慢性氨氮胁迫对台湾泥鳅幼鱼生长、免疫及组织结构的影响

以平均体质量为(2.00±0.56) g的台湾泥鳅(Paramisgurnus dabryanus ssp. Taiwan)幼鱼为研究对象, 探究氨氮胁迫浓度为0、3.5、6.0、10.4和18.0 mg/L时台湾泥鳅幼鱼生长性能、免疫酶活性及组织结构的变化。经过56d的氨氮胁迫试验结果显示: 台湾泥鳅终末体质量(W_F)、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)随氨氮浓度的升高而逐渐降低, 各组之间存活率无显著差异。10.4和18.0 mg/L处理组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)和鳃Na+K+-ATP酶活性均显著低于对照组(P<0.05); 18.0 mg/L处理组肝脏溶菌酶(LZM)活性显著低于对照组(P<0.05), 而丙二醛(MDA)含量显著高于对照组(P<0.05)。组织切片结果显示, 氨氮处理组幼鱼均存在不同程度的鳃组织损伤, 表现为鳃小片短小、上皮细胞水肿、细胞空泡化、上皮细胞坏死和脱落; 肝组织则表现为肝血窦扩张、细胞轮廓模糊、细胞水样变性、细胞核偏移和细胞核溶解; 且两种组织中其病变区域随着氨氮浓度升高而增大。上述结果表明, 氨氮胁迫对台湾泥鳅幼鱼的生长和免疫酶活性具有显著的抑制作用, 并对其鳃和肝组织造成损伤。     

水环境中磺胺嘧啶对异育银鲫肠道微生物的影响

【目的】了解水环境中磺胺嘧啶对异育银鲫肠道微生物组成及多样性的影响。【方法】异育银鲫分别暴露于0、1、100、10000μg/L的磺胺嘧啶水溶液中28 d,根据细菌16S rRNA的保守性设计引物,构建文库,进行高通量测序,最后进行数据分析。【结果】厚壁菌门、变形菌门和拟杆菌门是异育银鲫肠道中主要的细菌类群,经不同浓度磺胺嘧啶胁迫处理后,不仅弧菌、假单胞菌属和幽门螺杆菌属的数量显著减少,双歧杆菌、乳酸菌和芽孢杆菌的含量也下降。Venn图、稀释性曲线以及多样性指数分析结果表明,磺胺嘧啶胁迫处理后异育银鲫肠道微生物的多样性显著降低。【结论】磺胺嘧啶会使异育银鲫肠道微生物多样性显著降低,并且在抑制一些病原菌生长的同时对一些有益菌也产生了不良的影响。此结果为磺胺类药物的合理使用以及其对异育银鲫的健康生长和病害防控提供一定的理论支持。     

人工感染三角帆蚌病毒性疾病的组织病理学观察(英文)

从自然发病的病蚌中提取出病毒,经人工感染健康三角帆蚌后呈现出典型的病理变化。组织学观察显示消化腺、胃、肠、外套膜、斧足和鳃等均出现大量细胞空泡化、部分细胞肿大、上皮细胞排列不紧密,结缔组织不完整,部分细胞溶解甚至脱落等,表明它们均为病毒损害的主要靶器官。透射电镜观察显示大量砂样病毒存在于患病三角帆蚌不同器官中。病毒粒子为直径约120 nm的圆球形,表面具有明显的纤突,无囊膜结构。被感染细胞呈现明显的病理变化,包括细胞质大片空泡化,细胞器相对减少或缺失,细胞核电子密度加深,肠黏膜上皮细胞不同程度的变性和坏死,消化腺细胞核变形肿大,鳃小片上皮细胞坏死脱落,颗粒细胞的核膜溶解等。       

