细菌鞭毛研究概况及进展

鞭毛是细菌的一种特殊结构,约半数的杆菌、极少数球菌和所有的螺旋菌及弧菌都有鞭毛。鞭毛与细菌的运动有关,并在感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥重要的作用,受到细菌研究者的高度重视。从细菌鞭毛的结构以及它在细菌致病性和免疫中的作用最新     

细菌鞭毛研究概况及进展*

鞭毛是细菌的一种特殊结构,约半数的杆菌、极少数球菌和所有的螺旋菌及弧菌都有鞭毛。鞭毛与细菌的运动有关,并在感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥重要的作用,受到细菌研究者的高度重视。从细菌鞭毛的结构以及它在细菌致病性和免疫中的作用最新研究进展加以概述,以供细菌研究者参考。     

细菌鞭毛的染色

细菌中的弧菌、螺菌及部分杆菌具有鞭毛,而鞭毛的有无及其着生状态又具有种的鉴定意义。细菌鞭毛染色的方法虽然很多,但要得到满意的结果往往不易做到,特别对于初学者就更难以掌握。由于教学科研的迫切需要,我们对细菌鞭毛染色方法进行了一些研究,现介绍如下:     

溴化呋喃酮对鳗弧菌群体感应调控行为的抑制研究

以群体感应抑制剂—溴化呋喃酮为研究对象,探究其对鳗弧菌群体感应相关基因和致病因子的抑制作用。利用荧光定量PCR检测亚抑菌浓度溴化呋喃酮对鳗弧菌van I/R和luxS基因表达量的影响,利用鞭毛染色观察溴化呋喃酮对鳗弧菌生物膜以及鞭毛形成的作用,通过平板扩散法检测溴化呋喃酮对鳗弧菌胞外酶的作用。结果表明,溴化呋喃酮能够显著抑制鳗弧菌van I和luxS基因的表达量,溴化呋喃酮能够降低鳗弧菌分泌蛋白酶和明胶酶能力,能抑制鞭毛生长和生物膜的形成并降低其运动能力。     

养殖牡蛎体内检出坎氏弧菌的鉴定

2 0 0 3年 9月从福建近海养殖太平洋牡蛎 (Crassostreagigas)体内分离出 4株细菌 ,对它们形态、生理生化特征、盐度、温度和pH生长条件以及 16SrRNA基因序列进行了研究。结果表明 ,4株细菌均为革兰氏阴性杆菌 ,具极生单鞭毛 ,发酵葡萄糖产酸不产气 ,氧化酶阳性 ,生长需NaCl,无色素 ,不发光 ,在TCBS平板上形成中等大小圆形绿色菌落 ,对弧菌抑制剂O 12 9敏感 ,具有弧菌属的典型特征。结合 16SrRNA基因序列分析结果 ,该菌 (编号SXS1)与坎氏弧菌的亲缘关系最为接近 ,其同源性达 99 .0 % ,因此将该菌鉴定为坎氏弧菌。对该菌在环境中的分布与水产养殖动物疾病的关系进行了讨论。     

弧菌属细菌的分类与鉴别

凡是弯曲而具有极生单鞭毛的细菌,都统称为弧菌(Vibrios)。这是由数量庞大,特征相对突出的一群细菌所组成。广泛存在于外环境中,尤其是地面水和海水中更为常见。许多是嗜盐性的。在分类上属于弧菌科(Vibrion-     

异育银鲫肠道蛭弧菌的分离及其生物学特性的研究

以一株具有致病力的温和气单胞菌作为筛选宿主菌,从异育银鲫肠道中分离到一株蛭弧菌,暂命名为BDF-H16。通过光学显微镜、相差显微镜、电子显微镜对蛭弧菌BDF-H16进行形态观察,并研究了其部分生物学特性。结果表明:蛭弧菌BDF-H16为革兰氏阴性菌,杆形或弧杆形,端生一根鞭毛,菌体大小多为0．2μm～0．5μm×0．8μm～1．2μm;蛭弧菌BDF-H16对实验所选用的革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌均有裂解作用;以大肠杆菌为宿主菌,其最佳生长条件为宿主菌浓度6．75×10~9cfu/mL、pH7．0～7．5、温度28℃;在NaCl含量0．85%～5．00%的培养基中能够生长;恩诺沙星、诺氟沙星对其有抑制作用。     

