S-PI对香菇酸性蛋白酶的抑制机理及其促进出菇的生化解释

S-PI对纯化的香菇酸性蛋白酶具有强烈的抑制作用,10μmol／L的S-PI可使酶活降低77％,这种抑制属于可逆竞争抛物线型抑制。经25μmol／L酸性蛋白酶水解6小时后,香菇胞外酸性磷酸酶的活性从24．6单位降低到20．8单位,同时C1酶和Cx酶的活性分别比对照降低了76％和58％,这表明香菇酸性蛋白酶不仅直接左右着香菇发育的氮代谢,同时也间接地影响着碳代谢及能量转换。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的纯化及其性质研究

水稻的糠皮和胚经生理盐水浸取、离心后的上清液加热至８０℃处理１０ｍｉｎ,离心获得的上清液调ｐＨ至８．０,得到沉淀。沉淀溶解于０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ,经透析冷冻干燥得水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）粗品;粗品再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱线性离子梯度洗脱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ上均为单一蛋白带的ＣＰＩ样品。经上述步骤,ＣＰＩ可被纯化５８倍。经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量均为１２０００,Ｎ末端氨基酸为Ｐｒｏ,等电点５．６．水稻ＣＰＩ经１００℃处理１０ｍｉｎ后,其抑制活性无任何变化,在ｐＨ２．０～９．０之间,活性也不发生改变,但ｐＨ在９．０以上,其活性逐渐下降,水稻ＣＰＩ对木瓜蛋白酶是一种高亲和性的抑制剂,它对木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶有强抑制作用,对菠萝蛋白酶仅有弱抑制作用,但对胰蛋白酶则全无抑制作用;其抑制类型属竞争性抑制剂类型,Ｋ＿ｉ值约３．５×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比约为１：１。     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化和基本性质

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为ｐＨ８．３和ｐＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别为２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．０μｍｏｌ／Ｌ：Ｖｍａｘ为７６３０单位／毫克;ｋｏａｔ为９Ｓ－１。ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力对ＡＴＰ和Ａｒｇ的Ｋｍ分别为８．３ｍｍｏｌ／Ｌ和９９μｍｏｌ／Ｌ;Ｖｍａｘ为１６３２０单位／毫克;ｋｃａｔ为１８Ｓ－１。     

钙通道阻滞剂对肾上腺素能受体激动剂促血管平滑肌细胞增值的抑制

本工作观察到１０－６—１０－５ｍｏｌ／Ｌ去甲肾上腺素（ＮＥ）和１０－７—１０－５ｍｏｌ／Ｌ异丙基肾上腺素（ＩＳＯ）可明显促进离体培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖和ＤＮＡ的合成,并呈剂量依赖效应,该效应可为相应的受体阻断剂ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｐｒｏｐｔａｎｏｌｏｌ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）所抑制;ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｖｅｒａｒｏｍｉｌ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）分别与同样浓度的ＮＥ同时加入细胞培养液中,其细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入率分别较单用ＮＥ时显著降低（Ｐ＜０．０１）,ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ与ｖｅｒａｐａｍｉｌ亦明显抑制ＩＳＯ促ＶＳＭＣ增殖的作用。     

百合巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质研究

百合的鳞茎中含有一种对木瓜蛋白酶有强抑制作用的巯基蛋白酶抑制剂．百合的鳞茎经浸取加热处理,木瓜蛋白酶偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析,可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均为单一蛋白带的百合巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）．此ＣＰＩ为单链蛋白,含有０．３０７％的中性糖;Ｎ端氨基酸为Ｉｌｅ;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１２０００;ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００测得分子量为１２５００．百合ＣＰＩ在１００℃内和ｐＨ２～１２范围内非常稳定;对木瓜蛋白酶的抑制属竞争性抑制类型,其Ｋｉ值为１．１５×１０~（－９）ｍｏｌ／Ｌ,对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比为８．５：１．     

抗旱性不同的两个大豆品种对外源H2O2的响应

两个品种的大豆叶圆片经１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ和１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２处理１２ｈ后,超氧化岐化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）与谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性明显增加,但１０＾－２ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２处理却使这些酶活性降低。抗旱性较强的大豆品种小粒豆１号较抗旱性较弱的鲁豆４号能维持较高的叶绿素含量和较高的ＳＯＤ、ＣＡＴ及ＧＲ活性,对Ｈ２Ｏ２的抗性较强。５０μｍｏｌ／Ｌ的亚胺环已酮（ＣＨＭ）能消除     

铝对玉米生长和硝酸还原酶活性的影响

测定了生长在Ａｌ２（ＳＯ４）３１００μｍｏｌ／Ｌ氮素营养液中的两个玉米品种（ＳＣ７０４和ＶＡ３５的根系和叶片）的ＮＡＤＨ－硝酸还原酶（ＥＣ１．６．６．１）和ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－硝酸还原酶（ＥＣ１．６．６．２）活性。     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带,在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ,酶反应的最适ｐＨ在５．８附近,最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力,Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力,根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰     

