培养的新生大鼠交感神经元膜电学性质及电压门控通道的膜片箝研究

在培养的新生大鼠颈上神经节交感神经元标本上,用全细胞电流箝及电压箝技术观察记录了交感神经元膜电学参数及电压门控性通道电流。用全细胞电流箝测得下列平均值：静息电位,－５１±６ｍＶ;输入阻抗,１４３２±３８９ＭΩ;时间常数,１３０±３２ｍｓ;动作电位幅度,９６±１０ｍＶ,超射值,４２±６ｍＶ。培养早期即可记录到自发或诱发的动作电位,大多数动作电位后跟随快或慢的后超极化电位。在电压箝状态下可分别记录到电压门控钠、钾、钙通道电流。钾电流以延迟整流型为主,钙电流只有高电压激活,缓慢失活的Ｌ或Ｎ型,未能记录到低电压激活,快速失活的Ｔ型钙电流。     

小鼠腹腔巨噬细胞不完全失活的外向K~+电流的基本特性

采用膜片钳技术以全细胞方式在小鼠腹腔渗出巨噬细胞（ＰＥＭ）中记录到一种不完全失活的外向Ｋ＋电流（Ｉｏ）,该电流在膜电位正于－１０ｍＶ时激活,对Ｋ＋具有高度特异性,其半值电导电位Ｖ１／２为７９．５ｍＶ,在膜电位正于３０ｍＶ时,该电流失活,在６０－１２０ｍＶ的膜电位范围内,其失活时间常数τｉ与膜电位无关．随着胞外Ｋ＋离子浓度（［Ｋ＋］ｏ）升高,该电流的失活过程减慢。在生理电压范围内（－８０－０ｍＶ）,该电流缺乏稳态失活,且其失活不具有频率依赖性。胞外４－ＡＰ（３ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｂａ２＋（３ｍｍｏｌ／Ｌ）及ＴＥＡ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）可抑制该电流,抑制率分别为８５％,６６％及３１％。胞外Ｚｎ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）可影响该电流活性,对该电流的抑制具有电压依赖性     

机械力对鼠脑微血管内皮细胞膜电流的影响

采用膜片钳技术以全细胞方式在鼠脑微血管内皮细胞中记录到一延迟外向电流,对Ｋ＾＋具有高度特异性,胞外施加２０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＴＥＡ－Ｃｌ在明显抑制该电流。实验的保持电位定在－１００ｍＶ,测试电位从－１００ｍＶ至＋９０ｍＶ,每次增加１０ｍＶ,刺激波宽为２１００ｍｓ。该电流具有ＴＥＡ敏感,并有浓度依赖性,其ＩＣ５０约为２．０ｍｍｏｌ／Ｌ,类似延迟整流性钾电流特征（ＩＫｖ）。机械力作用下可引出一外向电流,膜     

大鼠海马神经元Na~ Ca~(2 )交换电流在低氧时的变化

目的：探讨在低氧性脑损伤发生过程中,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换体在细胞内钙超载中的作用。方法：采用全细胞膜片钳方法,在急性分离海马神经元上观察低氧对Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流的电流电压（ＩＶ） 曲线的影响。结果：在整个膜电位水平,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流幅值均不同程度的增加,在正膜电位水平呈现一显著的外向电流。１０ ｍＶ 时,电流幅值从（９２ ．８３ ±２０．８）ｐＡ上升到（１３０ ．６７ ±２６．８８）ｐＡ（ Ｐ＜０ ．０５） ,而在５０ ｍ Ｖ,其电流幅值从（－ ７４ ．６７ ±１１ ．８４）ｐＡ上升到（－ ５８ ．５±１０ ．７１）ｐＡ（Ｐ＜ ０ ．０５）。结论：低氧时Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流呈外向性,这种改变有利于低氧后通过Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换的外向转运方式排出细胞内钠,并交换钙进入细胞     

