GDNF重组腺病毒的构建及促进多巴胺能神经元存活的研究

利用体内同源重组原理,构建了能介导ＧＤＮＦ基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ,其中ＧＤＮＦｃＤＮＡ插入腺病毒基因组的Ｅ１区并由ＣＭＶ启动子控制在人２９３细胞内通过同源重组包装生成重组腺病毒后,用形态学方法、病毒ＤＮＡ酶切分析、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法进行鉴定正确．经测定病毒滴度达到１０１０ｐｆｕ／ｍｌ．用免疫沉淀方法从重组腺病毒感染的２９３细胞及其培养基上清中均检测到大量ＧＤＮＦ蛋白．用重组腺病毒直接感染或者用其条件培养基处理,分别使胚胎大鼠中脑原代多巴胺能神经元的数目增加８８．２％和９６．４％,明显增加多巴胺能神经元存活,对帕金森氏病基因治疗具有重要意义     

GDNF重组腺病毒增加MN9D细胞多巴胺合成与释放

有表达ＧＤＮＦ的重组腺病毒直接感染中脑多巴胺能神经元来源的ＭＮ９Ｄ细胞并经神经毒素ＭＰＰ＋处理．感染３６ｈ分别收获细胞及其培养基,用反相高效液相色谱方法测定多巴胺含量．结果显示,经ＧＤＮＦ重组腺病毒感染的ＭＮ９Ｄ细胞内及其培养基中的多巴胺水平分别增加５０．７％和５３．５％．给予神经毒素ＭＰＰ＋损伤后,细胞内多巴胺含量降低５３．５％,但同时给予ＧＤＮＦ腺病毒则可抑制这种降低,并使多巴胺水平增加１４１．３％．以上结果提示ＧＤＮＦ腺病毒可提高细胞内的多巴胺水平并促进其释放,同时还具有对抗神经毒素ＭＰＰ＋损伤作用,表明ＧＤＮＦ重组腺病毒用于帕金森氏病基因治疗具有良好的前景．     

无毛小鼠不同年龄皮肤结构的比较研究

采用组织学方法对１月龄、２月龄、老龄豫医无毛小鼠皮肤结构进行了比较,结果发现,各年龄段表皮均有一层角化过度的角质层,毛干消失,毛球结构不正常,毛囊被一些角化物质充填。但真皮层差别很大。１月龄皮肤为肉色偏红,切片可见表皮层较厚,真皮内没有包囊;２月龄皮肤为肉色,表皮层较１月龄薄,毛囊腔大,真皮深层及皮下组织内有一些大小不等的包囊;老龄鼠皮肤为淡黄色,头部和体侧形成特别皱纹和褶痕,皮肤脆性大,易撕裂,表皮层薄,角化严重,真皮层被包囊扩张。包囊直径约为２月龄的４倍,内含一些角化物和脂肪样物质     

不同免疫力小鼠肾包膜下移殖人食管癌细胞株Ecal09的生长观察

结果显示将Ecal69移植于鼠肾包膜下,裸小鼠对移植瘤无排异反应,肿瘤持续生长;正常免疫力鼠移植瘤在6d时达生长高峰,并有炎症细胞浸润及结缔组织增生;免疫抑制鼠移植瘤于第8～10天达生长高峰,瘤体生长较大,提示免疫抑制鼠的免疫反应出现时间可较正常免疫力鼠推迟2～4d,故免疫抑制鼠可代替裸鼠用于短期肿瘤移植实验,优于正常免疫力小鼠。