产前应激子代大鼠海马核转录因子-κB表达的性别差异

本研究采用免疫组织化学和Western blot检测NF-κB p65/p50在产前应激子代海马的表达,并探讨其表达是否存在性别差异。研究结果显示,在雌性子代,中、晚期应激组海马齿状回p65表达显著低于对照组（P〈0．01）,而海马各区p50表达均显著高于对照组（P〈0．01）,中、晚期应激组间p65和p50表达均有显著差异（P〈0．01）。在雄性子代,中、晚期应激组海马齿状回p65表达显著高于对照组（P〈0．01）,晚期应激组海马各区p50表达均显著低于对照组（P〈0．05,P〈0．01）,中、晚期应激组间p65和p50表达均有显著差异（P〈0．01）。雌、雄子代比较,对照组雌、雄p65表达差异极显著妒〈0．01）,p50仅在海马CA1区表达差异极显著（P〈0．01）;中期应激组雌、雄子代大鼠海马p65／p50表达无显著差异;晚期应激组雌、雄海马p65／p50表达均有极显著差异（P〈0．01）。Western blot与免疫组织化学结果基本一致。结果表明,产前不同时期的应激显著影响子代海马NF-κB p65和p50表达,且有性别差异,这可能是产前应激对子代雌、雄大鼠学习记忆能力影响差异的机制之一。     

产前束缚应激子代大鼠海马神经颗粒素表达降低

神经颗粒素（neurogranin,NG）是脑特异性突触后蛋白,参与在学习记忆功能中起核心作用的信号转导通路及突触可塑性。本研究旨在探讨产前束缚应激对子代大鼠海马NG表达的影响。连续7d对孕晚期大鼠进行束缚应激,建立产前束缚应激模型,分为对照雌、雄组,应激雌、雄组。采用免疫组化方法观察NG在产前束缚应激子代大鼠海马不同亚区的分布特点;采用蛋白免疫印迹方法检测产前束缚应激子代大鼠海马NG蛋白的表达。结果显示：各组子代大鼠海马各区均有NG蛋白表达,CA1和CA3区表达高于齿状回（dentate gyrus,DG）;应激组雌、雄子代大鼠海马NG的表达明显低于对照组（P〈0．01）,应激组雌性子代比雄性子代减少更显著,对照组雌、雄子代之间无差异。免疫组化与蛋白免疫印迹方法所得结果一致。上述结果表明,NG在产前束缚应激子代大鼠海马表达降低,并且雌性比雄性降低明显,NG对产前束缚应激子代大鼠有差异性调制,NG表达减少可能与产前束缚应激子代大鼠学习记忆能力下降有关。     

产前束缚应激对子代大鼠海马神经干细胞增殖及巢蛋白表达的影响

为了观察产前束缚应激对子代大鼠空间学习记忆能力、海马神经干细胞增殖及巢蛋白表达的影响,将体重240~260 g的Sprague-Dawley雌性母鼠12只随机分成2组,对照组于孕期不做任何处理,束缚应激组于孕14~20 d时给予束缚应激,3次/天,45 min/次。取1月龄子代大鼠进行实验研究。Morris水迷宫定位航行实验结果显示,应激组子代与对照组相比,到达平台的潜伏期延长(P0.05),而在空间探索实验中,应激组子代在原平台象限停留时间与对照组相比无显著差异。免疫组织化学结果显示,应激组雌性子代海马巢蛋白(nestin)和BrdU阳性细胞表达均较对照组显著增加(P0.05),而雄性子代海马nestin和BrdU阳性细胞表达与对照组相比无显著性差异(P0.05)。以上结果提示,产前束缚应激可引起雌性子代大鼠海马神经干细胞数量增加以及增殖能力增强,可能与机体对产前应激所致脑损伤的代偿性反应相关。     