异育银鲫肠道蛭弧菌的分离及其生物学特性的研究

以一株具有致病力的温和气单胞菌作为筛选宿主菌,从异育银鲫肠道中分离到一株蛭弧菌,暂命名为BDF-H16。通过光学显微镜、相差显微镜、电子显微镜对蛭弧菌BDF-H16进行形态观察,并研究了其部分生物学特性。结果表明:蛭弧菌BDF-H16为革兰氏阴性菌,杆形或弧杆形,端生一根鞭毛,菌体大小多为0．2μm～0．5μm×0．8μm～1．2μm;蛭弧菌BDF-H16对实验所选用的革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌均有裂解作用;以大肠杆菌为宿主菌,其最佳生长条件为宿主菌浓度6．75×10⁹cfu/mL、pH7．0～7．5、温度28℃;在NaCl含量0．85%～5．00%的培养基中能够生长;恩诺沙星、诺氟沙星对其有抑制作用。     

溶藻弧菌HY9901 AcrA基因克隆与序列分析（英文）

Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列, 得一460 bp片段, 再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列, 拼接得一由1101 nt组成, 共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高, 与创伤弧菌YJ016、副溶血弧菌RIMD 2210633、灿烂弧菌12B01、霍乱弧菌O1 N16961同源性分别为76%、73%、71%和70%。     

棘腹蛙体内寄生原生动物两新种记述(动鞭毛纲:动基体目:锥体科;粘孢子纲:双壳目:两极科)

本文记述棘腹蛙Rana boulengeri Gunther体内寄生的两种文献中未报道过的原生动物,一种是利川锥虫新种,Trypanosoma lichuanensis sp.nov,其主要特征是,鞭毛较粗,一般不伸出体外,故不形成游离的鞭毛;另一种是蛙两极虫新种,Myxidium boulengeri sp.nov,孢子卵形,两端钝圆,壳厚,壳面光滑,缝线直而宽。     

水产品中河流弧菌分离株OmpU基因的克隆测序与生物信息学分析

目的 对河流弧菌(Vibrio fluvialis)水产品分离株OmpU基因进行克隆测序和生物信息学分析,为建立该菌的检测方法和研制疫苗奠定基础.方法 从市售水产品中分离细菌,采用表型和分子鉴定方法确定其种属,并测定其致病性和药物敏感性.根据弧菌属OmpU基因的序列特点,设计引物扩增河流弧菌OmpU基因,将其克隆到T载体上,筛选重组质粒并对其进行序列测定及生物信息学分析.结果 从水产品中分离的2个菌株(Vf1和Vt2)经鉴定确认为河流弧菌,它们均具有致病性,对15种测试抗菌药物敏感.2株河流弧菌OmpU基因全长分别为1 044和1 005 bp,含有1个开放性阅读框,分别编码由348和335个氨基酸组成的OmpU蛋白,该蛋白N端前22个氨基酸为信号肽.序列比对结果显示2株河流弧菌OmpU基因的核苷酸及其推导的氨基酸序列相似性分别为82.6％和81.2％.OmpU蛋白序列在6种弧菌种内和种间的相似性分别为81.4％ ～ 99.2％和71.2％ ～78.1％.表位预测结果显示河流弧菌OmpU蛋白的B细胞线性表位主要集中在第24 ～ 28、45～ 53、113～116、153～156、215～ 221和242～254位氨基酸区域,6种弧菌具有1个共同的抗原表位基序KDG-A-D-S.结论 OmpU蛋白是弧菌属中较为保守的一类功能蛋白,共同的抗原表位基序有望成为检测多种弧菌的靶标和研制多表位疫苗的靶位.     

