石蜡切片法中染色技术的改良

石蜡切片是观察动植物组织最直接有效的方法之一。本实验对水稻品种9311的叶片进行切片并用1%的番红—乙醇染液和1%的苯胺蓝—乙醇染液进行染色,结果显示此改良方法得到的组织比传统石蜡切片更完整,染色的效果比传统石蜡切片更清晰,并且利用此方法对水稻叶片进行制片,可以大量缩短制片后期复水及脱水的时间,提高工作效率。     

介绍一种改良的油红O脂肪染色法

在日常病理诊断和科研工作中,显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色。应用过程中发现,配制该染液所用的丙酮和异丙醇容易挥发,致使染液产生沉淀,染色时易在组织切片上留下红色的结晶,给染色结果的准确判断带来很大影响。为此,我们对染液配方进行了改进,收到较好效果。材料和方法1·标本人或动物的肝组织等,甲醛—钙液固定,冰冻切片,厚10μm。2·改良的油红O染色液油红O 0.5g,50%乙醇100m l。将油红O溶于乙醇内,且不断搅拌至完全溶解即可。配制好的染液置磨口瓶内保存备用。3·染色步骤①切片干燥后入50%乙醇稍洗;②油红O乙醇染液作用8m in…     

神经纤维染色及应用体会

在神经组织的疾病诊断和科研中 ,应用常规HE染色可以观察到神经元及神经纤维的全貌 ,但是它们的细微结构和某些特殊成分需要特殊的染色方法来显示。在工作实践中 ,对神经纤维的染色 ,我们在应用 Bielschowsky染色法的基础上 ,添加以微波辐射技术 ,取得了良好的染色效果 ,经过认真的观察 ,反复实验对比 ,总结了几点应用体会 ,现介绍如下 :1 .染色方法( 1 )载玻片涂胶 ,石蜡切片厚 8～ 1 0μm,放入70℃烤箱中过夜。( 2 )脱蜡至水洗 ,蒸馏水洗 3次。( 3)放入 2 0 %硝酸银水溶液中浸染 ,微波 5档、4分钟 ,保温 5分钟。( 4 )蒸馏水洗 2次。( 5 …     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

龙胆紫希夫氏液显示DNA染色新方法

应用龙胆紫配制成Schiff(希夫氏)试剂,在微波辐射下进行Feulgen染色,结果使正常及良、恶性肿瘤组织细胞核内DNA着紫红色,并能应用真彩色图像仪进行DNA的定量分析.其方法操作简便,便于临床病理诊断应用.现介绍如下.标本的采集:活检手术切取的肿瘤组织100余例,经甲醛固定,石蜡包埋.切片,厚5μm.染液的配制:①8.3%盐酸水溶液(HCl8.3ml、蒸馏水 91.7ml);②龙胆紫(上海试剂站)希夫氏试剂的配制同PAS方法,以龙胆紫代替碱性品红;③亚硫酸氢盐溶液(10%偏重亚硫酸钠溶液5ml、1mol/L-HCl5ml、蒸馏水90ml).染色步骤;①切片脱蜡至水—蒸馏水;②8.3%盐酸水溶液水解切片1min(微波仪5档),蒸馏水洗;③     

新生BALB/c小鼠肠道潘氏细胞的分布规律

观察BALB/c小鼠小肠潘氏细胞的分布规律。应用石蜡切片、H&E染色技术和LeicaQwin显微图像处理系统,分别对2 d、4 d、6 d、8 d、10 d BALB/c小鼠小肠内潘氏细胞的形态发育、分布规律进行观察和分析。结果发现,4日龄前的BALB/c小鼠各段小肠中肠腺发育尚不完整,未见有潘氏细胞。6日龄后,潘氏细胞开始出现,数量随日龄增加呈递增趋势增长,各日龄间差异显著(P<0.05)。BALB/c小鼠肠道潘氏细胞存在于小肠,十二指肠和空肠较少,回肠较多,各组(不同日龄/肠段)之间差异显著(P<0.05)。     