孕前炔雌醇暴露对大鼠子代糖代谢变化和肝脏糖代谢相关基因表达的影响

目的以SD大鼠为模型,观察孕前炔雌醇(ethinyl estradiol,EE)暴露对子代糖代谢变化和肝脏内与糖代谢相关基因表达的影响。方法 52只雌性大鼠随机分为4组:对照组(芝麻油)、50、200、800μg/kg EE组,每天1次,连续灌胃暴露15 d后受孕。在子代出生后第23天(postnatal day,P23)和P25分别进行口服葡萄糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(ITT)实验,并用RT-PCR检测肝脏中糖代谢相关基因表达水平。结果子代雌鼠OGTT:200μg/kg EE组空腹血糖值显著低于对照组(P0.05);800μg/kg EE组第15min血糖值显著高于对照组、50、200μg/kg EE组(P0.01,P0.01,P0.01),50、800μg/kg EE组2 h血糖值显著低于对照组(P0.05,P0.01)。子代雄鼠OGTT:在第15 min,800μg/kg EE组血糖值显著高于对照组(P0.01);第30 min时,200μg/kg EE组血糖值显著低于对照组(P0.05)。子代雌鼠ITT:第15 min时,50、200μg/kg EE组血糖值显著高于对照组(P0.001,P0.01)。子代雄鼠ITT:第30 min时50、200μg/kg EE组血糖值显著高于对照组(P0.01,P0.01)。子代雌鼠RT-PCR:50,200μg/kg EE和800μg/kg EE组Glut2和Lpk mRNA表达水平显著低于对照组(P0.01,P0.05,P0.05);50、200μg/kg EE组Gys2 mRNA表达水平显著低于对照组(P0.01,P0.01)。子代雄鼠RT-PCR:200μg/kg EE组G6pase和Pepck mRNA表达水平显著高于对照组(P0.01,P0.01),50μg/kg EE组Glut2 mRNA表达水平相对于对照组显著降低(P0.01),800μg/kg EE组Gys2 mRNA表达水平显著高于对照组(P0.01)。结论孕前炔雌醇暴露会导致子代雌鼠葡萄糖耐量受损、子代出现胰岛素抵抗及肝脏内糖代谢相关基因表达异常。而且这些效应具有性别差异,子代雌鼠对孕前EE暴露更敏感。     

产前应激引起子鼠的抑郁样行为和HDACs的改变

越来越多的研究发现产前应激(prenatal stress,PS)能引起子代大鼠的抑郁样行为。然而,其脑内潜在分子机制仍有许多不为人知。为了探讨PS对一月龄子代大鼠抑郁样行为及其脑内组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)的影响,本研究选用32只子代雄鼠为研究对象,以每组8只分为4组:对照组(control,C)、产前应激组(PS)、产前应激给丁酸钠(sodium butyrate,Na B)组(PS+Na B)和产前应激给生理盐水(normal saline,NS)组(PS+NS)。所有子鼠在生后第30天进行强迫游泳和高价十字迷宫的行为学检测,然后断头取脑,用RT-PCR检测海马、皮层中HDAC2和HDAC5的基因表达水平。结果表明:与对照组相比,PS子鼠抑郁样行为增加,并伴随着海马HDAC5的过表达,而皮层HDAC5表达没有明显改变;PS子鼠给与Na B腹腔注射后,抑郁样行为改善,海马HDAC5表达也明显降低。HDAC2在各组子鼠的海马和皮层中均没有明显差异。该文不仅揭示了PS通过诱导HDAC5的改变从而引起子鼠的抑郁样行为,同时也为抗抑郁症药物的研究提供新的理论依据和药物靶点。     

产前应激对成年子代大鼠缺血性卒中后细胞凋亡的影响

目的:研究产前应激对雄性子代大鼠大脑中动脉缺血/再灌注后神经功能的影响。方法:SD孕鼠随机进行产前应激处理(孕期每日3次限制活动)和无产前应激处理,并对其雄性子代大鼠采用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血(MCAO)模型,共分为假手术组、产前应激+假手术组、MCAO模型组、产前应激+MCAO组(n=10)。于再灌注24 h后进行神经功能评分,并检测脑梗死面积、神经细胞凋亡情况和凋亡相关蛋白表达。结果:产前应激+MCAO组子代大鼠神经功能评分、脑梗死面积百分比、TUNEL阳性细胞、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)和活化的Caspase 3蛋白表达均较MCAO组显著增加(P0.05),而B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达较MCAO组减少(P0.05)。结论:产前应激可能通过促进子代大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡,加重神经功能缺损。     

