质粒pBR322的体外扩建以及有关限制性核酸内切酶图谱

在体外对质粒pBR322进行了两次扩建,并作出新建四种质粒(pBW5,pBW7,pBW5-2和pBW5-8)的有关限制性核酸内切酶图谱。经琼脂糖凝胶电泳分析和对转化体选择标记检定,证明新建质粒确为重组质粒。重组质粒都携带有大肠杆菌nrdA,B基因,有利于对这些基因的深入研究。尤其是带有pKN402K DNA片段的新建质粒pBW5-2和pBW5-8在35℃以上2—3小时内拷贝数大量增加,这就为nrdA,B基因提供了丰富的材料;由于高温条件下,这种质粒拷贝数的扩增在丰富培养基里对宿主细菌是致死的,所以又为新建质粒的安全使用创造了条件。     

现代生物技术在环境微生物学中的应用:Ⅱ.聚合酶链反应

这是现代生物技术在环境微生物学中的应用系列综述文章的第二篇 ,讨论聚合酶链反应。这篇文章包含PCR步骤 ,特异基因的PCR检出 ,逆转录酶PCR ,综合细胞培养PCR ,多重PCR和半嵌套式PCR和PCR指纹法。     

多拷贝数质粒pWB29的分离及其特性的研究

在对pBR322质粒进行改建的过程中,分离得到一种多拷贝数质粒pWB29,其拷贝数比pBR322高5倍左右。经分子量测定及限制酶切分析表明,此多拷贝数质粒的分子量与pBR322相同,具有EcoRl, pstI单一限制酶切位点,其抗性标记为Ap^rTc^s,是pBR322的一种多拷贝数衍生质粒。     

林青链霉菌双亲灭活原生质体融合的研究

分别以紫外线、热灭活性林肯链霉菌947和9502原生质体,然后进行灭活双亲的原生质体融合,从16株融合子筛选到林青霉素高产株。用双亲的互补营养缺陷型对林肯链霉菌原生质体的制备、融合、再生的部分条件进行了研究。发现含0．4％Gly和34％蔗糖的SM培养基最适于实验菌株原生质体的制备、再生。聚乙二醇（PEG）分子量对原生质体融合影响不大,其在P缓冲液中的浓度却很重要。含50％PEG的P缓冲液最有利于原生质体融合。     

林肯链霉菌双亲灭活原生质体融合的研究

分别以紫外线、热灭活林肯链霉菌 94 7和 95 0 2原生质体 ,然后进行灭活双亲的原生质体融合 ,从 1 6株融合子筛选到林肯霉素高产株。用双亲的互补营养缺陷型对林肯链霉菌原生质体的制备、融合、再生的部分条件进行了研究。发现含 0 .4 %Gly和 34 %蔗糖的SM培养基最适于实验菌株原生质体的制备、再生。聚乙二醇 (PEG)分子量对原生质体融合影响不大 ,其在P缓冲液中的浓度却很重要。含 5 0 %PEG的P缓冲液最有利于原生质体融合     

λ 原噬菌体缺失突变株的诱导和分离

对CSH45(λcI857S7)菌株进行热诱导(42℃),原噬菌体DNA产生部分缺失的菌株,然后用λcIb221进行感染,并通过EMB-麦芽糖平皿进行粗筛。最后在不同温度条件下,分别以λvir和λcIb221感染,从而分离得到5株所需菌株,筛选频率为10％。这些菌株在EMB-麦芽糖平皿上为红色菌落。在32℃时能被λvir裂解,而对λcIb 221具有免疫性;在42℃时既能被λvir裂解,也能被λcIb221裂解,从而证实了这些菌株仍携带有原噬菌体的cI基因,可作为控制携带有λpLN基因的克隆载体的受体菌株。     

现代生物技术在环境微生物学中的应用:Ⅲ.限制性片段长度多态性分析、变性/温度梯度凝胶电泳和报道基因

这是现代生物技术在环境微生物学中的应用系列综述文章的第三篇 ,讨论限制性片段长度多态性 (RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳 (DGGE)和温度梯度凝胶电泳 (TGGE)以及报道基因。     

现代生物技术在环境微生物学中的应用:Ⅰ.基因探针和探针探测

现代生物技术在环境微生物学中的应用将发表系列综述文章.第一篇讨论基因探针和探针探测.这篇文章包含菌落转移或菌落杂交,Southern杂交和Northern杂交以及生物芯片.