菲对斑马鱼鳃和肝组织结构的影响

采用浓度为0、0.05和100.0 μg·L-1的菲水溶液对斑马鱼(Brachydanio rerio)进行36 d的暴露实验,研究了菲对斑马鱼鳃、肝结构的影响.H-E染色显示:在0.05和100.0 μg·L-1的菲溶液暴露下,受试鱼的鳃受到损伤,均发生鳃小片上皮细胞肥大和水肿;菲浓度为100.0 μg·L-1时,受试鱼还发生鳃丝上皮增厚、鳃小片上皮隆起现象.此外,菲暴露造成斑马鱼的肝组织损伤,0.05 μg·L-1的菲溶液暴露下,受试鱼的肝细胞发生肿大,胞质产生空泡;菲浓度为100.0 μg·L-1时,受试鱼的肝细胞变得不规则,细胞核萎缩变形和偏离细胞中心,部分肝细胞空泡化程度加重,发生核溶解或细胞溶解,造成局部肝组织坏死.表明水环境中菲浓度达到0.05 μg·L-1即已对斑马鱼的鳃、肝产生毒性作用;而菲浓度达到100.0 μg·L-1时,受试鱼的鳃、肝将受到较严重的损伤;伴随菲浓度的升高,鱼的鳃、肝损伤加重.     

溶解氧对线纹海马幼鱼氨氮耐受性的影响及氨氮胁迫下鳃、肝脏组织结构的变化

为了解氨氮对线纹海马(Hippocampus erectus)幼鱼的毒理影响,本实验探讨了在正常溶解氧(4.32~5.12 mg·L-1)和高溶解氧(8.22~9.46 mg·L-1)条件下,线纹海马幼鱼的氨氮半致死浓度,以及6、9、12 mg·L-1的氨氮溶液胁迫下线纹海马幼鱼的鳃、肝脏组织结构的变化。结果表明:正常溶解氧条件下,氨氮对线纹海马幼鱼96 h半致死浓度(96 h LC50)为10.22 mg·L-1,安全浓度(SC)为1.02 mg·L-1;非离子氨的半致死浓度(96 h LC50)为0.16 mg·L-1,安全浓度(SC)为0.016 mg·L-1;高溶解氧条件下,氨氮对幼鱼的96 h LC50为12.68 mg·L-1,SC为1.27 mg·L-1;非离子氨96 h LC50为0.2 mg·L-1,SC为0.02mg·L-1。氨氮胁迫造成线纹海马幼鱼鳃组织在不同时间出现鳃丝血管扩张、泌氯细胞增生,鳃小片基部毛细血管破裂、红细胞溢出、鳃组织充血变性、卷曲变短、呼吸上皮细胞变性脱落等现象,并使肝脏肝细胞出现肿胀、细胞核肿大,肝血窦扩张、细胞轮廓模糊等组织变化;随着胁迫物浓度和胁迫时间增加,肝组织出现水样变性、空泡化、溶解,导致肝组织变得松散无序。综上,适当提高溶解氧能有效减轻氨氮对线纹海马幼鱼的毒性,超过阈值的氨氮胁迫会损害线纹海马幼鱼的鳃和肝脏组织结构。     

草鱼出血病病毒人工感染稀有鼩鲫出血病鱼的组织病理观察

草鱼出血病病毒人工感染稀有鲫出血病病鱼组织病理切片观察,发现肌肉系统血外渗,出现微血栓,红血球浸润于肌纤维之间;鳃小片上皮细胞增生和肥大导致相互融合,血外渗和红血球裂解,形成微血栓和血泡;肠上皮细胞脱落,红血球散布于整个肠壁;肝细胞肥大和细胞实质空泡化,细胞间隙增大;脾组织黄褐色的“小结”增多。而对照鱼未出现上述变化,说明这些病理变化确由ＧＣＨＶ感染所致。     