产前应激对子代大鼠海马CA3区神经元Ca2+和K+通道的影响

本研究的目的在于探讨产前应激对子代大鼠海马CA3神经元高电压激活(HVA)钙通道、延迟整流钾电流(delayedrectifierpotassiumcurrents,IKD)的影响。产前应激(prenatalstress,PNS)组孕鼠孕晚期给予束缚应激,应用全细胞膜片钳技术进行研究。结果显示产前应激增加了子代海马CA3神经元HVA钙通道峰电流幅值,对照组和产前应激组子代CA3神经元平均最大HVA钙电流峰值分别为-576.52±7.03pA和-702.05±6.82pA(P<0.01)。同时未改变其电导-电压关系,也未改变延迟整流钾通道电流-电压关系、电导-电压关系。结果提示,在胎儿发育的关键时期,给予母体产前应激,引起子代海马神经元HVA钙电流增加,其机制一方面PNS导致皮质酮升高,从而可能增加HVA钙通道mRNA表达;另一方面PNS所致反应性氧化产物(reactiveoxygenspecies,ROS)增多,后者可能通过磷酸化HVACa2 通道亚单位,从而提高HVA钙电流幅值。     

围产期母体染毒双酚A对雄性子代脑内雌激素β受体和芳香酶表达的影响

为了探讨环境雌激素双酚A (bisphenol-A,BPA)对子代发育期脑内雌激素受体(estrogen receptor,ER）和芳香化酶P450arom表达的影响,对妊娠第7天至哺乳期(仔鼠出生后21天)的母鼠灌胃染毒BPA(200、50、5、0.5mg·kg-1/d),用Western-blot法分别检测出生后4、7、14、21、56天雄性仔鼠的海马及前皮层ERβ和P450arom蛋白表达。结果显示,BPA剂量依赖性地上调前皮层和海马P450arom表达,抑制ERβ蛋白表达。在皮层,出生后4~56天各时间点的P450arom和ERβ表达对BPA都很敏感,其中200、50 或5mg·kg原1/d BPA组与对照组相比有显著差异(P＜0.05,P＜0.01 或P＜0.001);在海马内,BPA对生后发育早期P450arom和ERβ表达的影响更为明显,出生后2周内,200 和50mg·kg-1/d BPA组与对照组相比有显著差异(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001)。以上结果提示,母体围产期BPA暴露可通过上调P450arom而促进雄性子鼠皮层和海马的雌激素合成,并由此抑制ERβ表达。这可能是BPA影响雄性子代脑发育的机制之一。     

大鼠产前母体冷应激对子代自发、探索及焦虑行为的影响*

目的: 研究产前冷应激对妊娠大鼠子代行为及情绪的影响。方法: 将6只SPF级Wister妊娠母鼠,随机分为常温对照组和冷应激组,每组3只。常温对照组妊娠母鼠在(22±2)℃的环境中饲养,冷应激组妊娠母鼠在产前7 d置于人工智能气候室(4±0.1)℃中饲养,待产下幼鼠以后,分为常温对照组公鼠(MR,22只),常温对照组母鼠(FR,15只),冷应激组公鼠(MC,15只),冷应激组母鼠(FC,15只)四组,在子代第四周龄时进行旷场实验、高架十字迷宫实验。结果: 在旷场实验中,常温对照组公鼠、母鼠与冷应激组公鼠、母鼠的自发活动、探索行为之间无明显差异(P＞0.05)。在高架十字迷宫实验中,冷应激组公鼠、母鼠的开臂滞留时间、开臂进入次数及路程等总体上显著高于常温对照组公鼠、母鼠(P＜0.05)。结论: 产前母体冷应激对子代自发活动、探索行为及活跃程度无显著影响,但子代出现明显的焦虑行为减少的异常行为。     

