毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

马尾松幼胚体细胞胚胎发生研究

本论文首次报道了马尾松（Pinus massoniana Lamb.）幼胚体细胞胚胎发生的完整发育过程,并对影响马尾松胚性愈伤组织诱导的因素如球果采种期、球果冷藏处理时间、外植体处理方式等进行了探讨,统计胚性愈伤组织诱导率,进行增殖评价,探讨ABA浓度梯度对马尾松体细胞胚分化成熟的影响,试验数据用SPSS16统计分析软件进行方差分析、差异显著性检验。结果表明：1）2008~2009连续2年内15个采种期得到的幼胚,胚性愈伤组织诱导和增殖有显著性差异,最适宜的马尾松球果采种期是6月下旬至7月下旬,诱导率在9.66%~22.59%之间;2）球果冷藏处理时间,对胚性愈伤组织诱导有显著性差异,其中4℃冷藏球果15d有利于幼胚胚性愈伤组织诱导;3）雌配子体包含幼胚的接种处理方式是可取的;4）胚性愈伤组织经稳定增殖培养后,转入分化成熟培养基,得到体细胞胚状体＂爆发式＂分化成熟,数量多,质量好。适宜体胚成熟转化的培养基为：成熟LP培养基添加ABA5.0mg·L-1＋60.0g·L-1蔗糖,并附加L-谷氨酰胺和水解酪蛋白;5）成熟体细胞胚在无激素萌发型LP培养基上正常萌发,并转化为结构完整的小植株。本研究首次建立了马尾松幼胚体细胞胚胎发生技术平台,为马尾松遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。     

浙皖粗筒苣苔的组织培养和快速繁殖

1植物名称浙皖粗筒苣苔（Briggsia chienii Chun）。2材料类别种子及无菌苗叶片。3培养条件MS为基本培养基。诱导种子发芽培养基：（1）MS＋6-BA 1.0 mg·L-（-1）（单位下同）＋NAA 0.5;诱导叶片分化培养基：（2）MS＋6-BA 2.0＋NAA 0.5;增殖继代培养基：同（1）;壮苗培养基：（3）MS＋6-BA0.1＋NAA 0.05;生根培养基：（4）1/2MS＋0.1%活性炭。以上培养基均含30 g·L-（-1）蔗糖和7.0 g·L-（-1）琼脂,pH 5.8。培养温度为（25±2）℃;     

闽赣长蒴苣苔的组织培养和快速繁殖

1植物名称闽赣长蒴苣苔（Didymocarpus heucherifoliusHand.-Mazz.）。2材料类别幼叶。3培养条件MS为基本培养基。诱导不定芽分化培养基：（1）MS＋6-BA0.1 mg·L-（-1）（单位下同）＋NAA0.1;（2）MS＋6-BA 1.0＋NAA 0.5;（3）MS＋6-BA 2.0＋NAA0.5。增殖继代培养基：（2）;（3）;（4）MS＋6-BA 2.0＋NAA 1.0;（5）MS＋6-BA 0.05＋NAA 0.05。生根培养基：（6）1/2MS＋NAA 0.5;（7）1/2MS＋0.5%活性炭;（8）1/2MS＋0.1%活性炭。以上培养基均含30 g·L-（-1）蔗糖和7.0 g·L-（-1）琼脂,pH 5.8。培养温度为（25±2）℃,光照强度约为30μmol·m-（-2）·s-（-1）,光照时间为16h.d-（-1）。     

文冠果的体细胞胚胎发生

文冠果种子在MS 6-BA 1.0 mg·L-1 2,4-D 1.0 mg·L-1 NAA 1.0 mg·L-1 3%蔗糖的固体培养基上暗培养,形成愈伤组织,愈伤组织在B5 6-BA0.5mg·L-1 NAA0.5mg·L-1 2%蔗糖的培养基中弱光悬浮培养形成体细胞胚.在蔗糖为1%时,子叶状胚萌发形成完整小植株.细胞学观察表明,文冠果体细胞胚源于胚性愈伤组织的外层细胞,此区域细胞富含淀粉粒.     