虎纹捕鸟蛛神经细胞急性分离培养及其电压门控通道膜片钳

探索了虎纹捕鸟蛛(Ornithoctonus huwena)食道下神经细胞急性分离培养条件,并利用全细胞膜片钳技术对虎纹捕鸟蛛食道下神经细胞电压门控性钠、钾和钙通道的基本电生理学特性进行了研究.适合虎纹捕鸟蛛神经细胞离体培养的培养基为(g/L):葡萄糖0.7,果糖0.4,琥珀酸0.06,咪唑0.06,L-1513.7,Hepes 2.38,酵母粉2.8,乳白蛋白2.5,青霉素200 IU/ml,链霉素200 mg/ml,小牛血清15%;pH 6.8.该培养基非常适合虎纹捕鸟蛛神经节神经细胞离体培养,细胞在温度(27±2)℃的培养箱中培养2～4h,培养的细胞数目多、结构完整、贴壁效果好,细胞近似汤勺形,有一个长的单极突起,大部分细胞在10～30μm之间.全细胞模式下可以记录到钠、钾和钙三种电压门控离子通道电流.钙电流为高电压激活电流,该电流能够被NiCl2完全抑制;钾电流为瞬时钾电流和延迟整流钾电流,这两类钾电流分别被细胞外液中的4-氨基吡啶和氯化四乙胺所阻断;钠电流为TTX敏感型电流.     

广义烙铁头属三种烙铁头的核型及分类地位初步探讨

报道３种烙铁头蛇的核型。其中,烙铁头２ｎ＝３６＝１６Ｍ（１４Ｖ＋２ＳＶ／Ｖ）＋２０ｍ,ＺＷ型性决定,Ｚ为Ｖ型,Ｗ为ＳＩ／ＳＶ型,Ｚ明显大于Ｗ;菜花烙铁头２居群２ｎ＝３６＝１６Ｍ（１４Ｖ＋２ＳＩ）＋２０ｍ,ＺＷ型性决定,Ｚ为Ｖ型,Ｗ为ＳＩ型,Ｚ明显大于Ｗ;云南竹叶青２ｎ＝３６＝１６Ｍ（１２Ｖ／ＳＶ＋２ＳＶ／ＳＩ＋２ＳＩ）＋２ｍ,无异型性染本,对３种的核型及烙铁头属已知核型进行了比较分析,并对云南竹叶     

5-HT和NA增强大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸门控Cl~-通道电流由蛋白激酶介导

用制霉菌素穿孔膜片钳方法研究５－ＨＴ和ＮＡ对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸门控氯离子通道电流（ＩＧｌｙ）的调控作用及其胞内机制。发现：（１）５－ＨＴ激活与非胰岛激活蛋白（ＩＡＰ）敏感型Ｇ蛋白偶联的５－ＨＴ２受体亚型,激活磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）,增加甘油二酯（ＤＡＧ）的生成。ＤＡＧ增强不依赖Ｃａ２＋的新型ＰＫＣ（ｎＰＫＣ）的活性,从而增强ＩＧｌｙ;（２）ＮＡ激活与ＩＡＰ敏感型Ｇ蛋白偶联的α２受体,抑制腺苷酸环化酶（ＡＣ）,减少ｃＡＭＰ的生成,使ＰＫＡ活性降低,从而增强ＩＧｌｙ。     

豚鼠耳蜗外毛细胞的急性分离及钾离子通道的研究

本文对豚鼠耳蜗离体外毛细胞的细胞活性及底侧膜处电压依赖性钾离子通道进行了研究,结果表明：（１）离体外毛细胞悬液保存在４℃时,可延长存活时间达７ｈ以上。（２）外毛细胞的静息电位：应用电流钳方法,在刚形成全细胞方式时其细胞内静息电位为－７３．７±６．９ｍＶ,２ｍｉｎ后为－９４．８±４．１ｍＶ（ｘ±ｓ,ｎ＝１０）。（３）全细胞方式记录到的电压依赖性外向Ｋ＋电流是由快钾电流和延迟整流钾电流两部分组成,快钾电流的激活电位为－６０～－５０ｍＶ,延迟整流钾电流的激活电位为－４０～－３０ｍＶ,电流－电压关系曲线呈“Ｓ形上升”趋势。外向Ｋ＋电流被ＴＥＡ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）阻断后,可观察到一种电压依赖性内向电流     