创伤后应激障碍大鼠海马与前额叶皮质中OREXIN受体的失调

目的:从食欲素(Orexin, ORX)系统挖掘创伤后应激障碍的神经生物学机制。方法:以单次延长刺激(single prolonged stimulation,SPS)法复制创伤后应激障碍(post traumatic stress disorder,PTSD)大鼠模型,以行为学结合血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶进行模型评价,通过酶联免疫吸附试验(Elisa)分析大鼠血清与脑脊液中OREXIN水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马与前额叶皮质中的Orexin受体基因表达。结果:实验成功的复制了PTSD模型,与对照组相比,模型组大鼠血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶的含量均极显著升高(P0.01),脑脊液中Orexin A、Orexin B的含量均显著升高(P0.01),海马和皮质中ORX1R与ORX2R均极显著下降(P0.01)。结论:PTSD大鼠的应激损伤与Orexin及其受体表达水平的变化密切相关。     

产前850-1900MHz手机暴露对子代大鼠齿状回PCNA和DCX表达的影响

目的：探讨产前手机暴露对子代大鼠海马齿状回增殖细胞核抗原（PCNA）和双皮质素（DCX）表达的影响。方法：构建孕鼠手机射频暴露模型,分为对照组、短时暴露组和长时暴露组（n=6）,短时和长时暴露组于孕第1-17天分别给予6 h/d和24 h/d的手机通话暴露,观察孕鼠的孕期长短、孕期体重增长和各组的胎儿数、胎儿出生体重。1月龄子代大鼠行焦油紫染色观察海马齿状回细胞形态,免疫组化观察齿状回PCNA和DCX表达,Western blot检测DCX和脑源性神经营养因子（BDNF）表达。结果：各组孕鼠的孕期、妊娠期体重增长和各组的胎儿数、胎儿出生体重无显著差异,长时暴露组子代大鼠的齿状回多形细胞层锥形细胞和DCX阳性细胞出现形态改变。与对照组、短时暴露组比较,长时暴露组子代大鼠齿状回PCNA阳性细胞和DCX、BDNF表达均明显减少（P<0.05）。结论：产前长时手机暴露可能通过改变子代大鼠海马BDNF而影响齿状回的PCNA和DCX表达。     

慢性束缚应激大鼠海马脑啡肽mRNA和前强啡肽mRNA 表达及中药复方的影响

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马脑啡肽和前强啡肽mRNA基因表达的变化以及逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸三种中药复方对其的影响.方法:用特制束缚架连续束缚7 d与21 d,每天3 h的方法制作大鼠束缚应激模型;以RT-PCR反应,扩增脑啡肽和前强啡肽基因,同时以β-actin作为内对照,用凝胶图像分析系统进行扫描并分析,把目的基因的光密度与内参照条带的光密度进行比较后进行半定量分析.结果:7 d模型组大鼠海马前强啡肽mRNA的表达明显增强(P＜0.01),21 d模型组海马脑啡呔mRNA和前强啡肽mRNA的表达明显增强(P＜0.01);三个复方均能降低海马内前强啡肽mRNA的表达(P＜0.01),逍遥散和四君子汤能降低脑啡呔mRNA的表达(P＜0.01).结论:逍遥散对脑啡呔mRNA前强啡肽mRNA的基因表达的改善作用明显优于金匮肾气丸组.     

急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤大鼠海马AQP4的表达

目的:探讨大鼠急性酒精中毒合并颅脑外伤后AQP4在海马区表达的变化.方法:健康成年雄性SD大鼠96只,随机分为4组:假手术组(N组)、急性酒精中毒组(A组)、中度创伤性脑损伤组(T组)和急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤(AT组).腹腔注射酒精(2.5g/kg),2h后以重物自由落体击打大鼠头部建立急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)动物模型.各组动物分别存活1、3、5、14天.免疫组化方法检测海马CAI区AQP4的表达.结果:AQP4阳性产物分布于胶质纤维和毛细血管壁,各实验组表达均高于N组.术后1天T组比AT组表达显著增高(P＜0.01),术后3天AT组比T组表达增高(P＜0.05),术后14天AT组比T组表达显著增高(P＜0.01).结论:大鼠急性酒精中毒合并颅脑外伤后晚期,海马CAI区AQP4表达增高,可能加重晚期继发性脑水肿,是急性酒精中毒合并颅脑外伤预后不良的原因之一.     

