人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞在结构和功能上关系密切,二者的相互关系在血管舒缩和血管壁结构的调节中起重要作用。本文观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）在细胞增殖方面的相互调节作用。混合培养的ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ细胞的３Ｈ－ＴｄＲ参入明显降低（Ｐ＜０．００１,与对照组相比）。无论向培养的ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ中分别加入ＰＡＳＭ和ＰＡＥＣ的条件培养基还是二者共培养时,均发现ＰＡＥＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入明显降低,而ＰＡＳＭ的３Ｈ－ＴｄＲ明显升高（Ｐ＜０．０５,与对照组相比）。流式细胞测定也发现共培养时ＰＡＥＣ的Ｇ１期细胞增多,Ｇ２／Ｍ期细胞减少;而ＰＡＳＭ的Ｇ１期细胞减少,Ｇ２／Ｍ期细胞增多。共培养的ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ增加,ｃＧＭＰ含量降低;而ＰＡＥＣ细胞的ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量均降低（Ｐ＜０．０１,与对照组相比）。上述结果提示,ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ相互作用可能通过第二信使而调节它们本身的增殖     

赖诺普利对血管成形术后平滑肌细胞增殖影响的研究

为研究赖诺普利对血管成形术后平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的影响,用体外血管平滑肌细胞培养及氚标记胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入技术,观察了不同浓度赖诺普利（１～２０μｇ／ｍｌ）对培养的球囊血管成形术后的兔髂动脉ＳＭＣ增殖情况的影响。结果表明：加入赖诺普利后ＳＭＣ对３Ｈ－ＴｄＲ的摄取及细胞计数明显比对照组低（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,各浓度组均有作用,浓度越高作用越明显。提示赖诺普利可抑制血管成形术后平滑肌细胞的增殖,有预防血管成形术后再狭窄的作用。     

血小板生长因子(PDGF-BB)刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞DNA和蛋白质合成

应用细胞培养、３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入方法,观察血小板生长因子ＢＢ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＢＢ）对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成的影响。结果表明：（１）当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为１０ｎｇ／ｍｌ时,３Ｈ－ＴｄＲ掺入值已较对照组显著增高（６２６２．５±４１２．９ｖｓ８３３．５±１２４．０,Ｐ＜０．０５）;当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为２０ｎｇ／ｍｌ时,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值亦较对照线显著增高（１０２１２．８±６３８．３ｖｓ７３４０．３±１１９７．９,Ｐ＜０．０５）。（２）ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度在５－２５ｎｇ／ｍｌ范围内,３Ｈ－ＴｄＲ,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值与剂量直线相关（ｒＤＮＡ＝０．９７,ｒｐｒｏｔ＝０．９０Ｐ＜０．０５）。说明ＰＤＧＦ－ＢＢ刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成。     

急性冷应激对牦牛乳腺上皮细胞 HSP70 mRNA 表达的影响

本文主要研究了急性冷应激对牦牛乳腺上皮细胞热休克蛋白７０ （Heat stress protein,ＨＳＰ７０） 表达量的影响。采用实时荧光定量ＰＣＲ 技术,以急性冷刺激１０℃ 为典型研究环境,分析了ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 表达的变化规律。结果显示,乳腺上皮细胞在１０℃分别冷处理２ ｈ、４ ｈ、６ ｈ 和８ ｈ,其ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 的表达量变化均不显著（Ｐ ＞０. ０５）;分别在１０℃冷处理２ ｈ、４ ｈ、６ ｈ 和８ ｈ,再复温培养４ ｈ,ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 的表达量均极显著增加（Ｐ ＜０. ０１）,于６ ｈ 达到峰值;在１０℃先冷处理４ ｈ,然后分别复温２ ｈ、４ ｈ、６ ｈ 和８ ｈ,ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 的表达量亦均显著增加（Ｐ ＜０. ０１）,并于４ ｈ 达到峰值。结论：急性冷应激诱导牦牛乳腺上皮细胞ＨＳＰ７０ 表达量的增加不是发生在冷处理过程中,而是发生在复温过程中,并且在一定范围内随冷处理时间的增长表达量增高。     