GDNF重组腺病毒增加MN9D细胞多巴胺合成与释放

有表达ＧＤＮＦ的重组腺病毒直接感染中脑多巴胺能神经元来源的ＭＮ９Ｄ细胞并经神经毒素ＭＰＰ＋处理．感染３６ｈ分别收获细胞及其培养基,用反相高效液相色谱方法测定多巴胺含量．结果显示,经ＧＤＮＦ重组腺病毒感染的ＭＮ９Ｄ细胞内及其培养基中的多巴胺水平分别增加５０．７％和５３．５％．给予神经毒素ＭＰＰ＋损伤后,细胞内多巴胺含量降低５３．５％,但同时给予ＧＤＮＦ腺病毒则可抑制这种降低,并使多巴胺水平增加１４１．３％．以上结果提示ＧＤＮＦ腺病毒可提高细胞内的多巴胺水平并促进其释放,同时还具有对抗神经毒素ＭＰＰ＋损伤作用,表明ＧＤＮＦ重组腺病毒用于帕金森氏病基因治疗具有良好的前景．     

镁,钙子对组装于人工膜上CF0—CF1质子传导的影响

在电压箝位下,研究Ｍｇ＾２＋、Ｃａ＾２＋对重组于平板脂双层上ＣＦ０－ＣＦ１质子传导的影响,表明：（１）跨膜质子梯度０时（ΔｐＨ＝０）,在３０￣１５０ｍＶ范围内有大量的金Ｃａ＾２＋引起的正电流比在无金属离子溶液中的一定幅度的增加。在５０ｍＶ以上,Ｍｇ＾２＋比Ｃａ＾２＋有更大的促进正向电流的作用;（２）当ΔｐＨ＝３时,Ｍｇ＾２＋比Ｃａ＾２＋更有显著增加正向膜电流的作用,电压在０ｍＶ时就已显示出来;（３     

大鼠海马神经元Na^2＋—Ca^2＋交流电流在低氧时的变化

目的 探讨在低氧性脑损伤发生过程中,Ｎａ＾２＋－Ｃａ＾２＋交换体在内钙超载中的作用。方法 采用全细胞膜片钳方法,在急性分离海马神经元上观察低氧对Ｎａ＾２＋－Ｃａ＾２＋交换电流的电流－电压（Ｉ－Ｖ）曲线的影响。结果 在整个膜电位水平,Ｂａ＾＋－Ｃａ＾２＋交流电流幅值均不同程度的增加,在正膜电位水平呈现一显著的外向电流。１０ｍｖ时,电流幅值从（９２．８３±２０．８）ｐＡ上升到（１３０．６７±２６．８８     

羟墓自由基引起神经细胞［Ca~（2＋）］i增高的机制和Ebselen的抑制作用

用Ｆｕｒａ－２显微荧光测量技术研究了羟基自由基对单个皮层神经细胞内游离钙离子浓度［Ｃａ２＋］ｉ影响和硒化合物Ｅｂｅｌｅｎ对［Ｃａ２＋］ｉ的抑制作用。结果表明羟基自由基的作用首先引起胞内［Ｃａ２＋］ｉ以时间常数τ＝３８９５．４±５０７．２Ｓ速度缓慢增加,然后加入了以τ＝４２０．６±１２２．０Ｓ的外钙大量涌入。钙通道阻断剂、疏基还原剂、疏基还原制和自由基清除剂对羟基自由基损伤作用的影响提示外钙的大量涌入部分与通道的开放有关,疏基损伤在羟基自由基引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高中起着重要的作用。具有类谷胱甘肽过氧化酶活性的小分子硒化合物Ｅｂｓｅｌｅｎ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ和１０－６ｍｏｌ／Ｌ）抑制羟基自由基引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高,推测它可以抑制钙库的释放或促进内钙的外排以及抑制外钙的流入。     