溶藻弧菌HY9901 ahr基因克隆与序列分析

TouchdownPCR扩增溶藻弧菌依赖ATP的DNA解旋酶rep基因部分序列,得一1．2kb片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由2016bp组成,共编码671aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与副溶血弧菌RIMD2210633、溶藻弧菌12G01、Vibriosp．Ex25、创伤弧菌YJ016、霍乱弧菌RC385、灿烂弧菌12801、费氏弧菌ES114及矿angustumS14分别为96％、95%、95%、94%、92％、91%、89％、86％。     

棘腹硅体内寄生原生动物两新种记述：动鞭毛纲：动基体目：锥体 科;粘孢子…

本文记述棘腹蛙Ｒａｎａ ｂｏｕｌｅｎｇｅｒｉ Ｇｕｎｔｈｅｒ体内寄生的两种文献中未报道过的原生动物,一种是利川锥虫新种,Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｌｉｃｈｕａｎｅｎｓｉｓ ｓｐ．ｎｏｖ．,其主要特征是,鞭毛较粗,一般有伸出体外,故不形成游离的鞭毛;另一种是蛙两极虫新种,Ｍｙｘｉｄｉｕｍ ｂｏｕｌｅｎｇｅｒｉ ｓｐ．ｎｏｖ．,孢子卵形,两端钝圆,壳厚,壳面光滑,缝线直而宽。     

用基于TaqMan探针的Real-time PCR技术定量检测副溶血弧菌

副溶血弧菌是一种引起食源性疾病的重要病原菌,传统的鉴定方法费时费力且容易出现假阴性,建立一种定量检测副溶血弧菌基因的方法尤为重要。根据GenBank公布的副溶血弧菌的gyrB基因序列设计一对引物和TaqMan探针,建立了基于TaqMan探针的RealtimePCR方法。通过对9种细菌(12株菌株)的DNA进行扩增,结果所有4株副溶血弧菌均可产生扩增曲线,其他8株非副溶血弧菌均不产生扩增曲线,证明了引物和探针具有很高的特异性。细菌纯培养物品和人工布菌的检测敏感度分别为1CFUPCR反应体系和10CFUPCR反应体系,相关系数均为0.99(r2=0.99),整个试验可在1h内完成。建立的方法可用于海产品中副溶血弧菌的快速定量检测。     

鞭毛细菌游动机理研究进展

鞭毛细菌是在低雷诺数条件下运动的生物体,通过旋转鞭毛而向前游动。通过概述细菌鞭毛的游动机理、在不同游动方式下鞭毛丝几何形态之间转换的物理现象、菌体反转对成束的影响以及在靠近壁时运动的墙效应机理的最新研究,提出一种与鞭毛细菌运动动力相似的宏观等效模型,该模型可以用于进一步研究鞭毛细菌的游动机理,并为仿生微型游动机器人的构造和应用提供理论研究的基础。     

不同种株利什曼原虫前鞭毛体体外向无鞭毛体转化的研究

目的 观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在不同体外培养条件下向无鞭毛体的转化.方法 将6个对数生长期的不同种株利什曼原虫前鞭毛体接种于含M199和RPMI 1640复合培养液的24孔板内,在不同温度、pH值、血清、CO2下培养,第3天和第6天分类计数不同形态的原虫.结果 当培养温度为26℃,而其他培养条件发生变化时,利什曼原虫的增殖速度发生变化,大多数原虫保持前鞭毛体典型性形态,运动活跃.当培养温度上升至37℃,不论其他培养条件如何变化,原虫均沉积于培养孔底,停止增殖,运动减缓,显著地向中间体和无鞭毛体转化,酸性pH值和5%CO2可促进前鞭毛体转化为无鞭毛体,新生小牛血清可延长无鞭毛体的成活.但相同的培养条件下,杜氏利什曼原虫转化效率低于其他种株利什曼原虫.结论 温度是影响利什曼原虫前鞭毛体转化为无鞭毛体的基本因素,酸性pH值与CO2可协同温度促进转化,不同种株利什曼原虫的遗传异质性可影响转化效率.     

环介导恒温扩增技术快速检测溶藻弧菌

溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,其快速检测具有重要意义.根据溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因序列,设计一套引物,通过条件优化.成功建立了针对致病性溶藻弧菌的环介导恒温扩增检测技术(loop-mediated isothennal amplification.LAMP).应用LAMP技术,在65℃温育1 h的条件下扩增溶藻弧菌基因组DNA.琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带.该研究建立的LAMP法特异性检出致病性溶藻弧菌,其检测下限比PCR法低一个数量级,相当于n(cell)=38/mL的菌液浓度,灵敏度更高.综合分析表明,LAMP技术是快速、简易、实地诊断溶藻弧菌的理想工具.     

