松杉灵芝发酵菌丝体中水溶多糖的分离纯化与结构的比较研究

松杉灵芝发酵菌丝体经热水提取,冻融分级及乙醇二次分级,分离纯化出GFb级份,电泳及凝胶柱层析示其为均一多糖,分子量为9.8万。小于子实体多糖相应级份。 GFb经红外光谱,气相色谱,气质联机,碳13核磁共振,高碘酸盐氧化,Smith降解,甲基化及部分酸水解分析,确定其基本结构中主链为1→6葡萄糖基和1→6半乳糖基构戍,二者之比为1∶1,分支点在0-3位上,分枝点率为50％,与子实体多糖GF_3相同,侧链由1→3葡萄糖基,1→4葡萄糖基,末端葡萄糖基及末端半乳糖基构成,分子中分枝率为55.6％,较子实体多糖GF_3分枝率略低,分枝链略短。     

树舌多糖Fb、Fc的结构研究

从树舌子实体中分离纯化出另两个级分Ｆｂ、Ｆｃ,经超速离心,电泳,ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析等确定其均为质点、极性均一级分。经ＧＣ、ＩＯ＿４～－氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,部分酸水解,甲基化及其产物ＧＣ,ＧＣ－ｍｓ分析,ＩＲ等分析确定Ｆｂ是由１→３甘露糖基构成主链,分枝点率及分枝率均较大;Ｆｃ由１→６和１→４甘露糖基构成主链,分枝点率及分枝率较少。     

树舌多糖Fb、Fc的结构研究

从树舌子实体中分离纯化出另两个级分Ｆｂ、Ｆｃ经超速离心,电泳,ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析等确定其均为质点、极性均一级分。经ＧＣ、ＩＯ４＾－氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,部分酸水解,甲基化及其产物ＧＣ、ＧＣ－ｍｓ分析,ＩＲ等分析确定Ｆｂ是由１→６和１→４甘露糖基构成主链,分枝点率及分枝率较少。     

当归水溶性多糖级分As-Ⅲa和As-Ⅲb的纯化鉴定与结构研究

当归热水抽提得到的粗多糖,经乙醇分级沉淀,ＤＥＡＥ纤维素分离和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱层析纯化,得到水洗脱级分Ａｓ—Ⅲａ和碱洗脱级分Ａｓ—Ⅲｂ两个多糖级分。经测定这两级分为均一组分。红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰。气相色谱分析表明Ａｓ—Ⅲａ由葡萄糖组成,Ａｓ—Ⅲｂ由葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖组成。高碘酸氧化及Ｓｍｉｔｈ降解分析表明Ａｓ—Ⅲａ的单体通过α（１→３）糖苷键相连,Ａｓ—Ⅲｂ主要通过（１→４）和（１→６）糖苷键相连。     

山豆根木葡聚糖的研究

研究了山豆根中一种木葡聚糖的结构．用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ提取,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析,Ｆｅｈｌｉｎｇ试剂分级得到山豆根木葡聚糖组分ＳＳｂ－１ＦＡ,用完全酸水解,甲基化分析,部分酸水解,三氧化铬氧化和１Ｈ,１３ＣＮＭＲ等方法对其结构进行研究．结果表明：ＳＳｂ－１ＦＡ的分子量为２．６×１０４,比旋光度［α］２０Ｄ＝＋１０．９°（ｃ０．２２,Ｈ２Ｏ）,由Ｌ－Ｆｕｃ,Ｄ－Ｘｙｌ,Ｄ－Ｇａｌ和Ｄ－Ｇｌｃ组成,摩尔比为：２．９２９．９７．５５９．８．ＳＳｂ－１ＦＡ由１→４连接的β－Ｄ－Ｇｌｃ残基构成主链,分枝有α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→,β－Ｄ－Ｇａｌ（１→２）α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→等类型,部分非还原末端由Ｌ－Ｆｕｃ（１→构成．     