表皮生长因子对培养的气道上皮细胞抗臭氧损伤的保护作用

本研究观察到臭氧（Ｏ３）对体外培养经３Ｈ－ＵｄＲ标记的免气道上皮细胞有明显细胞毒性作用,且损伤程度与Ｏ３作用时间呈正相关。Ｏ３暴露组细胞内丙二醛（ＭＤＡ）产生增多（Ｐ＜０．０１）,提示Ｏ３损伤细胞的机制与胞膜脂质过氧化有关。表皮生长因子（ＥＧＦ）可明显降低Ｏ３所致的３Ｈ释放率（Ｐ＜０．０１）、降低Ｏ３的细胞毒指数及细胞内ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０１）,证明ＥＧＦ对气道上皮细胞有保护作用。进一步还观察到浓度为５ｎｇ／ｍｌ的ＥＯＦ可以取消Ｏ３所引起的细胞内还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量降低（Ｐ＜０．０１）,并增加细胞内谷胱甘肽总含量（Ｐ＜０．０５）,但不能改变Ｏ３所致的氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）含量的增加（Ｐ＞０．０５）,对ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比值也无明显提高,这些都提示ＥＧＦ的细胞保护机理可能与其促进细胞内谷胱甘肽合成有关,而对ＧＳＳＧ转化为ＧＳＨ的还原过程影响不明显。     

血管平滑肌细胞增殖与Cdk抑制蛋白p27的表达

ｐ２７蛋白是细胞周期素依赖性激酶（Ｃｄｋ）抑制蛋白家族中的一种,主要对外部促进或抑制细胞增殖的信号起反应。本研究应用流式细胞仪（ＦＣＭ）双标记的方法观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）、血管加压素（ＡＶＰ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）细胞周期百分比和ｐ２７蛋白表达量的影响。静止状态培养的ＶＳＭＣｓ加入ＡｎｇⅡ,ＡＶＰ,ＰＤＧＦＢＢ后,在不同时间收集细胞,用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ,以确定细胞所处的周期。用ｐ２７蛋白的单抗和标记了ＦＩＴＣ的二抗标记细胞,通过流式细胞仪测定被激发出的荧光量来确定细胞ｐ２７蛋白表达的相对量。结果显示,ＡｎｇⅡ刺激ＶＳＭＣｓ增生,其蛋白含量增加了４３６％（Ｐ＜００１）,但不抑制ｐ２７蛋白的表达;ＡＶＰ可轻度抑制ｐ２７的表达,有轻度促进ＶＳＭＣｓ增殖和增生的作用（Ｐ＜００５）;ＰＤＧＦ明显抑制ｐ２７的表达,引起细胞增殖。本研究结果提示,ｐ２７蛋白抑制ＶＳＭＣｓ通过Ｇ１期进入Ｓ期,是抑制ＶＳＭＣｓ增殖的重要调节因子。     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互影响

血管内皮细胞和血管平滑细胞在结构和功能上关系密切,两者的相互在与血管舒缩笔血和壁结构。本文观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣｓ）和肺动平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）缺氧时在细胞增殖方面的相互影响。ＰＡＳＭＣＳ常氧条件培养基（ＣＭ）可使ＰＡＥＣＳ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低约５８％,缺氧ＣＭ对ＰＡＥＣＳ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入无明显的抑制作用;ＰＡＥＣＳ的常氧ＣＭ使ＰＡＳＭＳ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入升高约６０     

