区分不同种类病毒的分段自我杂交技术。     

温度梯度凝胶电泳技术及应用

温度梯度凝胶电泳（TGGE）是一种用于检测核酸序列变异和点突变的电泳方法.该法利用不同构象的核酸分子具有不同的变性温度（T_m)来进行分离.TGGE方法具有分辨能力高、重复性好和节省时间的特点,可广泛应用于分子生物学研究领域.     

DNA指纹图谱技术在土壤微生物多样性研究中的应用

土壤中的微生物多样性是十分丰富的,传统培养方法对土壤微生物多样性的研究有很大局限性。近年来,各种基于16S rDNA基因的指纹图谱分析技术取得了长足的进步,并广泛应用于土壤微生物多样性的研究。这些技术主要有变性梯度凝胶电泳(DGGE)/温度梯度凝胶电泳(TGGE)、单链构象多态性(SSCP)、随机引物扩增多态性DNA(RAPD)、限制性片段长度多态性(RFLP)和扩增核糖体DNA限制性分析(ARDRA)等。对这些技术近年来在土壤微生物多样性研究领域的应用予以简短综述,并初步探讨未来几年土壤微生物分子生态学发展的方向。     

海枣曲霉β-葡萄糖苷酶的提纯与性质

通过聚乙二醇6000一磷酸钾缓冲液双相分离,Sephadex G—100凝胶过滤、DEAE-Sephadcx A-50及SE-Se phadex C-50离子交换柱层析等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspe rgillutphoenlcis)麦麸培养物抽提液中提纯到凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。该酶的最适pH5．0,最适温度60℃,在pH 4．0--7．5之间及55℃以下稳定。Ag+及Hg2+对该酶有强烈的抑制作用。用SDS-凝胶电泳法及梯度凝胶电泳法测得该酶均分子量分别为118000及195000薄层凝胶等电聚焦法测得其等电点为pH 3.95。     

从苹果锈果病组织中分离到类病毒RNA分子的研究

用鉴定类病毒环状分子结构的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定结果表明,在患有锈果、花脸、裂果等症状及不显症状的苹果锈果病成熟果中,存在着一种环状低分子量RNA,称之为ASSD-RNA-1,其分子量略小于马铃薯纺垂形块茎类病毒(PSTV),在病树枝条中除存在ASSD-RNA-1之外,还存在另一种环状分子,称为ASSD-RNA-2,其分子置比PSTV略大,在热力学上ASSD-RNA-2较ASSD-RNA-1稳定,变性温度前者高于后者,在成熟的病果中未检出ASSD-RNA-2,研究了患病组织核酸提取物的侵染性,提供了锈果病类病毒病毒病原的又一证据。     

接种外表健康的梨树芽片诱发苹果锈果病类病毒

曾报道苹果锈果病的病原为类病毒,称为苹果锈果类病毒(Apple Scar SkinViroid,ASSV)。在分类上与已知的几组类病毒均不同,其侵染性也已得到证实。50年代已观察到由梨树园改栽的苹果园,或梨树与苹果混栽的果园中,苹果锈果病发病率较高,但梨树却未见任何症状。其后,曾用十几个品种的梨(包括产于未栽过苹果的梨产     

DGGE/TGGE技术及其在微生物分子生态学中的应用

变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)是近些年微生物分子生态学研究中的热点技术之一。由于DGGE／TGGE技术具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优点,被广泛地应用于微生物群落多样性和动态性分析。文章对DGGE／TGGE技术原理与关键环节、局限性和应用前景进行了综述。     