辽东栎的组织培养和植株再生

1植物名称辽东栎（Quercus liaotungensis Koidz.）。2材料类别成熟合子胚。3培养条件以MS为基本培养基。（1）不定芽诱导培养基：MS＋6-BA 1.0 mg·L-（-1）（单位下同）＋2,4-D 0.5;（2）不定芽增殖培养基：MS＋6-BA 1.0＋NAA 0.5＋GA_30.5;（3）生根培养基：1/2MS＋NAA 0.5。以上培养基均加入30 g·L-（-1）蔗糖和6.5 g·L-（-1）琼脂,pH 5.8。培养温度为（25±2）℃,光照强度为40～50μmol·m-（-2）·s-（-1）,光照时间为16 h·d-（-1）。     

鹿角苔的组织培养

1植物名称鹿角苔（Riccia Fluitans L.）。 2材料类别 叶状体。 3培养条件（1）启动培养基：1/2MS＋10g·L-1蔗糖＋2g·L-1活性炭＋3g·L-1琼脂粉;（2）生长培养基：1/2MS＋BA0.1mg·L-1（单位下同）＋NAA0.1＋40g·L-1土豆泥＋30g·L-1蔗糖＋1g·L-1活性炭＋3g·L-1琼脂粉;     

亚麻胚性细胞悬浮培养体系的建立和影响因素

亚麻品种‘双亚五号’的胚性愈伤组织诱导最佳培养基为MB（MS无机盐加B5维生素）＋1.0mg·L^-12,4-D;细胞初始悬浮培养的最佳培养基为MB＋0.2mg·L-16-BA;细胞继代悬浮培养的最佳培养基为改良的MB（NH4NO3减半,KNO3加倍）＋0.02mg·L^-12,4-D＋0.2mg·L^-16-BA;适宜的蔗糖量为50g·L^-1;适宜的继代接种量为1.0～1.5g·（25mL）^-1;继代间隔为5～7d。     

马尾松胚乳愈伤组织发生的初步研究

为获取马尾松(Pinus massoniana)单倍体材料，建立其胚乳组织培养体系，对马尾松胚乳不同的消毒方法进行筛选，并分析不同基本培养基、生长调节剂配比和热激处理对愈伤诱导的影响。结果表明，胚乳的最佳消毒方式为75%酒精处理30 s+2% NaClO消毒15 min，外植体污染率为0，死亡率仅为15.56%；生长素可促进愈伤诱导且是必需的；细胞分裂素浸泡种子可代替培养基中的细胞分裂素，并能取得比较好的胚乳愈伤诱导效果，1.0 mg·mL-1 6-BA浸泡30 min处理的效果最佳，在培养基WPM+NAA 2.0 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1中，愈伤诱导率高达87.78%；培养基DCR+NAA 2.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1的胚乳愈伤诱导率最高(68.75%)；热激处理可提高胚乳愈伤的诱导率和质量，以相对湿度85%下45 ℃热激10 min最佳，总愈伤诱导率为66.25%，成团愈伤诱导率达8.75%；增殖培养以培养基WPM+NAA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1最佳，增殖率达83.33%。     

岩生报春的组织培养与快速繁殖

1植物名称岩生报春（Primula saxatilis Kom.）。2材料类别种子。3培养条件（1）种子萌发培养基：1/2MS;（2）无菌苗增殖培养基：MS;（3）丛生芽诱导和增殖培养基：MS＋6-BA 2.5 mg·L-（-1）（单位下同）＋NAA 1.0;（4）生根培养基：MS＋NAA 0.1。上述各培养基均添加7 g·L-（-1）琼脂和30 g·L-（-1）蔗糖,pH 5.8～6.0。培养温度为20～23℃,光照强度为20～25μmol·m-（-2）·s-（-1）,光照时间为14 h·d-（-1）。     

雷竹体细胞胚诱导的初步研究

以雷竹（Phyllostachys violascens）种胚为外植体, 脱分化产生愈伤组织, 愈伤组织诱导产生体细胞胚, 并发育成苗。实验结果表明： 愈伤组织诱导体细胞胚基本培养基为MS无机盐＋20 g·L^-1葡萄糖（glucose）＋10 mg·L^-1腺嘌呤（adenine sulfate）＋ 0.5 g·L^-1麦芽抽提物（malt extract）＋0.1 mg·L^-1 6-BA＋0.01 mg·L^-1氨氯吡啶酸（picloram）＋10 g·L^-1type A agar; 将基本培养基中的氨氯吡啶酸浓度升高至0.1 mg·L^-1即为愈伤组织诱导的最佳培养基, 早期子叶胚是愈伤组织诱导的最佳胚体; 愈伤组织在添加0.001 mg·L^-1TDZ和0.3 mg·L^-1ABA的愈伤组织最佳培养基上光照培养4周后, 去除其中的ABA, 并添加0.1 mg·L^-1NAA继续培养1个月, 体细胞胚数量最多可达87.43%, 该培养基是体细胞胚发生的最佳培养基; 将上述体细胞胚发生培养基中的6-BA浓度升高至1 mg·L^-1, 继代培养2个月后有小苗出现。组织学观察显示, 体细胞胚细胞核大、质浓且多数呈球形原胚状。     