滇重楼地上部分的配糖体

从滇重楼ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳｍ．ｖａｒ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒ．）Ｈ－Ｍ,地上部分,分离出４个微量的配糖体,经光谱分析和化学降解证明其化学结构分别为２５Ｓ－异钮替皂甙元－３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→２）［α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→４）］－β－Ｄ－葡萄吡喃甙（Ａ）,２６－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基－纽替皂甙元－３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→２）［α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→４）－β－Ｄ－葡萄吡喃糖甙（Ｂ）,山奈酚－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→６）－β－Ｄ－葡萄吡喃甙（Ｃ）,７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基－山奈酚－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→６）－β－Ｄ－葡萄糖甙（Ｄ）。     

仙茅根茎中的配糖体

从仙茅（ Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ ｏｒｃｈｉｏｉｄｅｓＧａｅｒｔｎ） 根茎中分离到７ 个化合物, 经光谱分析推定其化学结构分别为： ２, ６ － 二甲氧基苯甲酸（Ａ） ; 苔黑酚葡萄糖甙（Ｂ） ; 仙茅素Ａ （Ｃ） ; 仙茅甙（Ｄ） ; ２４ｓ, ３β, １１α, １６β, ２４ － 四羟基环阿尔廷醇－ ３ － Ｏ－ α－ Ｌ－ 鼠李吡喃糖基（１ →２） － β－Ｄ－ 葡萄吡喃糖甙（Ｅ） ; ２４ｓ, ３β, １１α, １６β, ２４ － 四羟基环阿尔廷醇－ ３－ Ｏ－ β－ Ｄ－ 葡萄吡喃糖基（１ →２） － β－ Ｄ－ 葡萄吡喃糖甙（Ｆ） 和胡萝卜甙（Ｇ） 。Ｆ为一新甙。     

碱提水溶小皮伞多糖B_3的研究

用ＧＣ,ＩＲ,ＮＭＲ,ＧＣ－ＭＳ及高碘酸氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,甲基化分析,部分酸水解等方法确定了一个新的碱提水溶小皮伞多糖的一级结构：分子主链α－Ｄ－（１→２）Ｍａｎ,支链α－（１→４）,α－（ａ→６）Ｇｌｃ,且均连在主链的０─６上。     

锌酵母中酵母甘露多糖组分的特征和结构

本文研究从锌酵母中分离出的酵母甘露多糖ＸＰ的特征和结构。ＸＰ经全水解和＾１３ＣＮＭＲ谱显示除甘露糖基外,还有少量Ｌ－鼠李糖基和甲氧基。甲基化分析、过碘酸盐氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、乙酰解和部分酸水解显示ＸＰ的主链是１→６连接的甘露糖,侧链是１→２连接的甘露糖。＾１Ｈ及＾１３Ｃ ＮＭＲ谱表明所有糖苷键均为α型,结合元素分析ＸＰ基本是酵母甘露多糖和蛋白质以及锌的络合物。     

柴胡皂甙s的结构鉴定

从南柴胡（ＢｕｐｌｅｕｒｕｍｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍＷｉｌｄ．）根中分得５个三萜皂甙。根据理化性质和波谱数据,鉴定其中新皂甙为３β,１６α,２３,２８四羟基齐墩果烷１１,１３（１８）二烯３ＯβＤ吡喃葡萄糖基（１→６）［αＬ吡喃鼠李糖基（１→４）］βＤ吡喃葡萄糖甙,命名为柴胡皂甙ｓ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｓ）。另４个皂甙分别为柴胡皂甙ａ、ｃ、ｂ１、ｂ２。     

绒毛石耳多糖UV—2和UV—3的分离纯化及其性质

从绒毛石耳（Ｕｍｂｉｌｉｃａｒｉａ　　ｖｅｌｌｅａ（Ｌ）Ａｃｈ．）提取的水溶性粗多糖,经乙醇分级沉淀和ＤＥＡＥ一纤维素柱层析得到两个组分（ＵＶ－２和ＵＶ－３）,经ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ柱层析和超速离心沉降鉴定为均一组分。通过糖组成分析、高碘酸盐氧化、Ｓｍｉｔｈ降解和甲基化分析证明,它们是带有部分乙酰基团的多分枝结构的杂多糖,ＵＶ－２的主链是由β（１→３）连接的葡萄糖和甘露糖残基构成,ＵＶ－３的主链是由β（１→３）（１→４）连接的葡萄糖残基构成。药理试验结果表明,ＵＶ－２具有增强免疫作用,能够明显促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,提高淋巴细胞的转化率。     