黑曲霉纤维素酶系中β-葡聚糖纤维二糖水解酶的提纯和性质

通过硫酸铵分段,Sephadex G-100凝胶过滤及DEAE-SephadexA-25(A-50)离子交换柱层析等提纯步骤,从黑曲霉(Aspergillus niger)培养液中分离到β-葡聚糖纤维二糖水解酶的两个组分(Ⅰ-3a,Ⅰ-3b),经凝胶电泳鉴定均为单一带,Ⅰ-3a和Ⅰ-3b的最适pH分别为4.0及4.5,最适温度50℃及45℃,在pH2.0—8.0之间稳定,保温1h时的半失活温度t 1/2分别为52℃及48℃。SDS-凝胶电泳法测得Ⅰ-3a和Ⅰ-3b的分子量分别为57000及55000;聚丙稀酰胺凝胶等电聚焦法测得二者的等电点分别为3.2和3.0。在所测定的化学试剂中,Ag~+、Hg~(2+)和Cu~(2+)对该酶均有较强的抑制作用。     

柑桔裂皮类病毒和菊花矮化类病毒互补DNA探针的合成及检测

分别用人工合成的柑桔裂皮类病毒和菊花矮化类病毒的互补DNA探针,经固相分子杂交(dot blot)检测了柑桔、菊花等样品。结果表明:与生物学检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析相比,这是早期诊断类病毒病和检测类病毒的一种较为灵敏、快速的方法。     

0．23T稳恒磁场对不同温度离体过氧化氢酶的磁效应研究

研究了 0 .2 3T稳恒磁场对不同温度下的离体牛肝过氧化氢酶 (CAT)构象及活力的影响 ,并从分子水平讨论了磁场对不同温度的过氧化氢酶产生不同生物学效应的可能机制。将不同温度的天然酶液置于磁感应强度为0 .2 3T的磁场中分别处理一定的时间 ,处理过程中保持环境温度与酶液温度一致 ,撤离磁场后立即在相同实验条件下对其进行光谱分析及量热分析 ,并用Beers&Sizers法 (改良型 )测定酶活力。结果表明 ,磁场使 2 5℃过氧化氢酶的构象发生明显变化 ,表现为荧光偏振度增加、出现明显的差示扫描量热曲线、产生λ2 10nm～ 310nm的紫外差光谱以及λ330nm荧光发射峰的荧光强度改变 (荧光发射峰的峰位未移动 ) ,构象变化的同时酶活力增加 ;15℃过氧化氢酶的构象及活力变化规律与 2 5℃过氧化氢酶类似 ,但强度均弱于 2 5℃酶 ;而 4℃过氧化氢酶的构象及活力没有发生变化 ,表现出未受磁场处理的影响。相同实验条件下 ,磁场对不同温度的酶分子影响不同 ,随温度的增加 ,影响效应趋于显著。由于不同温度的酶分子之间的差异在于构象状态的不同 ,这表明酶分子自身的构象状态对磁场处理效果有极其重要的影响。不同温度的过氧化氢酶磁效应差异显著可能是由磁致酶构象变化的特殊机制所引起。磁场对酶分子构象的影响可能是通     

DNA分析与扩增

JJ,‘翻920422大片段定位缺失:缝合环聚合酶链反应〔英〕/5 ong,C.…/B ioteeh Forum Enr一1991,s(s)一130一132仁译自DBA,2991,10(12),91-06633〕 用缝合环聚合酶链式反应(PCPCR)在载体中的噬菌体T7启动子与菊花矮小类病毒(CSV)的cDNA序列之间制造缺失,这样,不含外源序列的CSV RNA即可通过T7的离体转录来合成。新方法应用超螺旋质粒pBCSU172作为PCR扩增模板,产生不含要删除区的线性DNA分子。采用与线性分子两端相配对的第三寡核昔酸来制备缝合环状DNA,并用于大肠、杆菌JM109的直接转化。用该法合成了与天然CSV序列一样…     

磷脂分子链构象及相变的拉曼光谱研究

本文报导了几种纯磷脂的固态、分散体或脂质体的激光拉曼光谱特性.在室温条件下固态DMPC、DPPC和DSPC的拉曼光谱表明,它们的分子链的有序性呈现差别.DMPC分子链的有序性远较其它二者为低.研究了DSPC的热致相变,分别观察固态DSPC的Ⅰ_(1100)/Ⅰ_(1064).～温度关系特性曲线和它的分散体的Ⅰ_(2882)/Ⅰ_(2847)～温度关系特性曲线,并发现上述两种关系特性曲线在相变温度之前均出现预相变峰,这可能反映在磷脂分子的相变过程中除trans(?)gauche构象转变外还存在其它构象的变化.DPPC分散体和脂质体的拉曼光谱特性进行比较的结果表明,曲率效应可能是脂质体分子链的有序性不同于分散体的原因.     

