慢性束缚诱导的广泛性焦虑障碍前额叶皮质中miRNA的表达

摘要 目的：研究慢性束缚(Chronic restraint stress,CRS)诱导的广泛性焦虑障碍模型小鼠前额叶皮质miRNA表达谱的变化及其意义。方法：小鼠经过7天的CRS,通过旷场实验与高架十字迷宫实验检测小鼠是否能够表现出紧张和焦虑行为。采用高通量测序的方法,定量分析对照组与模型组小鼠前额叶皮质组织中 miRNAs的表达水平,研究CRS诱导的焦虑有关的分子表达谱。通过RT-PCR对测序结果中差异表达的miRNAs 进行验证。结果：经CRS诱导的广泛性焦虑障碍模型组小鼠,模型组在活动总距离增多（P＜0.05）、平均速度（P＜0.05）增快、中央停留时间减少（P＜0.05）、开放臂进入次数百分比减少（P<0.01）、开放臂停留时间减少（P＜0.01）,与对照组相比结果均具有统计学意义,表明GAD小鼠造模成功。经高通量测序结果及生信学分析,对照组与模型组相比较,共28个上调miRNAs,34个下调miRNAs,5388个靶基因参与作用变化。上/下调的miR-GO分析结果中,主要共同参与神经系统发育、突触后密度、神经元投射、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等过程;上/下调miR-KEGG结果中,参与共同通路主要包括轴突引导、神经营养因子信号通路、cAMP 信号通路、多巴胺能突触、MAPK信号通路等过程。结论：前额叶皮质中miR-7a-5p、miR-124-3p、miR-141-3p、miR-183-5p等miRNA变化参与广泛性焦虑障碍的发病,可能调控影响神经传导等功能。     

镇惊温胆汤对PTSD模型大鼠ORX受体基因表达的调节作用

目的:研究镇惊温胆汤对创伤后应激障碍模型大鼠皮质边缘系统中食欲素(Orexin,ORX)受体OX1R和OX2R基因表达的调节以及血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶的调节。方法:采用单次延长应激法复制创伤后应激障碍(Post traumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析大鼠脑区中OX1R及OX2R的变化,采用酶联免疫吸附试验(Elisa)分析大鼠血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶的变化。结果:镇惊温胆汤组提高了前额叶皮质(PFC)及杏仁核(AMY)中OX1R、OX2R的基因表达,降低了在血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶的含量,有极显著的差异(P0.01),对海马(HIP)中OX1R、OX2R的基因表达有微弱的上调作用。结论:中药复方镇惊温胆汤可以调控大鼠ORX系统OX1R及OX2R受体和血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶含量,能够改善大脑兴奋-抑制功能失衡状态,从而有效缓解PTSD不寐、善惊等病理状态。     

我国公立医院的“公立”障碍及解决思路

通过了解公立医院公益淡化的过程，分析公立医院所遭遇的“公立”障碍，试图从制度设计、医院治理模式、政府监管部门、配套制度等角度提出相应的解决思路。     

荧光定量PCR测定端粒长度

目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Q—PCR）方法测定端粒长度。方法选取9种人类细胞株,提取基因组DNA,采用Q—PCR方法测定相对T／S比率,DNA印迹法测定末端限制性片段（TRF）长度,进行二者之间的相关性分析。结果定量PCR测定端粒长度相对T／S比率为0．68±0．57,DNA印迹法测量平均TRF值为8．57±2．34,两种方法测定结果的相关性分析R2=0．7807（P〈0．01）。结论采用荧光定量PCR方法测量端粒长度具有重复性好、省时、简便、可靠的特点,可高通量处理大量样品。     