碱提水溶小皮伞多糖B3的研究

用ＧＣ,ＩＲ,ＮＭＲ,ＧＣ－ＭＳ及高碘酸氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,甲基化分析,部分酸水解等方法确定了一个新的碱提水溶小皮伞多糖的一级结构,分子主链α－Ｄ－（１→４）。α－（ａ→６）Ｇｌｅ,且均连在主链的０－６上。     

丙型肝炎病毒C33_c单克隆抗体的研制和鉴定

用丙型肝炎病毒重组蛋白Ｃ３３_ｃ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,运用杂交瘤技术成功地建立了７株能稳定分泌抗Ｃ３３_ｃ单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｈ６Ｄ２、２Ｇ１Ａ６、３Ａ４Ａ８、３Ｅ３Ｅ７、４Ｇ１２Ｃ１０、４Ａ１０Ｃ２、５Ｆ４Ｂ６．试验结果表明,７株ＭｃＡｂｓ具有良好的ＨＣＶ特异性,间接ＥＬＩＳＡ法测得小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１：１０￣４－１：４×１０￣４;竞争抑制实验和相加指数测定证实７株ＭｃＡｂｓ识别相关的抗原表位;７株ＭｃＡｂｓ中１株为ＩｇＭ（５Ｆ４Ｂ６）,其它６株为ＩｇＧ（２ａ）。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)融合蛋白的高效表达及鉴定

碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）参与了许多细胞生长和分化的调控过程。本文采用重组ＤＮＡ技术在大肠杆菌中高效表达了人ｂＦＧＦ。首先将编码人ｂＦＧＦ基因克隆到ｐＸＴ表达载体中与其上游的一短Ｓ导肽共一阅读框架,ｂＦＧＦ基因的表达受强的Ｔ７启动子调控。采用ＢＬ２１（ＤＥ３）大肠杆菌作为宿主菌,用ＩＰＴＧ诱导ＢＬ２１（ＤＥ３）细菌合成的Ｔ７ＲＮＡ聚合酶,后者可催化高水平的ｂＦＧＦ基因表达,其ｂＦＧＦ产量可占总菌体蛋白的４２.５％。采用肝素Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ一步亲和层析法直接从诱导后的细菌裂解产物中得到纯化的重组人ｂＦＧＦ蛋白。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析证明该蛋白可被人ｂＦＧＦ特异性单克隆抗体所识别。进一步研究证明该蛋白具有刺激ＮＲ６Ｒ－３Ｔ３成纤维细胞增殖的生物学活性,并且这一活性可被人ｂＦＧＦ特异性中和抗体所中和。     

金顶侧耳多糖PC—4的结构确定与抗肿瘤活性的研究

３％氯乙酸浸提过的金顶侧耳子实体中分离纯化另一水溶性多糖ＰＣ－４。该多糖分子量经为１８９ｋＤ。纸层析与气相层析分析表明其为单一聚糖。经高磺酸氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,甲基化,层析,气质联机分析,核磁其振（Ｈ－ＮＭＲ,１３Ｃ－ＮＭＲ）谱及红外光谱测定等,可确定Ｃ－４的主链结构由β－（１→３）糖苷键相连的葡萄糖构成,部份残基Ｃ６,上带有分支。约每５个糖残基有两个侧链,侧链仅为１个葡萄糖残基。     

蜘蛛抱蛋根茎中的甾体皂甙

从蜘蛛抱蛋（ＡｓｐｉｄｉｓｔｒａｅｌａｔｉｏｒＢｌ．）根茎的甲醇提取物中分离得两个甾体皂甙。经波谱解析及化学降解证明其化学结构分别为薯芋皂甙元一３一Ｏ－［Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→２）］－［Ｂ－Ｄ－木吡喃糖基（１→３）］－Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→４）－Ｂ－Ｄ一半乳吡喃糖甙（即蜘蛛抱蛋甙ａｓｐｉｄｉｓｔｒｉｎ）及新静诺特皂甙元－３－Ｏ－［Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→２）］～［Ｂ－Ｄ－木吡喃糖基（１→３）－Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→４）一Ｂ－Ｄ－半乳吡喃糖甙,后者为一新试,命名为新蜘蛛抱蛋甙ｒｅｏａｓｐｉｄｉｓｔｒｉｎ。     