水分胁迫下钙螯合剂与CPZ抑制剂对棉花根和下胚轴两种ATPase…

水分胁迫下棉花根和下胚轴质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活力,表现Ｋｍ值以及Ｖｍａｘ降低。－０．３ＭＰａ和－１．１ＭＰａ胁迫下质膜ＡＴ－Ｐａｓｅ活力随时间延长分别呈“Ｖ”字形变化和下降趋势。钙螯合剂、ＣａＭ抑制剂对棉花根和下胚轴质膜ＡＴＰａｓｅ活性有明显的抑制效应,抑制程度为－１．１ＭＰａ大于－０．３ＭＰａ大于对照。     

SNP抑制5-HT诱导的胞内游离钙浓度升高和内钙释放

用Ｆｕｒａ － ２／ＡＭ 荧光测量技术研究了５ － 羟色胺（５－ ＨＴ） 诱导的大鼠尾动脉平滑肌细胞胞内钙升高和一氧化氮（ＮＯ） 的抑制效应。实验表明, 胞外０ｍ ｍｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 时胞内静息［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 为２０ ．２±８ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ８） 。１０μｍｏｌ／Ｌ ５－ ＨＴ 可诱导出胞内钙库释放引起的瞬态［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值达２４５ ．７ ±７１．６ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ６） 。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ 硝普钠（ＳＮＰ） 可抑制５－ ＨＴ 诱导的［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值浓度降为７５．１±３５ ．９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ５） 。当细胞浴液含２．５ｍ ｍｏｌ／Ｌ Ｃａ２ ＋ 时,静息［Ｃａ２ ＋］ｉ为１１２ ．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ５） , 这时１０μｍｏｌ／ Ｌ ５ － ＨＴ 可诱导［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 的峰值为２５２ ．３ ±８０ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,以及其后平台浓度为１４３ ．０ ±３７ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,略大于［Ｃａ２ ＋］ｉ 为１１２．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／Ｌ 的静息浓度,为外钙内流引起。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ ＳＮＰ 也可抑制５－ ＨＴ 诱导［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 平台相浓度。平台浓度由１４３ ±４７     

离体大鼠不均匀牵张膈肌标本上的神经肌肉传递

在离体大鼠不均匀牵张膈肌标木（ＩＮＳＭＰ）上选择合适终板,可用同一微电极记录同一终板的小终板电住（ＭＥＰＰ）和终板电位（ＥＰＰ）。膜电位为－６２±２ｍＶ,ＭＥＰＰ频率和幅度在正常值范围,ＥＰＰ幅度高于２０ｍＶ,用直接法计算的量子含量对细胞外Ｃａ２＋浓度双对数作图呈直线,斜率为４．０６。２、５０和１００Ｈ２串刺激诱发量子释放的统计学性质为二项分布。表明ＩＮＳＭＰ上合适终板可作为电生理学上接近正常生理状态的神经肌接头模型,并提示生理状态下神经肌接头突触前诱发量子释放的机率较高（５０Ｈｚ时ｐ＝０．９）,遵循二项分布规律,递质动员较快（５０ＨＺ时为２０５０ｓ－１）,以保证正常的神经肌肉传递。     

猪生长激素基因在杆状病毒载体系统中的表达

通过对猪生长激素（ｐＧＨ）基因的ｃＤＮＡ进行测序,得到ｐＧＨｃＤＮＡ的全序列,并与Ｓｅｅｂｕｒｇ等报道的序列进行了比较和讨论。然后利用具人工合成启动子和多角体蛋白ＸＩＶ启动子的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４构建出含ｐＧＨ基因的重组质粒ｐＸ３／４－ｐＧＨ。将ｐＸ３／４－ｐＧＨ与致死缺失型线性化ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ＾－ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞,构建出既能形成多角体又能表达ｐＧＨ基因的苜蓿丫纹夜蛾     

