携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定

利用细菌人工染色体技术将串联的HIV-1 gp160、gag和protease基因以及表达元件插入1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)内部反向重复序列区,以获得携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗。首先将HIV-1 gp160(B型和C型)、gag和protease基因串联克隆入pc DNA3获得重组质粒pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp,重组质粒转染293FT细胞,Western blotting检测HIV抗原表达。继而将pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp中包括HIV-1抗原基因和表达元件的表达框克隆入p KO5/BN获得重组穿梭质粒p KO5/BN/g Bgp和p KO5/BN/g Cgp,穿梭质粒电转含BAC-HSV的大肠杆菌,筛选重组菌,提取重组DNA并转染Vero细胞,挑取病毒蚀斑纯化重组病毒,Southern blotting鉴定重组病毒DNA,Western blotting检测重组病毒感染细胞中HIV抗原表达,并分析病毒的增殖特性。结果表明,Western blotting在pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp转染的293FT细胞中检测到表达的gp160和gag蛋白。p KO5/BN/g Bgp和p KO5/BN/g Cgp分别电转获得重组菌,并从重组DNA转染的Vero细胞中纯化获得重组HSV,Southern blotting检测表明重组HSV基因组发生特异性重组,重组病毒感染细胞中检测到gp120和gp41,且重组HSV保留了在哺乳动物细胞中的复制能力。本研究获得携载HIV-1 gp160、gag和protease基因的重组HSV,并保留了在哺乳动物细胞中的复制能力,可作为HIV-1复制型病毒载体疫苗。     

亚麻品种''''双亚5号''''的胚性愈伤组织诱导和体细胞胚胎发生

亚麻品种'双亚5号'的种子在MS 1.0 mg·L-1 2,4-D 30 g·L-1蔗糖培养基上可诱导出愈伤组织,将其转入MS 0.5mg·L-1KT 0.5mg·L-1NAA培养基上培养10周后诱导出大量胚性愈伤组织,结构较致密,浅黄色,表面有成团的紧密粘附在一起的小颗粒形态.但其继代周期不宜太长,继代次数不宜多,否则易回到非胚性化状态.胚性愈伤组织转A.MS 1.5 mg·L-1(T 1.0 mg·L-1 2,4-D分化培养基上培养40 d后可获得大量的球形胚状体.少量球形体胚可萌发形成正常的子叶胚初期形态,较多的球形体胚形成次生体胚或仅有单极性的畸形胚状体.组织解剖学观察表明,诱导出的是亚麻胚性愈伤组织和胚状体.     

HSV-1溶瘤病毒的研究进展

1型单纯疱疹病毒（Herpes simplex virustype1,HSV-1）感染效率高且易于通过基因工程改造,己广泛应用于肿瘤治疗研究和临床实验。溶瘤HSV-1可通过基因工程改造或从HSV-1自发突变株中筛选获得。研究证实溶瘤HSV-1能够有效抑杀肿瘤细胞,可通过多种机制靶向肿瘤细胞,溶瘤HSV-1与放化疗联合使用治疗肿瘤的研究也取得了理想的结果。目前,已有多个溶瘤HSV-1进入临床试验。