云芝发酵产胃蛋白酶抑制剂的反应机理探讨

目的:对一种从云芝发酵液中提取得到的胃蛋白酶抑制剂的动力学性质和反应机理进行研究.方法:采用Lineweaver-Bunk双倒数法和UltroGelACA-54凝胶过滤法:结果:实验证明抑制剂为胞内产物.其成分是蛋白质,分子量为23 100Da,K值为0.996 μmol/L.结论:抑制剂对胃酶的抑制类型属于非竞争和反竞争混合型抑制模式,它与胃酶结合作用的方式可能是在酶的活性基同形成氢键并封锁酶与底物的结合部位.     

槐尺蠖多酚氧化酶的纯化及酶学特征

经40%饱和度硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤等步骤,将槐尺蠖Semiothisa cinerearia Bremer et Grey 多酚氧化酶纯化,纯化倍数为6.96倍。该酶对焦性没食子酸,邻苯二酚和L多巴的Km值分别为0.23 mmol/L, 0.48 mmol/L和0.49 mmol/L。多酚氧化酶在pH 7.0,37℃时活性最高,并在40℃以上条件下,随着保温时间的延长酶活力下降。用槲皮苷和硫脲作抑制剂对该酶活性的抑制结果表明,这两种抑制剂分别属于竞争性和非竞争性抑制剂。     

螺旋藻源血管紧张素转化酶抑制肽的纯化和鉴定

血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂通过影响肾素-血管紧张素系统,对减缓和抑制高血压具有重要的作用.该研究通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱等方法,从钝顶螺旋藻的木瓜蛋白酶水解液中分离、纯化得到一种血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和氨基酸测序对纯化肽进行鉴定.此外,对其抑制类型和体外模拟消化环境稳定性也进行了研究.结果表明,分子质量范围为0～3000ku的酶解液ACE抑制活性最高,IC50值为(1.03±0.04)g/L.该部分酶解液通过纯化获得ACE抑制肽,IC50值为(0.0094±0.0002)g/L,相当于(27.36±0.14)μmol/L,序列经鉴定为Val-Glu-Pro.Lineweaver-Burk图和Dixon图表明该ACE抑制肽为非竞争性抑制剂,Ki值为(23.59±0.54)μmol/L.体外稳定性实验显示,该抑制肽在胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶等胃肠蛋白酶的消化下能够保持良好的抑制活性,表明螺旋藻源ACE抑制肽可以用于降血压功能食品和药剂方面,具有很好的发展前景.     

酶解大豆蛋白产天冬氨酸蛋白酶抑制剂的研究

本文通过采用可控酶解的方式酶解大豆蛋白获得了一种源自大豆的天冬氨酸蛋白酶抑制剂SAPI( soy aspartic proteinase inhibitor).酶解液经过DEAE-52阴离子交换层析、Superdex Peptide 10/300 GL凝胶层析、SOURCE 15RPC反相层析分离后最终比抑制活力为254.2 IU/mg,纯化倍数为62.SAPI对胃蛋白酶(3000U)半数抑制浓度IC50为25.67 μg/mL,有良好的热稳定性,属于一种非竞争性抑制剂.     

海芋胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

利用亲和层析和分子筛凝胶过滤等技术,从海芋根茎中分离纯化到一种胰蛋白酶抑制剂,简称ＡＭＴＩ。经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定均显示单一条带,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其分子量为２２０００,经等电聚焦（ＩＥＦ）测定,其等电点为６．２。根据对胰蛋白酶的抑制比可知该抑制剂为单头抑制剂,其抑制活性在６０℃和ｐＨ５￣１１范围内保持稳定。     

银杏种仁中一种抗氧化活性蛋白的纯化及性质

银杏种仁经破碎,提取缓冲液4℃浸取后离心得上清液。上清液经硫酸铵沉淀,DEAE-52离子交换层析,MonoQ离子交换层析,UltroGelACA-54凝胶过滤层析后,分离得到一种具有抗氧化活性的蛋白。该蛋白经UltroGelACA-54凝胶过滤层析测定分子量为60 kD,经PAGE和SDS-PAGE鉴定均为单一蛋白质条带。SDS-PAGE测定其亚基分子量为10 kD。该蛋白具有一定的还原能力和清除超氧阴离子自由基及DPPH自由基能力,并在30～60℃温度下具有良好的稳定性。     