SNP抑制5-HT诱导的胞内游离钙浓度升高和内钙释放

用Ｆｕｒａ － ２／ＡＭ 荧光测量技术研究了５ － 羟色胺（５－ ＨＴ） 诱导的大鼠尾动脉平滑肌细胞胞内钙升高和一氧化氮（ＮＯ） 的抑制效应。实验表明, 胞外０ｍ ｍｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 时胞内静息［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 为２０ ．２±８ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ８） 。１０μｍｏｌ／Ｌ ５－ ＨＴ 可诱导出胞内钙库释放引起的瞬态［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值达２４５ ．７ ±７１．６ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ６） 。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ 硝普钠（ＳＮＰ） 可抑制５－ ＨＴ 诱导的［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值浓度降为７５．１±３５ ．９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ５） 。当细胞浴液含２．５ｍ ｍｏｌ／Ｌ Ｃａ２ ＋ 时,静息［Ｃａ２ ＋］ｉ为１１２ ．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ５） , 这时１０μｍｏｌ／ Ｌ ５ － ＨＴ 可诱导［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 的峰值为２５２ ．３ ±８０ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,以及其后平台浓度为１４３ ．０ ±３７ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,略大于［Ｃａ２ ＋］ｉ 为１１２．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／Ｌ 的静息浓度,为外钙内流引起。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ ＳＮＰ 也可抑制５－ ＨＴ 诱导［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 平台相浓度。平台浓度由１４３ ±４７     

旋扭山绿豆根瘤菌MXDI6菌株氢酶诱导表达

在自生异养条件下,旋扭山绿豆根瘤菌ＭＸＤＩ６菌株的氢酶诱导表达受气相、ｐＨ值、镍等因子影响：氢酶表达的最适氧浓度为４％,最适氢浓度为１５％,二氧化碳没有明显影响;氢酶表达的ｐＨ值以５．０—６．０为宜;０．５μｍｏｌ／ＬＮｉＣｌ２明显促进吸氢活性,但镍浓度大于１μｍｏｌ／Ｌ则抑制吸氢活性．     

Ebselen和谷胱甘肽对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制和终止作用

研究了人工合成的谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）模拟物－ｅｂｓｅｌｅｎ及其辅助因子谷胱甘肽（ＧＳＨ）对Ｃｕ＾２＋及紫外线（ＵＶ）诱导的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的抑制和终止作用。结果显示：在ＧＳＨ存在的情况下,低至５μｍｏｌ／Ｌ的ｅｂｓｅｌｅｎ就可完全抑制由５μｍｏｌ／Ｌ Ｃｕ＾２＋引发的ＬＤＬ氧化修饰,单独的ｅｂｓｅｌｅｎ和ＧＳＨ没有抑制如果,５０μｍｏｌ／Ｌ的维生素Ｅ只有很微弱的抑制作用。     

野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

野花生豆凝集素（ＣＭＬ）经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００测得分子量为１０３．ＯｋＤ．用对二甲基氨基苯甲醛（ＤＡＢ）为显色剂,测得每个ＣＭＬ分子含有５．９个色氨酸残基．在ｐＨ５．１,含８ｍｏｌ／Ｌ脲的醋酸缓冲液中,Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）可修饰ＣＭＬ分子中的５．６个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,同时使ＣＭＬ的凝血活性完全丧失．用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）和Ｎ－乙酰顺丁烯酰胺（ＮＥＭ）分别修饰ＣＭＬ的组氨酸残基和半胱氨酸巯基后,ＣＭＬ的活性均无变化．ＣＭＬ在天然状态下荧光发射峰位于３３６ｎｍ处,用ＣＭＬ的专一性抑制糖Ｎ－乙酰半乳糖胺研究色氨酸的微环境,发现Ｎ－乙酰半乳糖胺可以淬灭ＣＭＬ中８８％的色氨酸残基萤光,Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ常数Ｋ＝１．７３Ｌ／ｍｏｌ．同时发现Ｎ－乙酰半乳糖胺能够保护ＣＭＬ,避免ＮＢＳ对ＣＭＬ的修饰作用,表明色氨酸可能是ＣＭＬ维待活性所必需,并直接参与和专一性抑制糖的结合,其微环境较为疏水．     

抗旱性不同的两个大豆品种对外源H_2O_2的响应

两个品种的大豆叶圆片经１０－４ｍｏｌ／Ｌ和１０－３ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２处理１２ｈ后,超氧物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）与谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性明显增加,但１０－２ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２处理却使这些酶活性降低。抗旱性较强的大豆品种小粒豆１号较抗旱性较弱的鲁豆４号能维持较高的叶绿素含量和较高的ＳＯＤ、ＣＡＴ及ＧＲ活性,对Ｈ２Ｏ２的抗性较强。５０μｍｏｌ／Ｌ的亚胺环已酮（ＣＨＭ）能消除Ｈ２Ｏ２对ＳＯＤ、ＣＡＴ与ＧＲ活性的刺激作用,而同样浓度的放线菌素Ｄ（ＡＭＤ）则不能。     