美洲黑石斑迟缓爱德华氏菌分离、鉴定及致病性研究

养殖美洲黑石斑(Centropristis striata)发生以“内脏白点”为主要临床症状的暴发性死亡, 为明确美洲黑石斑患病原因, 对患病鱼进行了病原分离、鉴定及致病性研究, 以期为防治美洲黑石斑迟缓爱德华氏菌病提供参考依据。患病的美洲黑石斑的症状主要表现为鳃和内脏组织如脾脏及肾脏上布满白点。从患病鱼的病灶处分离纯化到一株优势致病菌株(ZS201807), 通过对该菌株形态特征、生理生化特性和16S rDNA基因测序等综合分析, 鉴定该菌为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。人工感染实验证实此菌株可引起健康美洲黑石斑发病并表现出与自然发病相似的症状。利用组织切片和电镜超薄切片技术对患病美洲黑石斑鱼的肝脏、脾脏、鳃丝等6种组织进行组织病理学分析。组织病理结果显示, 脾和肾是感染较严重的主要靶器官, 脾脏组织内大量红细胞浸润, 出现严重瘀血; 鳃丝毛细血管扩张; 肾小管管腔狭窄, 肾小球肿大, 上皮细胞肿胀, 细胞空泡化。超微病理显示, 病鱼脾脏和头肾组织有大量杆状细菌积聚。药敏试验发现该菌对环丙沙星(5 μg/片)、四环素(30 μg/片)、恩诺沙星(5 μg/片)等14种药物敏感; 对青霉素(10 U/片)、阿奇霉素(15 μg/片)、丁胺卡那(30 μg/片)等13种药物耐受。证实此次养殖美洲黑石斑发病死亡的病原菌为迟缓爱德华氏菌。     

急性低温胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏、肌肉以及鳃组织结构的影响

为探究急性低温胁迫对四指马鲅Eleutheronema tetradactylum 幼鱼肝脏、肌肉以及鳃组织结构的影响。该研 究设置了常温(27±0.5 ℃)组、20 ℃组以及15 ℃组共三个温度梯度进行试验, 以常温组作为对照,在试验进行的2 h、6 h 以及12 h 分别采集肝脏、肌肉以及鳃样品进行观察和测定。结果显示: 随着低温处理时间的延长, 20℃组的肝脏细胞空泡结构呈增多, 细胞核偏离, 染色变浅趋势; 肌纤维出现弯曲现象, 肌纤维之间与内部均出现较大间隙; 线粒体丰富细胞数目增多, 鳃小片末端轻微的膨大到鳃小片整体水肿且严重弯曲, 血管以及血窦内出现大量的红细胞, 部分鳃小片因红细胞过多而涨破; 同时, 15 ℃组肝脏细胞排列混乱, 肝板结构不清晰, 细胞核溶解, 肝脏整体失去固有形态。肌纤维间隙增大, 部分断裂直至肌纤维之间与内部均严重开裂, 部分肌纤维溶解并暴露出细胞核。鳃小片表皮出现轻微的脱落, 少部分鳃小片胀大到其吸水涨破, 鳃小片基本形态不可见。该研究结果为优化四指马鲅养殖生产温控管理措施, 提高越冬成活率提供参考资料。     

鲤疱疹Ⅱ型病毒(CyHV-2)感染对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)组织器官的损伤作用

为分析感染Cy HV-2异育银鲫(Carassius auratus gibelio)体内不同器官组织结构和功能的损伤,采集健康和患病异育银鲫头肾、脾脏、体肾、肠道、肝胰脏、鳃各组织样本,通过石蜡切片,HE染色对各器官组织进行组织病理学观察并对肠道和鳃进行扫描电镜观察。病鱼主要表现为,食欲减弱、离群独游、全身发黑、背鳍、尾鳍末端发白、眼球突出、肌肉充血,鳃呈鲜红色。在鳃丝末端由红色斑块,经解剖有红色腹水流出,组织器官广泛性损伤。组织病理学变化为,头肾和脾脏细胞溶解、免疫细胞侵润、免疫和造血系统严重破坏;体肾中肾小球萎缩、肾小管上皮细胞脱落、肾间质出现空泡、免疫细胞侵润;肠道绒毛增生、绒毛和微绒毛长度显著减少、粘膜下层显著增厚;肝胰脏中肝细胞出现溶解、中央静脉受损;鳃中毛细血管破坏、血管破裂或扩大、红细胞溢出、鳃小片基部细胞显著减少。结果表明,病毒对异育银鲫具有明显的致病性,可导致各器官组织发生病变,同时机体处于缺血、缺氧、营养不足、废物积累的内环境,这进一步加剧对异育银鲫主要的器官组织的损伤。     