用基于TaqMan探针的Real-timePCR技术定量检测副溶血弧菌

副溶血弧菌是一种引起食源性疾病的重要病原菌,传统的鉴定方法费时费力且容易出现假阴性,建立一种定量检测副溶血弧菌基因的方法尤为重要。根据GenBank公布的副溶血弧菌的gyrB基因序列设计一对引物和TaqMan探针,建立了基于TaqMan探针的Realtime PCR方法。通过对9种细菌（12株菌株）的DNA进行扩增,结果所有4株副溶血弧菌均可产生扩增曲线,其他8株非副溶血弧菌均不产生扩增曲线,证明了引物和探针具有很高的特异性。细菌纯培养物品和人工布菌的检测敏感度分别为1 CFU/ PCR反应体系和10 CFU/PCR反应体系,相关系数均为0.99（r2＝0.99）,整个试验可在1h内完成。建立的方法可用于海产品中副溶血弧菌的快速定量检测。     

2株创伤弧菌的16S-23S rDNA间区的克隆、测序及分析

根据细菌的16SrDNA3’端和23SrDNA5’端的高度保守区设计引物,PCR扩增了2株创伤弧菌（Vibrio vulnificus）的16S-23SrDNA间区（Intergenic spacer,IGS）,克隆到pGEM-T载体上,测序。用BLAST和DNA star软件对16S-23SrDNA间区序列及其内的tRNA基因进行比较分析。结果表明,2株创伤弧菌共测出9条16S-23SrDNA间区序列,其中ZSU006测出5条,间区类型分别为：IGS^GLAV、IGS^GLV、IGS^LA、IGS^A和IGS^G.其中IGS^GLAv最大,包含tRNA^Glu、tRNA^Lys、tRNA^Ala。和tRNA^Val基因;IGS^GLV包含tRNA^Glu、tRNA^Lys。和tRNA^Val基因;IGS^LA,则包含tRNA^Ile和tRNA^Ala基因;IGS^G包含tRNA^Glu基因;而IGS^A仅包含tRNA^Ala基因。菌株CG021测出的16S-23SrDNA IGS序列有4条,除缺少IGS^A外,其余的IGS类型均与ZSU006的相同。与GenBank内的创伤弧菌ATCC27562的IGS序列比较,发现创伤弧菌所有类型的IGS的tRNA基因两端的非编码区具有较高的种内同源性。16S-23SrDNA间区结构的差异为建立一种新的创伤弧菌检测方法奠定了基础。     

3株杂色鲍致病菌--副溶血弧菌的16S-23S rDNA间区序列的分析

以细菌的 1 6SrDNA 3′端和 2 3SrDNA 5′端的高度保守区为引物 ,扩增了 3株杂色鲍致病菌—副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)的 1 6S 2 3SrDNA间区 ,克隆到pGEM T载体上 ,测序。用BLAST和DNAstar软件对 1 6S 2 3SrDNA间区序列及其内的tRNA基因进行比较分析。结果表明副溶血弧菌ZSU0 0 8和ZSU0 0 9测出的 1 6S 2 3SrDNA间区均有 6条 ,间区类型也相同 ,分别为IGSGLAV 、IGSGLV、IGSAG、IGSIA、IGSG 和IGS0 。其中IGSGLAV最大 ,包含tRNAGlu、tR NALys、tRNAAla和tRNAVal基因 ;IGSGLV包含tRNAGlu、tRNALys和tRNAVal基因 ;IGSAG包含tRNAAla和tRNAGlu基因 ;IGSIA,则为tRNAIle和tRNAAla基因 ;IGSG 仅包含tRNAGlu基因 ;而IGS0 最小 ,未包含任何tRNA。菌株ZSU0 1 0测出的 1 6S 2 3SrDNAIGS序列有 5条 ,除缺少IGSAG 外 ,其余的IGS类型均与ZSU0 0 8和ZSU0 0 9相同。与GenBank内的副溶血弧菌IGS序列比较 ,发现副溶血弧菌所有类型的IGS的tRNA基因两端的非编码区具有较高的种内同源性。 1 6S 2 3SrDNA间区结构的差异为建立一种新的副溶血弧菌检测方法奠定了基础。