急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤大鼠海马AQP4的表达

目的:探讨大鼠急性酒精中毒合并颅脑外伤后AQP4在海马区表达的变化.方法:健康成年雄性SD大鼠96只,随机分为4组:假手术组(N组)、急性酒精中毒组(A组)、中度创伤性脑损伤组(T组)和急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤(AT组).腹腔注射酒精(2.5g/kg),2h后以重物自由落体击打大鼠头部建立急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)动物模型.各组动物分别存活1、3、5、14天.免疫组化方法检测海马CA1区AQP4的表达.结果:AQP4阳性产物分布于胶质纤维和毛细血管壁,各实验组表达均高于N组.术后1天T组比AT组表达显著增高(P＜0.01),术后3天AT组比T组表达增高(P＜0.05),术后14天AT组比T组表达显著增高(P＜0.01).结论:大鼠急性酒精中毒合并颅脑外伤后晚期,海马CA1区AQP4表达增高,可能加重晚期继发性脑水肿,是急性酒精中毒合并颅脑外伤预后不良的原因之一.     

大鼠产前手机辐射对子代小脑白质的影响

目的:探讨大鼠产前850～1 900 MHz手机辐射对成年子代小脑白质的影响。方法:孕鼠随机分为短时产前手机辐射组、长时产前手机辐射组和对照组,短时和长时辐射组于孕期第1～17日分别进行每天6 h和24 h手机辐射,各组雄性子代大鼠(n＝8)于3月龄取小脑组织,进行苏木精-伊红(HE)染色观察小脑皮质细胞形态,免疫组化和Western blot检测髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经微丝-L(NF-L)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。结果:与对照组比较,短时程和长时程产前手机辐射组子代大鼠小脑浦肯野细胞出现形态学改变;与对照组比较,长时程辐射组MBP、NF-L表达明显减少(P均＜0.05),而GFAP表达明显增多(P＜0.05);与短时程辐射组比较,长时程组子代大鼠小脑MBP、NF-L表达明显减少(P均＜0.05),而GFAP表达明显增多(P＜0.05)。结论:产前手机辐射会导致雄性子代大鼠小脑髓鞘和轴突的损害,以及星形胶质细胞的活化,且这种改变与产前手机辐射的时程相关。     

模拟微重力对热应激时人血浆中单胺类递质含量的影响

目的和方法采用高效液相色谱-电化学检测法,分析7d-6°头低位卧床模拟微重力,40～60℃热应激及其复合因素作用下人外周血中单胺类递质的含量,研究模拟微重力对热应激时人外周血中单胺类递质含量的影响,以探讨航天热应激的人体反应机理.结果①模拟微重力单一因素暴露后,5-HT,NE,E含量与对照组相比均无显著变化(P＞0.05);②热应激单一因素暴露40℃,50℃,60℃热应激时,与对照组相比,5-HT含量均显著降低(P＜0.01),而NE,E含量,在40℃热应激时无显著变化(P＞0.05),50℃,60℃热应激时均显著增加(P＜0.001);③热应激与模拟微重力复合因素暴露时,与对照组相比,5-HT含量显著降低(P＜0.01),而NE,E含量均无显著变化(P＞0.05).与热应激单一因素暴露组相比,50℃,60℃热应激时,NE,E含量均显著降低(P＜0.001),5-HT的含量则无显著变化(P＞0.05).结论模拟微重力可使热诱导的NE,E含量显著降低,而对热应激引起的5-HT含量降低无显著影响.模拟微重力引起热应激时NE,E含量显著降低的变化,可能在航天热应激的人体反应机理中起重要的作用.     