罗河石斛的组织培养与快速繁殖

1植物名称罗河石斛（Dendrobium lohohense Tanget Wang）。2材料类别带芽茎段。3培养条件（1）原球茎诱导培养基：MS＋6-BA 1.0mg·L-（-1）（单位下同）＋NAA 0.1＋KT 0.5;（2）丛生芽增殖和分化培养基：MS＋6-BA 2.0＋NAA 0.1＋5%香蕉提取物;（3）壮苗生根培养基：1/2MS＋6-BA 0.1＋IBA0.5＋10%椰子汁。上述培养基中分别附加5 g·L-（-1）琼脂,pH 5.8～6.0。培养温度（25±1）℃;光照时间12 h·d-（-1）,光照强度20～30μmol·m-（-2）·s-（-1）。     

领春木体细胞胚胎发生及植株再生

以领春木（Eupteleapleiospermum Hook．f.etThoms．）种子幼胚为试验材料,对领春木体细胞胚胎发生进行了研究。结果表明：在附加1．0mg·L-1 2,4．D＋0．5mg·L-1 6-BA＋3％蔗糖＋0．8％琼脂的Ms培养基上可诱导出愈伤组织。愈伤组织在附加0．5mg·L-1 NAA＋0．5mg·L-1 6．BA的培养基上可形成体细胞胚;体胚在附加0．5mg·L-1 6-BA＋0．05mg·L-1 NAA＋0．1％PVP的1／2MS培养基上能大量增殖;将成熟体胚转移到不添加任何植物生长调节剂的MS培养基上,培养60d,形成正常植株。     

党参的体细胞胚发生及不同发育阶段几种同工酶的分析

以党参为材料,在附加0.1 mg·L-1 2,4-D、0.3 mg·L-1 6-BA和3%蔗糖的MS培养基上获得大量发育良好的体细胞胚. 附加6-BA可以使胚性愈伤组织进行芽的分化,而添加0.1%活性炭后仅有根的分化.利用梯度凝胶电泳进行同工酶的研究表明在胚性愈伤组织和体细胞胚之间,酶谱差异比较大;而在不同发育时期的体细胞胚之间,差异较小.并讨论了同工酶酶谱和酶活性变化与体细胞胚发生、发育的关系.     

杂交兰类原球茎增殖中芽分化的控制和快速繁殖

以‘玉女杂交兰’为材料,研究了培养时间、活性炭、切块大小和外源生长调节物质对类原球茎增殖和分化的影响。结果表明,培养时间、活性炭和切割处理对类原球茎增殖和分化影响显著,在培养基中添加活性炭或对类原球茎进行切割均能有效控制增殖过程中的芽分化。将类原球茎切成直径2~3 mm的小块接种到培养基MS＋1.0 mg.L-16-BA＋0.2 mg.L-1NAA＋0.3 g.L-1AC＋30 g.L-1蔗糖＋5.5 g.L-1琼脂中培养40 d,类原球茎增殖率为384.23%。将增殖后的类原球茎接种到培养基1/2MS＋1.5 mg.L-16-BA＋0.1 mg.L-1NAA＋20 g.L-1蔗糖＋5.5 g.L-1琼脂中培养40 d,芽分化率为463.06%。将分化的芽转入培养基1/2MS＋0.5 mg.L-1NAA＋0.5 g.L-1AC＋20 g.L-1蔗糖＋100 g.L-1土豆汁＋5.5 g.L-1琼脂中培养,生根率为100%,平均根分化数为2.80条.株-1。以泥炭土为基质,组培苗的移栽成活率可达97.78%。     