Hg2+在中华绒螯蟹幼蟹鳃内的积累及其对组织结构的影响

采用生态学单因子梯度实验,研究不同浓度汞(Hg2 )的水环境中中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼蟹鳃内汞积累情况及对鳃组织结构的影响。结果表明,中华绒螯蟹幼蟹的鳃能够从水环境中迅速积累汞,Hg2 浓度为10、50、100μg/L组的水环境中幼蟹鳃内汞含量分别为4.56、25.53、46.51μg/g干重,均显著高于对照组幼蟹鳃内汞含量1.68μg/g干重(P<0.05);水环境Hg2 浓度为200、300μg/L组的幼蟹鳃内汞含量达到了183.75和283.36μg/g干重,对水体Hg2 蓄积倍数达到了910.35和939.60。光镜观察低浓度组汞能够诱导鳃组织结构发生变化,如上皮细胞肿胀、鳃叶厚度增加、端部膨胀等;高浓度组则会导致鳃叶上皮细胞崩解,鳃组织结构完全破坏。以统计学方法分析了鳃内汞含量同水体汞浓度的相关性,结果表明,两者之间存在明显的相关性,并能够在组织形态上有所体现。鳃是中华绒螯蟹最容易接触水体Hg2 的器官,同时也是蓄积汞的主要器官之一,水体高浓度的Hg2 能够对鳃的组织结构造成明显的破坏,严重影响幼蟹存活率。     

滇池高背鲫和方正银鲫酯酶、乳酸脱氢酶同工酶的比较研究

本研究以方正银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)普通鲫(Carassius auratus)和滇池高背鲫(Carassius sp.)的各种组织器官为材料,进行酯酶(Esterase)和乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱的分析比较。结果表明:9种不同组织中酯酶同工酶谱带各不相同,有明显的组织特异性。滇池高背鲫的酯酶谱图有3种表型。方正银鲫和滇池高背鲫同一组织的LDH同工酶酶谱也有明显差异。等电聚焦凝胶电泳(T=7.5％,C=5％)的结果又表明这二种鱼的肝脏、脑、卵的酯酶同工酶酶谱及电泳扫描图亦有差异。这些结果揭示滇池高背鲫与方正银鲫至少在生化水平上已有明显的分化,很可能起源于不同的地区,由不同的祖先,独立演化而形成。滇池高背鲫与云南普通鲫的LDH酶谱较为接近,这说明滇池高背鲫最可能起源于云南本地的普通鲫。     

铜镉联合胁迫处理对鲫体内重金属和组织病理的影响

采用半静态铜镉联合胁迫处理鲫(Carassius auratus), 研究铜和镉在鱼体各组织的富集以及对各组织的病理损伤。结果表明, 在鲫的肝脏、鳃丝、肠道和肌肉中均可富集铜和镉, 且铜的蓄积比镉显著。在鲫各组织中镉含量随着铜、镉浓度的增加逐渐增加, 而铜含量则呈下降趋势, 可能是镉抑制了机体对铜的吸收。在0.15 mg/L铜联合0.20 mg/L镉处理鲫14d后, 其肌肉中镉含量为0.13 mg/kg, 超出了行业标准的阈值(0.10 mg/kg)。在铜镉联合处理鲫后, 其肝组织出现血细胞聚集、脂沉积、细胞空化等症状; 鳃丝组织上皮增生、水肿和黏膜肿胀; 在肠组织中杯状细胞肿胀、柱状细胞增生、固有层出现液泡、肠黏膜糜烂、肠绒毛脱落坏死; 在肌组织中肌纤维断裂、聚集、崩溃、溶解, 同时肌纤维间隙增大。研究结果表明, 铜和镉不仅能在鲫体内富集, 而且能够对鲫各组织产生病理损伤, 且浓度越高、损伤越严重, 这主要是由于鲫体内镉浓度的升高所导致。研究可为重金属污染对鲫生长状况和食用安全性的影响分析提供数据支撑。     