流感病毒神经氨酸酶广谱抑制多肽的筛选研究

以纯化的流感病毒颗粒H1N1、H3N2为靶点对噬菌体展示的随机12肽库进行了筛选。经ELISA、神经氨酸酶抑制活性鉴定,获得52个阳性噬菌体克隆。根据测序和氨基酸序列分析,挑选出不同克隆间同源性最高的6条多肽进行化学合成。神经氨酸酶抑制活性实验显示,6条多肽中54-N1和69-N2的抑制活性最强,对N1、N2和乙型流感病毒三种流感病毒神经氨酸酶均有明显的抑制活性,54-N1的IC50值为7.486~14.693μmol/L,69-N2的IC50值为6.605~13.007μmol/L。同时,54-N1和69-N2可抑制流感病毒在MDCK细胞中的生长。病毒空斑抑制实验显示,54-N1和69-N2可明显抑制空斑形成的大小和数目。通过分析,54-N1的IC50值为18.38~31.76μmol/L,69-N2的IC50值为16.56~25.49μmol/L。两条多肽的浓度在高达10mmol/L时仍对细胞无任何毒性。54-N1和69-N2作为新的流感病毒神经氨酸酶抑制剂,与现有NA抑制剂Oseltamivir进行了比较和讨论,为进一步研制局部应用的广谱抗流感病毒的鼻腔喷雾剂奠定了基础。     

多孔板-MTT比色法评价植物和微生物代谢产物的抗真菌活性

多孔板-MTF比色法测定植物和微生物代谢产物对真菌抑制活性的步骤为:在多孔板的每孔中依次加入浓度为105孢子/mL的供试真菌孢子悬液90μL,不同浓度的药液10 μL.25℃暗培养48 h,然后每孔中加入8mg/mL的MTT溶液10μL,继续培养10 h后,离心去上清,加入DMS0 150 μL,振荡30 min,离心后上清液在510nm测定吸光值.采用上述条件测定了白屈菜红碱对稻瘟病菌和西瓜枯萎病菌的MIC值分别为80和1.5μg/mL,IC50值分别为21.99和0.78 μg/mL;Diepoxinζ对稻瘟病菌的MIC和IC50值分别为200和96.21 μg/mL.多孔板-MTT比色法为快速有效地筛选和评价植物和微生物抗真菌活性成分创造了条件.     

条斑紫菜蛋白酶解产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂纯化及特性

以α-葡萄糖苷酶抑制活性为指标,优选出1398中性蛋白酶、碱性蛋白酶和氨肽酶在一定条件下复配酶解条斑紫菜蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制剂。酶解液加入乙醇至终浓度为60%以沉淀去除多糖,上清液为α-葡萄糖苷酶抑制剂粗品。该粗品利用SP Sepharose High Performance阳离子交换层析、Sephadex G-10凝胶层析和Mono Q阴离子交换层析进行分离纯化,获得一种肽类α-葡萄糖苷酶抑制剂(LGI)。LGI经反向高效液相层析测定纯度为62.4%,基本特性分析显示其具较好的温度和pH稳定性,对α-葡萄糖苷酶半抑制浓度IC50值为97.36μg/mL,属于一种非竞争性抑制剂。     

菠菜种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与部分性质研究

以菠菜种子为材料,经脱脂、酸性溶液抽提、热变性、硫酸铵分部沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物。再经离子交换、亲和层析和凝胶过滤,分离得到胰蛋白酶抑制剂SOTI,纯化倍数为57．22。SDS-PAGE测定其分子量约为22kD,等电聚焦测定其等电点为4．02。SOTI具有较高的热稳定性,在100℃处理后仍然具有一定的抑制活性。