卡佩指甲草的组织培养与快速繁殖

1植物名称卡佩指甲草[Paronychia kapela（Hacq.）Kerner]。2材料类别带芽茎段。3培养条件（1）启动培养基：MS＋6-BA 0.5 mg·L-（-1）（单位下同）＋NAA 0.2;（2）丛生芽诱导和增殖培养基：MS＋6-BA 0.5＋NAA 0.1;（3）生根培养基：1/2MS＋NAA0.1。以上培养基中均加入30 g·L-（-1）蔗糖和7 g·L-（-1）琼脂,pH为5.8～6.0。培养温度为（25±2）℃,光照强度40～60μmol·m-（-2）·s-（-1）,日光灯补光,光照时间16h.d-（-1）。     

‘宁杞8号’体细胞胚胎发生体系建立

以宁夏枸杞新品种‘宁杞8号’幼嫩叶片为外植体,探讨激素组合及添加物对‘宁杞8号’体细胞胚胎诱导、体胚增殖、萌发和植株再生的影响,并建立高效稳定的体细胞胚胎发生体系。结果表明:通过对6-BA、2,4-D和IAA进行正交分析,筛选出‘宁杞8号’体细胞胚诱导最优激素组合:6-BA 1.0 mg·L~(-1)+2,4-D0.3 mg·L~(-1)+IAA 0.4 mg·L~(-1),体胚诱导率达88.67%。极差分析比较各激素间的影响,6-BA对体胚诱导影响最显著。当高浓度的生长素及低浓度细胞分裂素浓度适宜的配比时,才能诱导产生形态正常数量多的‘宁杞8号’体细胞胚。在体胚增殖培养中,6-BA的浓度过高易导致玻璃化,不利于‘宁杞8号’体胚增殖生长。随着激素浓度的增高,体胚增殖倍数增加,玻璃化率也越高,综合分析得到‘宁杞8号’最佳体胚增殖培养基为6-BA 0.4 mg·L~(-1)+NAA 0.6 mg·L~(-1)。当添加IBA 0.3 mg·L~(-1)+GA_30.4 mg·L~(-1)+蔗糖10 g·L~(-1)时,‘宁杞8号’体胚萌发率最高,萌发率达89.17%。添加GA_3及低浓度蔗糖能促进成熟的体胚萌发。对‘宁杞8号’体萌发的影响程度依次是IBA蔗糖GA_3。活性炭能有效提高‘宁杞8号’体胚再生植株率,同时对萌发体胚的根的发育也有促进作用,当IBA 0.1 mg·L~(-1)+KT 0.4 mg·L~(-1)+活性炭1 g·L~(-1)时,‘宁杞8号’体胚再生植株效果最佳,体胚再生率达91.67%。     

心心相印的组织培养与快速繁殖

1植物名称心心相印(Ceropegia woodii Schlecht.)。2材料类别茎段。3培养条件(1)芽诱导培养基:MS IBA0.1mg·L-1(单位下同) 6-BA1.0 蔗糖30g·L-1;(2)继代增殖培养基:MS IBA0.1 6-BA0.5 蔗糖3     

欧洲李的组织培养与快速繁殖

1植物名称欧洲李（Prunus domcstica L.）。2材料类别幼嫩茎段。3培养条件愈伤组织启动培养基：（1）MS＋6-BA0.8mg·L^-1（单位下同）＋IAA1.2;（2）MS＋6-BA1.0＋NAA0.1。丛生芽诱导和增殖培养基：（3）MS＋6-BA0.8＋IAA1.5＋NAA0.05。生根培养基：（4）1/2MS＋IBA0．5＋根皮苷5。以上培养基除生根培养基（4）的蔗糖为15g．L^-1外,其他培养基均加入30g．L^-1蔗糖和5g·L^-1琼脂粉,     

亚麻品种''''双亚5号''''的胚性愈伤组织诱导和体细胞胚胎发生

亚麻品种'双亚5号'的种子在MS 1.0 mg·L-1 2,4-D 30 g·L-1蔗糖培养基上可诱导出愈伤组织,将其转入MS 0.5mg·L-1KT 0.5mg·L-1NAA培养基上培养10周后诱导出大量胚性愈伤组织,结构较致密,浅黄色,表面有成团的紧密粘附在一起的小颗粒形态.但其继代周期不宜太长,继代次数不宜多,否则易回到非胚性化状态.胚性愈伤组织转A.MS 1.5 mg·L-1(T 1.0 mg·L-1 2,4-D分化培养基上培养40 d后可获得大量的球形胚状体.少量球形体胚可萌发形成正常的子叶胚初期形态,较多的球形体胚形成次生体胚或仅有单极性的畸形胚状体.组织解剖学观察表明,诱导出的是亚麻胚性愈伤组织和胚状体.