二氢杨梅素改善慢性社会挫败应激小鼠认知与情感障碍*

目的:探索二氢杨梅素(DHM)对慢性社会挫败应激小鼠认知与情感障碍的作用及其可能机制。方法:将C57BL/6J小鼠随机分成对照组(Control)、慢性社会挫败应激组(CSDS)和慢性社会挫败应激+DHM组(CSDS+DHM),每组14只,每天将两个应激组小鼠放入ICR攻击鼠的饲养笼中10 min,之后取出放于ICR攻击鼠饲养笼的旁边笼中,连续应激10 d,在应激5 d后,每天按10 ml/kg的量分别腹腔注射一次2%的DMSO或20 mg/kg的DHM(分散于2% DMSO中),连续注射5 d,之后每组取10只小鼠进行新颖物体识别测试、Y迷宫测试、社会交互和旷场测试、行为学测试,剩余4只小鼠于实验结束后24 h内断头取脑,采用Western blot法检测海马组织SIRT1水平。结果:与Control组比较,CSDS组小鼠的学习记忆显著降低,焦虑水平显著升高,在悬尾测试(TST)和强迫游泳测试(FST)中的不动时间显著升高,海马SIRT1蛋白水平显著降低(P均＜0.05或P＜0.01);与CSDS组比较,CSDS+DHM组小鼠学习记忆显著提高,小鼠焦虑水平显著降低,在TST和FST中不动时间显著降低,海马SIRT1蛋白水平显著升高(P均＜0.05或P＜0.01)。结论:DHM可改善CSDS诱导小鼠的认知障碍、焦虑样行为和抑郁样行为,并提高海马SIRT1蛋白的表达水平。     

精氨酸甲基转移酶1和核因子кB在哮喘豚鼠中的表达变化

目的:探讨共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1和核因子-кB在豚鼠支气管哮喘模型气道和肺组织的表达变化.方法:24只白色雄性豚鼠随机分为:①正常对照组;②哮喘组.卵清蛋白致敏并激发后采用间接免疫荧光法检测气道及肺组织精氨酸甲基转移酶1和核因子NF-кB(P65)的表达水平,探讨其在哮喘中可能的作用机制.结果:CARM1和NF-кB(P65)在对照组和哮喘组均有阳性表达,主要在支气管-终末细支气管上皮细胞和肺组织成纤维细胞胞核表达.正常对照组和哮喘组CARM1和NF-кB(P65)的表达差异均有统计学意义.结论:在哮喘豚鼠气道上皮及肺组织CARM1和NF-кB(P65)在细胞胞核高表达,提示CARM1可能通过增强募集NF-кB到相关位点激活NF-кB信号转导通路,并启动了多种前炎性基因和免疫调节基因的转录激活从而诱发哮喘炎症反应.     

CNTFRα在ALV自然重组FJ15HT0株感染宿主过程中的表达

本团队之前分离到一株天然重组禽白血病病毒(ALV)毒株FJ15HT0,经RNA-seq分析发现该毒株感染会引起鸡胸腺组织中睫状神经营养因子受体α(CNTFRα)基因表达量上调.为进一步探究CNTFRα在ALVFJ15HT0株感染过程中的表达及作用,本研究在构建ALV先天感染模型的基础上,通过RT-qPCR和免疫组织化学染色(IHC)探究不同时间点CNTFRα在感染鸡肝脏和胸腺中的表达量变化;以RT-qPCR和Western Blot检验病毒的复制水平对DF-1细胞CNTFRα在转录水平和蛋白表达水平的影响.结果表明,感染组与空白组相比,鸡胚出壳率明显降低,鸡只体重极显著降低(P＜0.01);RT-qPCR和IHC结果显示同一时间点感染组胸腺和肝脏组织中CNTFRα转录水平及蛋白表达量均极显著高于空白组(PP＜0.01),胸腺组织中CNTFRα基因相对表达量与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.633,P＜0.01);14d、21d感染组鸡只血清C.NTF含量显著高于空白组(P＜0.05).RT-qPCR和Western Blot检测结果表明84 h感染组DF-1细胞CNTFRα表达量随病毒复制水平增加而显著提高(P＜0.05),CNTFRα基因与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.73,P＜0.01),CNTFRα蛋白与p27蛋白的表达量呈极显著正相关关系(r=0.973,P＜0.01).研究表明CNTFRα可能参与ALV FJ15HT0株致病过程.