II型鲤疱疹病毒ORF4的多克隆抗体制备及其组织分布

【目的】制备II型鲤疱疹病毒(Cy HV-2)ORF4多克隆抗体,利用免疫学方法研究ORF4编码蛋白在病毒感染过程中的组织表达特征。【方法】利用在线软件SMART和BLASTx分析Cy HV-2 ORF4序列,采用PCR技术从Cy HV-2基因组中扩增得到ORF4基因,克隆至表达载体PGEX-4T-3中,将获得的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Western blot鉴定,再利用亲和层析法纯化出重组蛋白。用纯化的重组ORF4蛋白免疫新西兰兔,收集兔血,分离兔血清获得抗ORF4蛋白的多克隆抗体,再利用Western blot检测抗体与ORF4蛋白之间的特异性。提取攻毒后的异育银鲫肌肉、脑、鳃、脾脏、肝胰脏、心脏、肾脏等组织DNA,用荧光定量PCR技术监测其病毒在各组织的复制水平。使用RIPA裂解液提取上述各组织总蛋白,再利用Western blot技术检测ORF4在感染Cy HV-2的异育银鲫各组织中的表达情况。【结果】原核表达的重组ORF4蛋白分子量为65 k D,与预期大小一致;获得的ORF4抗血清能特异性识别重组ORF4蛋白。病毒感染的异育银鲫体内ORF4主要表达在肾脏、脾脏和鳃上;荧光定量PCR证明Cy HV-2主要在肾脏、脾脏和鳃上富集。【结论】Cy HV-2的非结构蛋白ORF4可能参与病毒的复制,是病毒复制感染周期的特征性指示蛋白之一,这为深入研究ORF4在Cy HV-2感染过程中的作用机制提供参考。     

New species of myxosporidians in the genus Myxobolus (Myxosporidia, Myxobolidae) from cyprinid fishes of the Amur River

Five new species are described as follows: M. haematopterus from gills, fins and skin of Cyprinus carpio haematopterus; M. gibelio from connective tissue of gill filaments, fin rays and kidneys of Carassius auratus gibelio; Myxobolus waleckii from gills of Leuciscus waleckii; Myxobolus junchisi from gills, muscles, kidneys and spleen of Cyprinus carpio haematopterus; M. alacaudatus of Cyprinus and Carassius Myxobolus divergens carassii from gills, muscles, fins, and cartilaginous tissue of operculim of Carassius auratus gibelio and Cyprinus carpio haematopterus.     

Effects of Cu2+, CrO4(2-), Co2+ and Pb2+ on the monovalent ion content of goldfish (Carassius auratus gibelio) tissues studied by X-ray microanalysis

Carassius auratus gibelio was chosen as an organism with a high level of tolerance against heavy metal to investigate changes in monovalent ions content in its tissues. Fish were kept in 10 ppm Cu2+ (3h), CrO4(2-) (96h), Co2+ (96h), Pb2+ (8h) and control (96h) solutions, then tissues were dissected and prepared for X-ray microanalysis. K+, Na+ and Cl- concentration was measured and calculated. Short periods of time of fish acclimation to Cu2+ (3h) and Pb2+ (8h) caused fish to suffocate as a consequence of heavy metal ions binding to gill mucopolisaccharides. Cl- and Na+ content decreased after Cu2+ treatment in kidney cells and muscle fibers, and so did K+ concentration in gill cells in comparison to control. After that CrO4(2-) ions acclimation changes in all tissues and in all measured ions were observed. Similar effects were observed in Co2+ ions treatment but not for muscle fibers. Pb2+ ions caused an elevation of Cl- and Na+ ions content in gill cells and muscle fibers but decreasing in liver and kidney cells in comparison to control. Changes in monovalent ions concentration are probably related to heavy metal ions influence on ionic pump activity, their interaction with metabolic enzymes, ATP production or membrane phospholipids.     

Identification of natural hybrids of gibel carp Carassius auratus gibelio (Bloch) and crucian carp Carassius carassius (L.) from lower Dyje River floodplain (Czech Republic)

Morphometric and genetic variation were examined in parental Carassius auratus gibelio and Carassius carassius individuals, and their natural hybrids. Of meristic traits, only the number of gill rakers clearly distinguished hybrids (39·4 ± 1·4) from parental C. a. gibelio (48·3 ± 0·7) and C. carassius (28·6 ± 1·1). MtDNA sequences showed that the hybrids were descendants of female C. a. gibelio . Microsatellite analysis confirmed the presence in hybrids of variants typical of C. a. gibelio and C. carassius .     