意大利工蜂咽下腺结构观察

通过研究意大利蜜蜂Apis mellifera工蜂咽下腺的结构及形态,为蜜蜂形态学和蜜蜂生理学以及王浆分泌生理提供新知识采用光学显微镜、扫描电镜、HE染色石蜡切片和透射电镜,从形态学和细胞学水平对意大利工蜂咽下腺的结构和功能做了详尽探究和分析.意大利工蜂咽下腺由多个卵圆形腺泡组成,每个腺泡的直径约为120×180 μm,腺泡之间有微气管相连,腺泡外侧有神经细胞,神经细胞的胞体直径约为12μm.每个腺泡是由多细胞构成,最外层有0.1 ～0.2 μm的结缔组织膜,内部有壁细胞、酶原细胞和王浆分泌细胞,其中王浆分泌细胞分布较多,细胞直径约为16 ～ 18 μm,细胞核直径约为6μm. 由咽下腺的形态结构和细胞类型推断,意大利工蜂咽下腺主要分泌王浆,也具有分泌消化酶的功能,同时了解到分泌消化酶和王浆的途径.     

水稻籽粒胚乳的石蜡切片方法改良及其结构发育观察

以杂交水稻保持系‘岗46B’授粉后不同天数的籽粒为材料,利用PAS反应原理,通过对传统石蜡切片技术中材料固定、染色、脱水、浸蜡等环节的改进,即采用FAA和FPA相结合方式固定材料,先用热配法席夫(Schiff)试剂进行整染,再以稀释和氨水蓝化后的埃利希氏(Ehrlich)苏木精复染,中间以70%、83%、95%质量分数梯度乙醇进行脱水和复水处理,渐进式浸蜡与把握时间等实验环节,对水稻胚乳结构发育进行观察研究,结果授粉后第2~10天籽粒胚乳的石蜡切片完整,且染色分明,结构显示完整清晰。观察发现,随着授粉后天数推移,胚乳内部逐渐由游离胚乳核期向细胞化过渡,细胞层数增加并趋向充满子房,淀粉粒开始累积,胚乳细胞进一步增大。授粉后第5~10天是胚乳细胞淀粉粒从开始到大量累积的重要时期,同时胚乳细胞向无核化发展,不同部位胚乳细胞和淀粉粒的排列分布也逐渐表现出一定的差异。表明改良后的石蜡切片方法适合于授粉后第0~10天的水稻胚乳结构发育研究。     

全自动密闭式组织脱水机在石蜡切片组织处理中的应用

全自动密闭式组织脱水机问世以来,以其安全、高效和良好的处理效果等优点,深受病理学、解剖学、动物实验和组织胚胎等技术人员的青睐。我科自2002年使用全自动密闭式组织脱水机处理组织以来,组织的处理效果明显改观,石蜡切片质量显著提高,现将应用经验简介如下。材料和方法1·材料1·1标本组织来源于我院手术的活检标本。1·2仪器和设备樱花VIP-E150型全自动密闭式组织脱水机为日本原装进口,附带不锈钢脱水篮1只,可容150个包埋盒;塑料包埋盒为国产。1·3试剂冰乙酸,甲醛原液,95%乙醇,无水乙醇,二甲苯,石蜡(58-60℃)均为国产试剂。AAF固定…     

全自动密闭式脱水机试剂更换量化处理的探讨

在蜡块制作过程中 ,为了节约试剂 ,尽量用一批制剂多做蜡块与保证切片质量是一对矛盾 ,对此本文以如何能够既保证蜡块质量 ,又能节约试剂 ,通过 15 0次实验观察 ,总结出全自动脱水机试剂更换的量化处理方案。1 材料和方法材料 :组织来源为本院外科手术标本 ,组织块的取材厚度为 2～ 3mm。脱水机型号 :英国产SHANDON牌全自动密闭式脱水机 ,浸蜡用的石蜡其溶点为 5 6～ 5 8℃[1] 。试剂菜单 :AF液 1缸 (75 %乙醇 +10 %福尔马林 ) ,80 %乙醇 1缸 ,90 %乙醇 1缸 ,95 %乙醇3缸 ,无水乙醇 2缸 ,二甲苯 2缸 ,石蜡 4缸。程序 :组织块置脱水篮 ,…     