现代生物技术在环境微生物学中的应用:Ⅲ.限制性片段长度多态性分析、变性/温度梯度凝胶电泳和报道基因

这是现代生物技术在环境微生物学中的应用系列综述文章的第三篇 ,讨论限制性片段长度多态性 (RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳 (DGGE)和温度梯度凝胶电泳 (TGGE)以及报道基因。     

海枣曲霉β-半乳糖苷酶的提纯与性质

 通过过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双相分离、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、羟基磷灰石层析及SephadexG-100凝胶过滤等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中提纯得到凝胶电泳均一的β-半乳糖苷酶。该酶的最适pH为3.5—4.0,最适温度为60℃(反应15分钟),在pH5.0—8.5之间及60℃以下稳定。在65℃和70℃保温时失活50％的时间分别为27和2分钟。用SDS凝胶电泳法和梯度凝胶电泳法分别测得该酶的分子量为115,000和118,000。薄层凝胶等电聚焦法测得其等电点为pH4.6。     

四种麦类作物线粒体 DNA 理化特性的研究

本实验对小麦、大麦、燕麦和黑麦的mtDNA理化特性的初步研究表明，它们的热变性温度(Tm)分别为86℃,85.5℃ ,89℃和90℃; (G＋c）的百分含量分别为40.8、39.5、48.1和50。5。电镜观察表明，mtDNA主要为线状分子，但在小麦、大麦和燕麦的mtDNA中发现了少量环状小分子。mtDNA分子的大小分布在一定的范围内，表现出较大的不均一性。     

大肠杆菌噬菌体C2的一些物理化学特性

大肠杆菌噬菌体C2是含RNA的微球形噬菌体,直径约22毫微米。提纯的噬菌体在SSC缓冲液中沉降系数为79 S,在260毫微米比吸收值为7．8／毫克／毫升。纸层析分析表明其核酸碱基组成的克分子百分数为：A22．0、U 27．0、G 26．1和C 24．8。其解链温度为5 7．5℃。聚丙烯酰胺凝胶电泳测得RNA分子量为11×106。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得外壳蛋白和A蛋白的分子量分别是13,200和42,000。     

柑桔树中的一种小分子RNA

从柑桔裂皮病疫区采集的柑桔植株叶片中提取核酸,经双方向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,发现两种小分子环状RNA,采用分子杂交鉴定,此两种小分子RNA均与大多数类病毒中心保守区段有明显的序列同源性,其中一种分子量较柑桔裂皮病类病毒(CEV)小,与马铃薯纺锤体块茎类病毒(PSTV)大小相近。将含CEV和小分子RNA的柑桔叶汁接种于爪哇三七,经一定时间后,从爪哇三七中提取核酸,通过电泳和分子杂交方法分析,获得与柑桔植株相同的结果。对此种小分子RNA的性质本文进行了初步分析。     

黑曲霉木聚糖酶的纯化与性质

由凝胶电泳酶谱检测到黑曲霉１４９发本酵液中存在两型木聚糖酶,依次为Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ。通过硫酸铵分级沉淀及ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０柱层析分别将Ｘ－Ⅰ、Ｘ－Ⅱ纯化到凝胶电泳均一。由ＳＤＳ－凝胶电泳和浓度梯度凝胶电泳测得Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ的分子量分别为３７ｋＤａ,２４ｋＤａ和２３ｋＤａ,Ｘ－Ⅰ具有亚基。二者的含糖量分别为２７．６％和７．３％。Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ最适返应温度分别为５０℃和５５℃,ｐＨ为４．