池养条件下银鲫与鲫鱼的生物学特性比较及其在生产上的意义

银鲫在我国分布于黑龙江流域和新疆额尔齐斯河等水域中。在四川省池养条件下,比较了银鲫与本地鲫的形态、食性、生长、繁殖、含肉量、鱼肉营养成分和起水率等生物学特性。形态差别主要在于银鲫体型较高,头略短,侧线鳞和脊椎骨数稍多。食性相似。银鲫生长较本地鲫约快150%。银鲫在2足龄左右第一次性成熟,产卵盛期较本地鲫略晚1个月,性比为(?)34.1%(体长6.1—14.5厘米)—(?)5.95%(体长15.4—18.5厘米)。银鲫的肥满度,含肉量,鱼肉含脂量以及起水率均较本地鲫高。初步讨论了银鲫的某些生物学特性在其养殖和选育上的经济意义。       

Histological changes in the gill, kidney and liver of Lahontan cutthroat trout, Salmo clarki henshawi, living in lakes of different salinity-alkalinity

Lahontan cutthroat trout thrive in saline-alkaline lakes, where other trout species often cannot survive. We examined Lahontan cutthroat trout from nine lakes in which salinity and alkalinity ranged from about 90 to 12 000 mg1⁻¹ and 60 to 3500mgl⁻¹ as HCO₃⁻ respectively, for sublethal histological changes in gill, kidney, and liver tissues. Gill chloride cell hyperplasia, gill lamellar epithelial separation, kidney glomerular swelling, blood congestion in kidneys, and deposition of hyalin droplets in kidney glomeruli, tubules, and hemopoietic tissues were the histological alterations statistically associated with differences in lakewater chemistry.
Deposition of hyalin in kidney tubules was the only histological change judged pathological and whose severity appeared sufficient to jeopardize normal organ function. Differences in lakewater chemistry explained nearly 90% of the variability observed in severity of tubular hyalin degeneration, and SO₄²⁻ was the ion most positively correlated with increasing tubular hyalin. Our results suggest that Lahontan cutthroat trout will develop slight to moderate hyalin degeneration in kidney tubules if stocked into lakes where salinity and SO₄²⁻ concentrations equal or exceed 5000 mgl⁻¹ and 2000mgl⁻¹, respectively.     

Effects of some pesticides on the vital organs of juvenile rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)

Gill, trunk kidney, spleen, and liver of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) were examined after exposure to different sublethal concentrations of carbosulfan (25, 50 and 200 μg L⁻¹), propineb (3, 6 and 24 mg L⁻¹), and benomyl (2, 5 and 20 mg L⁻¹) for 14 days. Lesions were observed in gill, trunk kidney, spleen, and liver of rainbow trout exposed to either concentration of pesticides. The most important lesions were determined in the highest concentrations of pesticides. Lamellar fusion, lamellar hyperplasia, epithelial lifting, vacuolization of epithelial tissue, epithelial necrosis, hypertrophy and sloughing of epithelium were observed on fish exposed to carbosulfan, propineb and benomyl. Fish had cell necrosis, degeneration and oedemas in liver, trunk kidney and spleen. None of these lesions were seen in control fish.     

江苏盐城地区异育银鲫大红鳃疾病病原学研究及病理学观察

为鉴定近期江苏盐城地区养殖异育银鲫大红鳃疾病病原,研究从患病濒死鱼中分离到两株致病菌并对其理化特性、分子生物学、感染病理学进行了研究,同时开展了鉴别诊断和回归试验以及药敏检测。结果显示,两分离株理化特性与温和气单胞菌（A.sobria）特征相符,与GenBank中A.sobria的gyrB基因同源性达99%以上,在系统发育树上均与A.sobria聚为一族。同时与鲤科疱疹病毒2型（CyHV-2）鉴别诊断结果表明,患病鱼组织中CyHV-2检测为阴性。组织学上,鳃和肾组织具有典型病理变化。人工感染两株A.sobria后,鱼体出现与自然发病相似的大红鳃症状,并能从发病鱼组织中再分离到相同病原菌;而人工感染CyHV-2组织匀浆后的鲫虽然出现死亡,但无大红鳃症状出现。综上,确认此次大红鳃疾病的病原为A.sobria。药敏实验表明,分离菌株对诺氟沙星、氧氟沙星、氯霉素三种药物敏感。研究为临床上更好的预防异育银鲫大红鳃疾病奠定了基础。