人衰老成纤维细胞经紫外线损伤后的DNA修复和细胞周期调控

 以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞（２ Ｂ Ｓ）为对象,紫外线诱导 Ｄ Ｎ Ａ 损伤后,观察细胞形态、增殖特性、细胞周期、 Ｄ Ｎ Ａ 修复变化等细胞应答以及 ｇａｄｄ１５３、ｐ２１ Ｗ Ａ Ｆ１／ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｓ Ｄ Ｉ１、ｐ５３ 等基因的转录水平的表达变化．结果显示：紫外线诱导 Ｄ Ｎ Ａ 损伤后,衰老（＞ ５５ 代）２ Ｂ Ｓ细胞形态及增殖能力的改变不如年轻细胞（＜ ３０ 代）显著;不同代龄的细胞损伤后均出现 Ｇ１ 期阻滞现象,年轻细胞 Ｇ１ 期阻滞率明显高于衰老细胞（ Ｐ＜ ００５）;衰老细胞总的修复能力较年轻细胞明显下降（ Ｐ＜ ００１）;同时,ｇａｄｄ１５３、ｐ２１、ｐ５３ 等的可诱导性均低于年轻 ２ Ｂ Ｓ细胞．由此,分别在细胞水平与基因水平反映了衰老细胞经紫外线照射损伤后的细胞应答变化与修复机能减退的关系．     

氨氯地平对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞生长的影响

本文采用自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）动脉平滑肌细胞培养,３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）和３Ｈ－亮氨酸（３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ）掺入方法,观察到用氨氯地平（Ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）作用４８小时后,与神经肽Ｙ（ＮＰＹ）组比较,其离体培养的ＳＨＲ动脉平滑肌细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量降低５０．５％,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量降低５６．５％。氨氯地平组与对照组比较其３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量分别降低５７．６％和３２．３％。用ＮＰＹ作用２４小时后,与对照组比较动脉平滑肌细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量却分别增加２０％和５４．６％。而细胞计数均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结果表明,氨氯地平能有效地抑制ＳＨＲ血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ和蛋白质合成,以及显著的抑制ＮＰＹ引起的ＶＳＭＣ的ＤＮＡ合成和蛋白质合成增加效应。提示氨氯地平在阻遏高血压致心血管壁肥厚的发生发展中起着不容忽视的作用     

热休克蛋白90对血小板源衍生因子诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究热休克蛋白90(HSP90)对血小板衍生因子(Platelet derived growth factor,PDGF)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:采用胶原酶消化法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,应用脂质体细胞转染siRNA的方法抑制HSP90的表达,定量PCR和western blot的方法检测抑制效率。利用PDGF-bb诱导刺激平滑肌细胞增殖,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞生长周期的改变。结果:平滑肌细胞中转染HSP90的siRNA后,HSP90的mRNA和蛋白水平明显降低,分别为对照组的65.3%和57.6%(P0.05);PDGF-bb刺激明显促进平滑肌细胞生长,而降低HSP90水平显著影响PDGF-bb诱导的细胞增殖(P0.05);流式细胞术检测发现降低HSP90水平引起平滑肌细胞生长停滞,分布在细胞周期G1期的细胞比例明显增多(P0.05)。结论:HSP90通过调控平滑肌细胞的生长周期参与调节细胞增殖过程。     

缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌细胞形态及增殖的影响

本实验应用形态学、免疫组化染色,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、流式细胞等技术探讨缺氧（〈１％Ｏ２和２．５％Ｏ２）对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）形态及增殖的影响。结果表明：缺氧２４ｈ使ＰＡＳＭ表型从收缩型向合成型转换,胞浆内ＳＭ－ａ ａｃｔｉｎ减少,线粒体和粗面内质网增多,缺氧４８ｈ以后线粒体肿胀,空泡化,内质网扩张,胞浆内出现髓鞘样结构。流式细胞分析显示缺氧ＰＡＳＭ Ｇ２／Ｍ期细胞比例明显增多（Ｐ〈０．００     

Exposure to modeled microgravity induces metabolic idleness in malignant human MCF-7 and normal murine VSMC cells

We investigated the effect of modeled microgravity (MMG) on normal vascular smooth muscle cells (VSMC) and neoplastic human breast cancer cells (MCF-7). In both cell types, MMG induced partial arrest in G2M and increased p14-3-3, HSP70, HSP60 and p21 expression. Cells synchronized by 24h starvation reentered the normal cycle within 24h if released in complete medium and exposed to normal gravity, but not if exposed to MMG. Similarly, MMG prevented VSMC and MCF-7 cells from overcoming growth arrest and re-synthesizing DNA. This study shows that cells adjust their metabolic rate in response to MMG.     