铜对异丙肾上腺素致损豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的和方法：本实验采用全细胞膜片钳技术,以Ｌ型钙通道电流为指标,分别观察正常时、异丙肾上腺素（Ｉｓｏｐｒｅｎａｌｉｎｅ,ＩＳＯ）致损时及先加铜后致损时的豚鼠心室肌细胞钙电流的变化。结果：正常豚鼠心室细胞有一内向的电压依赖性钙电流,其最大峰电流（Ｉｐｅａｋ）为４６０±９８ｐＡ,可被维拉帕米阻断;细胞经１μｍｏｌ／ＬＩＳＯ损伤后,可使此内向钙电流明显增强,Ｉｐｅａｋ为１７００±４６０ｐＡ,与损伤前相比差异显著（Ｐ＜０．０５,ｎ＝４）,同时此电流的ＩＶ曲线峰值左移,镜下细胞出现明显的形态学改变。先给予１μｍｏｌ／Ｌ硫酸铜溶液灌流２０ｍｉｎ后,由ＩＳＯ损伤引起的内向钙电流的幅度降低,Ｉｐｅａｋ为６８５±１２０ｐＡ,与ＩＳＯ损伤相比,差异显著（Ｐ＜０．０５,ｎ＝４）。结论：ＩＳＯ可使豚鼠心室肌细胞Ｌ型通道电压依赖性钙电流明显增强,铜离子可对抗由ＩＳＯ引起的钙电流增强,从而对豚鼠心室肌细胞发挥一定的保护作用     

新生大鼠下丘脑GnRH免疫反应性神经元的体外发育

应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术,研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）神经元的体外发育规律。培养１ｄ即可见ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元;１～３ｄ,ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元生长最快,胞体和突起的平均生长速度分别为４５．５９μｍ２／ｄ和１９．３９μｍ／ｄ,染色加深;培养７ｄ,ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰,分别为１７１．２１±４３．１７μｍ２,０．２８９±０．０３４,８７．０１±２２．３３μｍ;培养１４ｄ,ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体大小和突起长度维持在７ｄ时的水平,但染色减弱。结果提示,培养第１周是ＧｎＲＨ神经元体外发育成熟的关键时期,其发育良好状态可维持到第２周末     

5—HT和NA增强大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸门控Cl^—通道电流由蛋白激...

用制霉菌素穿孔膜片钳方法研究５－ＨＴ和ＮＡ对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸门控氯离子通道电流（ＩＧｌｙ）的调控作用及其胞内机制。发现：（１）５－ＨＴ激活与非胰岛激活蛋白（ＩＡＰ）敏感型Ｇ蛋白偶联的５－ＨＴ２受体亚型,激活磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）,增加甘油二酯（ＤＡＧ）的生成。ＤＡＧ增强不依赖Ｃａ＾２＋的新型ＰＫＣ（ｎＰＫＣ）的活性,从而增强ＩＧｌｙ;（２）ＮＡ激活与ＩＡＰ敏感型Ｇ蛋白偶联的α２受     

外源性神经节苷脂对人－肝癌培养细胞内钙的作用及其方式

本工作采用荧光探针Ｆｕｒａ－２ＡＭ观察了外源性神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３对ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌培养细胞钙的影响,证明ＧＭ３和ＧＤ３均能升高细胞内钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,但程度上有极大差异。１０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＭ３或１．０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＤ３可使［Ｃａ２＋］ｉ上升高是明显,与对照相比［Ｃａ２＋］ｉ分别增加２１５～２５０％和４２％。进一步用Ｖｅｒａｐａｍｉｌ阻断钙通道和内质网钙释放、去除细胞外Ｎａ＋以抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换以及去除细胞外Ｃａ２＋在无外钙内流等系统观察了ＧＭ３和ＧＤ３的作用方式,结果提示ＧＭ３升高［Ｃａ２＋］ｉ的机制是一个同时增加内质网钙释放、激活钙通道并伴有质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶激活的综合结果;而ＧＤ３则主要抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换系统。