交感神经对青年和老龄小鼠肠道上皮细胞增殖和抗氧化功能的影响

目的 探讨交感神经对青年和老龄小鼠小肠上皮细胞增殖的影响。方法 腹腔注射6-羟多巴胺(6-OHDA)阻断交感神经,用石蜡组织切片和HE染色检测绒毛长度、隐窝深度及两者比值,用免疫组织化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)在肠腺中的表达,用试剂盒检测总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)等指标。结果 化学性阻断交感神经,在3月龄和18月龄鼠中小肠绒毛长度、V/C比值、小肠肠上皮细胞PCNA表达水平均下降显著,小肠SOD、T-AOC降低,MDA升高。结论 交感神经均能促进3月龄和18月龄鼠小肠上皮细胞的增殖,其中对3月龄小鼠的作用大于18月龄小鼠。     

庭疾灶螽中肠及马氏管结构

【目的】本研究旨在以庭疾灶螽Tachycines asynamorus为例探索驼螽消化系统和排泄系统在结构上与其生活环境的适应关系。【方法】运用解剖学方法、石蜡切片技术、冰冻切片技术及超薄切片技术对庭疾灶螽中肠及马氏管的结构进行研究。【结果】庭疾灶螽中肠向前延伸出3个胃盲囊包围着前胃。中肠上皮由再生细胞、柱状上皮细胞和内分泌细胞构成,具有典型的再生细胞龛;闭合型内分泌细胞紧贴在再生细胞龛的外围,基底区聚集大量的分泌颗粒。柱状上皮细胞内聚集有2类大的分泌颗粒：线团状颗粒和电子密度很高的球状颗粒;中肠管腔内有明显的围食膜结构,中肠基底部由基膜和肌肉层组成。马氏管着生在中后肠的交界处,从横切面看马氏管管壁具有3~5个细胞,细胞近管腔端部具有大量长微绒毛,细胞质内分布着电子致密的同心圆球晶体,基底膜内折形成膜迷路。【结论】庭疾灶螽中肠柱状上皮细胞的线团状颗粒由微丝包裹;内分泌细胞由再生细胞龛中的细胞分化而来,产生内分泌颗粒并将其排到血腔;中肠基膜发达,包含微丝与复合糖成分,基膜通过对中肠上皮细胞的支撑作用为肠道蠕动提供保障。庭疾灶螽马氏管细胞中可见大量颗粒和大量同心圆球晶体,推测可能是一种储存排泄。     

几种实验动物组织石蜡制片的改进

根据多年教学经验 ,现将小鼠、大鼠、家兔等几种常见实验动物的石蜡制片的一些研究方法、出现问题及矫正方法做简要介绍。1)不同种属的动物组织 ,在脱水、透明、浸蜡时应尽量单独处理。有条件时同属的不同脏器组织最好也分批处理 ,以利于条件的掌握。2 )动物组织块较小、质地较细嫩 ,脱水时应从 5 0 %或 6 0 %乙醇较低浓度开始。据报道 ,脱水的低浓度酒精时间长短均可。低浓度酒精的时间应视材料的大小、被膜是否完整而定 ,各段时间不能操之过急 ,总的不能少于 3h。最好在 70 %酒精中过夜 ,否则在无水酒精中会引起组织骤然收缩 ,切片出现裂…     

在蛙胚切片中应用正丁醇透明和苏木精整染的方法介绍

在教学上,常用蛙卵做脊椎动物发生的观察材料。由于蛙胚切片染色方法繁琐,卵黄易破碎,往往得不到满意的切片,因此,我采用正丁醇脱水,取得较满意的效果。这种方法的优点有二:(1)能与水、酒精及石蜡互溶,故脱水之后可不经过二甲苯透明而直接进行石蜡浸透包埋。(2)脱水时很少引起组织收缩和变脆。采用苏木精-伊红整染,其特点是颜色鲜艳,无过染现象。 1.取材于3—5月到郊外池塘或稻田采集材料(蟾蜍或青蛙卵),一般在上午八时左右采集,此时的蛙胚处于囊胚期,以后各期可在双筒解剖镜下进行鉴别,选择所需的发育时期的胚胎,分别进行固定。 2.固定用Tellyesniczky氏液(重铬酸钾0.5克、冰     