香菇菌丝体多糖的分离鉴定与免疫功能研究

从香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌丝体提取得到的粗多糖,经ＤＥ５２柱层析,得到均一的多糖成分,命名为ＬＥ。其平均分子量为５．０８×１０５,ＬＥ经红外（ＩＲ）和紫外（ＵＶ）光谱分析,为多糖蛋白质复合体,其中糖含量为９４．２％,蛋白质含量为５．８％。完全酸水解表明糖组成为单一的葡萄糖,蛋白质组成主要为Ａｌａ等１６种天然氨基酸。ＬＥ经完全甲基化、酸水解、乙酰化、薄层层析（ＴＬＣ）和［１Ｈ］核磁共振（［１Ｈ］ＮＭＲ）分析,确定其多糖部分的基本结构为１→３连接的葡聚糖,含有部分１→６侧链。此外,用反转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）和生物测定法分别研究了健康人外周血单核细胞中白细胞介素２（ＩＬ２）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）的基因表达和活性,结果发现ＩＬ２和ＴＮＦα的基因表达和活性均高于空白对照组,这表明ＬＥ可诱导某些免疫反应。     

黄花远志茎皮的寡糖酯和酚类成分

从云南产黄花远志（Ｐｏｌｙｇａｌａ ａｒｉｌｌａｔａ）茎皮的乙醇提取物中分离到１５个化学成分。包括糖酯类、Ｓａ酮类、酚甙、木脂素甙类以及脂肪酸类化合物。其中,７个新化合物分别命名为黄花远志素（ａｒｉｌｌａｎｉｎ）Ａ（３）,Ｂ（６）,Ｃ（７）,Ｄ（４）,Ｅ（５）,Ｆ（８）和Ｇ（１１）。１－Ｏ－α－Ｌ－阿拉伯吡喃糖基（６→１）－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基－水杨酸甲酯（９）亦未见曾从植物中分离的报道。     

短裙竹荪多糖Dd—S3P的分离纯化及其性质研究

短裙竹荪子实体经２％Ｎａ２ＣＯ３溶液提取,用蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合除去蛋白,乙醇分级沉淀,级分３经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５柱层析纯化得到的短裙竹荪多糖Ｄｄ－Ｓ３Ｐ。经测定该多糖为均一组分,分子量约为３．８×１０＾５,红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰,含有α－型糖苷连接键,紫外扫描无核酸和蛋白质的特征吸收峰。     

镰孢属几种植物病原真菌分子核型的研究*

利用脉冲电场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ－ｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,ＰＦＧＥ）,研究了４株串珠镰孢（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、１株尖镰孢（F．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、１株茄镰孢（Ｆ．ｓｏｌａｎｉ）和１株Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．的分子核型以及不同地域和寄主来源的串珠镰孢种内菌株间的分子核型差异。以凝胶包埋法（不破除分生孢子细胞壁）制备供试菌株电泳样本,采用３组条件组合进行电泳,分离出供试串珠镰孢完整染色体ＤＮＡ１０～１３条,分子量分布范围０．７Ｍｂ～６．９Ｍｂ,基因组大小为４２．２６Ｍｂ～４７．７５Ｍｂ;尖镰孢８条,分子量分布范围１．２Ｍｂ～６．７Ｍｂ,基因组大小为３２．２５Ｍｂ;茄镰孢６条,分子量分布范围２．４Ｍｂ～６．３Ｍｂ,基因组大小为２５．２Ｍｂ;Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．９条,分子量分布范围０．８Ｍｂ～６．８Ｍｂ,基因组大小为３６．４５Ｍｂ。结果表明,供试４种镰孢菌染色体数目、ＤＮＡ分子量及基因组大小都有较大不同,分子核型差异较大。不同来源的串珠镰孢种内菌株间分子核型亦有明显差异。