创伤后应激障碍大鼠海马与前额叶皮质中OREXIN受体的失调

目的:从食欲素(Orexin, ORX)系统挖掘创伤后应激障碍的神经生物学机制。方法:以单次延长刺激(single prolonged stimulation,SPS)法复制创伤后应激障碍(post traumatic stress disorder,PTSD)大鼠模型,以行为学结合血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶进行模型评价,通过酶联免疫吸附试验(Elisa)分析大鼠血清与脑脊液中OREXIN水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马与前额叶皮质中的Orexin受体基因表达。结果:实验成功的复制了PTSD模型,与对照组相比,模型组大鼠血清中皮质酮和神经元特异性烯醇化酶的含量均极显著升高(P0.01),脑脊液中Orexin A、Orexin B的含量均显著升高(P0.01),海马和皮质中ORX1R与ORX2R均极显著下降(P0.01)。结论:PTSD大鼠的应激损伤与Orexin及其受体表达水平的变化密切相关。     

妊娠对于父源性皮肤移植存活时间的影响

母胎耐受机制的阐明,将为器官移植免疫耐受方案的研究提供重要启示.本研究旨在阐明妊娠状态对父系来源移植皮片的存活是否有保护作用.2月龄雌性C57BL/6小鼠和2～4月龄BALB/c雄性小鼠同笼受孕.采用流式细胞技术确定妊娠过程中调节性T细胞（Treg）比例的时间变化规律.以单向混合淋巴细胞反应（MLR）手段比较研究妊娠对于父系来源脾细胞刺激后产生的增殖反应的影响.通过同种异体小鼠全厚皮片移植模型,观察妊娠对于父系来源移植皮片的存活是否具有保护作用.并用分子生物学技术研究此种效能的可能机制.结果显示,C57BL/6小鼠妊娠过程中,Treg占CD4＋T细胞的比例从妊娠前的4.2%逐渐上升,受孕8天左右达到高峰值（6.8%）,此后开始下降并逐渐回复至基线水平.MLR结果表明,针对父系来源脾细胞的刺激,妊娠组较对照组呈现显著的低反应性,其平均刺激指数分别是7.8和13.6（P〈0.05）.定量PCR研究表明,血红素加氧酶-1和吲哚胺2,3双加氧酶mRNA在胎盘高表达,在脾脏低表达（P〈0.05）.父系来源的移植皮片的平均存活时间在妊娠组和非妊娠组分别是7.67和7.08天,无统计学差异（P〉0.05）.由此认为,在小鼠妊娠过程中,尽管出现了具有免疫抑制功能的Treg的比例增加,尽管有针对父系来源刺激细胞的较低的MLR反应性,但是单次妊娠对于父系来源的移植皮片的存活,在本研究条件下,未能显示具有统计学意义的保护作用.     

NRG1对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响

目的:研究外源性神经调节蛋白1(neuregulin-1, NRG1)对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响及可能的机制。方法:采用腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导糖尿病模型,造模成功的大鼠随机分为糖尿病组(D组)及NRG1静脉注射组(N组),另取同月龄大鼠为正常对照组(C组)。造模成功后两周N组大鼠通过尾静脉注射NRG1(10μg·kg-1·d-1)连续给药1周,C组及D组则予以生理盐水对照。每周测定大鼠机械性刺激缩足反应的阈值(Mechanical withdrawal threshold, MWT),诱导七周后采用Western-blotting方法测定脊髓NRG1, NGF, IL-1β和TNF-α的蛋白表达,并采用透射电镜观察大鼠腓肠神经的超微病理结构。结果:与糖尿病组相比,NRG1干预组的痛阈明显提高,腓肠神经病理学改变明显减轻。糖尿病组脊髓腰膨大NRG1、NGF、IL-1β和TNF-α含量分别为(0.337±0.092)、(0.371±0.060)、(0.619±0.089)、(0.752±0.071),与对照组相比均有显著性差异(P0.05);NRG1组NGF、IL-1β和TNF-α表达量分别为(0.576±0.061)、(0.375±0.029)、(0.524±0.056),与糖尿病组相比均有统计学差异(P0.05)。结论:静脉给予外源性NRG1能够预防和减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛,其机制可能与NRG1刺激NGF的生成及抑制炎性因子的释放有关。