念珠藻的制片方法

取材普通念珠藻(Nostoc Commune)生于潮湿的土壤或草地上,在春、夏多雨季节里很容易采到.它形似木耳,俗称“地木耳”或“地皮菜”,可食用.发状念珠藻(Nostoc flagelliforme)形如发丝,俗称发菜,是重要的食用蓝藻,可从商店购得.取其中任何一种材料泡在水中,使其胶质鞘膨胀,用小毛笔刷净泥砂杂物,剪成3毫米左右长的小块(或段).选平整的材料置于载片中央,用另一张载片将材料压薄,用棉线捆紧两张载片. 固定将捆好的两张载片投入FAA固定液中24小时,松开棉线,分开载片.由于材料本身的胶质,它能粘贴在两张或其中的一张载片上(通常两张载片各粘一部分).将此材料染色和脱水. 洗涤与初染将固定好的材料用50％酒精洗涤2—3次,每次10分钟.再经40％→30％→20％→10％酒精洗,每级10分钟.最后经蒸馏水浸洗2次,每次2分钟.媒染用4％铁明矾1小时,蒸馏水洗2次后用海氏苏木精染色1小时.蒸馏水洗去浮色,1％铁明矾分色.边分色边显微镜检,至细胞内含物呈黑色,其它部分浅灰色或无色时为止.立即倒掉分色液,蒸馏水洗2—3次后,将材料浸泡于自来水中,使其变蓝     

细鳞泥鳅味蕾的形态初步研究

一、材料与方法 本研究所用材料为细鳞泥鳅(Misgurnus mizolepis Günther.)土名为肉泥鳅。 将捕来的细鳞泥鳅先放入水族箱中生活1—2天,然后破坏脑脊髓(杀死),放入盛有生理盐水的直径为12厘米的大培养皿中,剪下口须、唇、舌、口腔顶壁和底壁、咽等部位的材料,再分别放入带标签儿的已盛好波恩式固定液的指管中固定,经8—12小时后,用50％酒精冲洗,待黄色变浅后放入70％酒精中保存。然后做石蜡切片。切片的厚度为7—8微米,用窦来飞-苏木精染色,伊红复染,使胞核呈蓝色,胞质     

广东乌龟消化道组织学观察

采用常规石蜡切片法,观察了广东乌龟的食道、胃、小肠和大肠的组织结构.结果发现,这四种器官都是由粘膜层、粘膜下层、肌层和外膜组成,各部分的差别主要在于粘膜层和肌层.食道和大肠上皮为复层柱状上皮:胃和小肠上皮为单层柱状上皮.食道粘膜上皮特化形成与呼吸有关的绒毛.胃有大量胃腺,腔面有纵行皱襞.小肠表面有大量绒毛,在绒毛中可见肠腺.大肠具粘膜皱襞和较多的杯状细胞,无绒毛,可见许多分散的淋巴小结.胃和肠道肌肉为内环外纵,内环肌较厚,外纵肌较薄.     

微波辐射加热对潘氏细胞染色的影响

潘氏细胞(Paneth Cell)是小肠腺的特征细胞,该细胞有合成分泌蛋白质的特点,其分泌颗粒含有防御素(defensin,又称隐窝素Chyntdin)、溶菌酶,释放后对肠道微生物有杀灭作用[1];同时亦有吞噬功能.潘氏细胞含有的分泌颗粒通常可用酸性染料如焰红(Phloxine)、伊红或橘黄G染色[2],其中以焰红染色效果最佳.     

广西蜘蛛抱蛋的大小孢子发生和雌雄配子体发育

对广西蜘蛛抱蛋的花做常规石蜡切片并进行观察后发现:广西蜘蛛抱蛋的花药4室,绒毡层腺质型,发育后期出现双核及多核细胞。小孢子四分体左右对称型,偶见四面体型,胞质分裂连续型。成熟花粉为2细胞。子房3室,中轴胎座。胚珠倒生,双珠被,厚珠心型。珠孔由内珠被形成。胚囊发育为变异的蓼型。     

激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA

采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因.