白菜型油菜种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究

采用热变性、硫酸铵分步盐析及离子交换层析和分子筛层析等方法,从白菜型油菜种子中得到胰蛋白酶抑制剂(BNTI)。SDS-PAGE检测为单一条带,表明纯化的胰蛋白酶抑制剂电泳均一。SDS-PAGE测定其分子量约为14．4kD,等电聚焦测定其等电点约为4．7。BNTI具有较高的热稳定性。本文还考察了温度对溶液中BCH蛋白构象的影响,荧光光谱和测定抑制活力结果表明BNTI中的色氨酸和酪氨酸残基位于疏水部位。     

睡眠质量与脑胶质瘤致病关系的探索性研究

摘要 目的：探索睡眠质量与脑胶质瘤致病可能存在的关系,为脑胶质瘤的病因学研究提供一定科学的依据。方法：对 2017年 6月 -2018年 10月期间在首都医科大学附属北京世纪坛医院及首都医科大学附属北京天坛医院就诊,并经术后病理诊断为脑胶质瘤的患者 109例,及对照组 117例,用问卷调查方式采样信息,包含性别、年龄、吸烟史、饮酒史、BMI、肿瘤家族史、居住地区、颅脑损伤史、睡眠质量情况（匹兹堡睡眠质量指数量表 PSQI）。通过病例 -对照的研究方法,采用二元 Logistic回归分析,分析睡眠质量与脑胶质瘤致病间可能存在的关联性。结果：单因素 Logistic回归分析结果示睡眠质量差（OR=1.468,95%CI:1.275-2.275）、睡眠时间短（OR=1.797,95%CI:1.070-3.015）、睡眠效率低（OR=2.992,95%CI:2.259-3.964）、匹兹堡睡眠质量指数量表总分高（OR=1.180,95%CI:1.093-1.272）,提示上述因素可能与脑胶质瘤的致病存在关联,且具有统计学意义（P<0.05）;多因素二元 Logistic回归分析结示,在带入性别、年龄、吸烟史、饮酒史、BMI、肿瘤家族史、居住地区、颅脑损伤史等暴露因素后,睡眠质量评分高,即睡眠质量差（OR=1.457,95%CI: 1.060-2.002）、睡眠效率评分高,即睡眠效率低（OR=4.267,95%CI: 2.634-6.914）,可能与脑胶质瘤的致病存在关联。结论：我们的研究表明,睡眠质量差、睡眠效率低与脑胶质瘤的致病可能存在关联,希望为脑胶质瘤病因学的进一步研究提供一定的参考依据。     

Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。     

菠菜种子胰蛋白酶抑制剂对K-562细胞增殖的抑制及促凋亡作用研究

应用MTT法分析了菠菜种子胰蛋白酶抑制剂SOTI对人慢性髓原性白血病K-562细胞生长的影响。结果显示SOTI能够抑制K-562细胞的增殖,其抑制细胞增殖的作用呈现明显的剂量-效应关系;进一步观察了不同浓度的SOTI处理K-562细胞所导致的形态学变化和诱导凋亡作用,证实SOTI具有明显的体外抗癌活性,SO—TI的抗癌活性与其诱导凋亡有关。     

菠菜种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与部分性质研究

以菠菜种子为材料,经脱脂、酸性溶液抽提、热变性、硫酸铵分部沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物。再经离子交换、亲和层析和凝胶过滤,分离得到胰蛋白酶抑制剂SOTI,纯化倍数为57．22。SDS-PAGE测定其分子量约为22kD,等电聚焦测定其等电点为4．02。SOTI具有较高的热稳定性,在100℃处理后仍然具有一定的抑制活性。