钙通道阻滞剂对肾上腺素能受体激动剂促血管平滑肌细胞增殖的抑制

本工作观察到１０＾－６－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ去甲明上腺素（ＮＥ）用１０＾－７－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ异丙基肾上腺素（ＩＳＯ）可明显促进离体培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖和ＤＮＡ的合成,并呈剂量依赖效应,该效应可为相应的受体阻断剂ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ（１０＾－６ｍｏｌ／ｌ）和ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）所抑制;ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｖｅｒａｐａｍｉ     

虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛和阳离子交换高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛毒液中分离提纯透明质酸酶。经等电聚焦电泳为一条带,ＰＩ＝７．２,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ,经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ＰＨ３．５－５．５范围内有较大活性,最适ＰＨ值４．０,在ＰＨ４．５－６．０范围内稳定,在反应温度为３０－６０℃时有较大活性,最适温度为５０℃;对热稳定。０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活     

大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化…

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ－ＰＰｉ交换活力的最适ＰＨ分别为ＰＨ８．３和ＰＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．     

表皮生长因子对离体大鼠肺动脉及肺动脉平滑肌细胞作用的研究

本研究着重探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）对大鼠肺动脉的收缩作用及对肺动脉平滑肌细胞分裂增殖的影响。浓度为１×１０－９－１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ的ＥＧＦ可引起大鼠肺动脉剂量依赖性收缩（ｒ＝０．９６８,Ｐ＜０,００１）,其Ｅｍａｘ为１００．６ｍｇ,ＥＣ５０为１１．９６ｎｍｏｌ／Ｌ。在同时存在０．５％胎牛血清（ＦＣＳ）时,ＥＧＦ能促进平滑肌细胞的３Ｈ－ＴｄＲ参入率,该作用与剂量呈正相关（ｒ＝０．８２３,Ｐ＜０．０５）,其ＥＣ５０为６．５×１Ｏ－１２ｍｏｌ／Ｌ。１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ的ＥＧＦ＋０．５％ＦＣＳ能产生与１０％ＦＣＳ相当的促细胞分裂增殖能力（在培养的第１,３,５,７天,二者促分裂增殖能力相差不明显,Ｐ均＞０．０５,第９天时,前者大于后者,Ｐ＜０．０５）。１×１０－９ｍｏｌ／ＬＥＧＦ单独存在时对平滑肌细胞未显示出明显的致分裂活性。上述作用提示ＥＣＦ在某些肺血管病变如缺氧性肺动脉高压中可能有一定意义。     

CD自杀基因系统对胶质瘤细胞作用的实验研究

将含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＥＣ－ＣＤ）基因的重组逆转录病毒感染大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６,获得稳定表达ＣＤ的克隆细胞Ｃ６／ＣＤ。ＣＤ可以将无毒性的原药５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）转化成高度细胞毒性物质５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）。生长抑制试验表明Ｃ６／ＣＤ细胞对５－ＦＣ高度敏感。ＩＣ５０为３μｍｏｌ／Ｌ,５－ＦＣ对Ｃ６细胞基本无毒性,ＩＣ５０近６０００μｍｏｌ／Ｌ;而Ｃ６／ＣＤ和Ｃ６细胞均低浓度５０ＦＵ敏感。     

5－羟色胺对大鼠下丘脑脑片弓状核神经元自发电活动的影响

在７４张大鼠下丘脑脑片上,用玻璃微电极记录到弓状核自发放电单位１７６个,其放电形式有三种：慢不规则型（１１９个,６７．６％）;快连续型（４６个,２６．１％）;位相型（１１个,６．３％）。５－ＨＴ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ,３ｍｉｎ）对不同形式放电单位的作用均以抑制为主：对部分慢不规则单位（９／１１９）则表现为先抑制后兴奋的双相性反应,对少数神经元有兴奋作用。１２个被５－ＨＴ抑制的单位,其抑制作用不能被噻庚啶（ＣＨＤ,１０－５ｍｏｌ／Ｌ）阻断,４个被５－ＨＴ抑制的的单位中,其抑制作用可被二甲基麦角新碱（ＭＳＧ１０－６ｍｏｌ／Ｌ）部分或完全阻断。７个被５－ＨＴ抑制的单位,其中４个单位中,５－ＨＴ的抑制作用可被特异性５－ＨＴ１Ａ受体阻断剂Ｐｉｎｄｏｂｉｎｄ－５－ＨＴ１Ａ部分阻断;但另外３个单位的阻断效果不明显。上述结果表明：５－ＨＴ对弓状核不同形式放电单位的作用均以抑制为主,其作用可能是通过５－羟色胺（５－ＨＴ１）受体介导的,部分还可能是通过５－ＨＴ１Ａ受体介导的。