雌二醇对肺成纤维细胞增殖的调控

本研究观察了雌二醇（Ｅ２）对培养的人胚肺成纤维细胞增殖的直接和间接调控影响。结果显示：Ｅ２可降低肺成纤维细胞的３Ｈ－ＴｄＲ掺入量;Ｅ２与肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养４ｈ的上清液可使肺成纤维细胞的３Ｈ－ＴｄＲ掺入量显著增加;消炎痛预处理不影响Ｅ２的上述作用;Ｅ２与ＡＭ培养１８ｈ可使培养液中内皮素（ＥＴ）的含量显著升高,但培养４ｈ对ＡＭ的ＥＴ分泌的影响不显著。以上结果表明,Ｅ２对肺成纤维细胞的增殖具有直接抑制和通过ＡＭ而间接促进的双向调控作用,其作用与内源性前列腺素无关。Ｅ２间接促进成纤维细胞增殖的机制除与促进ＡＭ的ＥＴ分泌有关外还有其它细胞因子参与。本结果提示,Ｅ２参与肺间质稳态的调控     

内皮素和bFGF对MC的促增殖作用及胰岛素的协同效应

采用３Ｈ－ＴｄＲ参入法,测定碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、胰岛素和内皮素－１（ＥＴ－１）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖的影响,以及胰岛素与ｂＦＧＦ或ＥＴ－１促ＭＣ增殖的协同作用。结果表明,不同浓度的ｂＦＧＦ（５－２００ｎｇ／ｍｌ）和胰岛素（０．１－２．４Ｕ／ｍｌ）均显著升高ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入值（ｃｐｍ值）（Ｐ＜０．０１）。ＥＴ－１对ＭＣ的ｃｐｍ值的影响依剂量不同呈现两种不同的效应,在１０－９－１０－７ｍｏｌ／Ｌ时,随着浓度的升高,ＭＣ的ｃｐｍ值明显升高（Ｐ＜０．０１）,并以１０－８ｍｏｌ／Ｌ作用最强;当升高到１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＣ的ｃｐｍ值出现降低趋势。胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度ＥＴ－１（≤１０－８ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值明显高于二者单独作用之和（Ｐ＜０．０１）,与高浓度ＥＴ－１（＞１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值小于二者单独作用之和（Ｐ＞０．０５）。上述结果说明,胰岛素、ｂＦＧＦ和ＥＴ－１均能显著促进ＭＣ增殖;胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度的ＥＴ－１促ＭＣ增殖具有正协同作用,与高浓度ＥＴ－１呈现负协同作用。     

Hindlimb unloading increases muscle content of cytosolic but not nuclear Id2 and p53 proteins in young adult and aged rats.

This study tested the hypothesis that inhibitor of differentiation-2 (Id2), p53, and heat shock proteins (HSP) are responsive to suspension-induced muscle atrophy. Fourteen days of hindlimb suspension were used to unload the hindlimbs and induce atrophy in gastrocnemius muscles of young adult and aged rats. Following suspension, medial gastrocnemius muscle wet weight was reduced by approximately 30%, and the muscle wet weight normalized to the animal body weight decreased by 11 and 15% in young adult and aged animals, respectively. mRNA abundances of Id2, p53, HSP70-2, and HSP27 did not change with suspension, whereas HSP70-1 mRNA content was lower in the suspended muscle compared with the control muscle in both young adult and aged animals. Our immunoblot analyses indicated that protein expressions of HSP70 and HSP60 were not different between suspended and control muscles in both ages, whereas HSP27 protein content was increased in suspended muscle relative to control muscle only in young adult animals. Id2 and p53 protein contents were elevated in the cytosolic fraction of suspended muscle compared with the control muscle in both young and aged animals, but these changes were not found in the nuclear protein fraction. Furthermore, compared with young adult, aged muscles had a lower HSP70-1 mRNA content but higher HSP70-2 mRNA content and protein contents of Id2, p53, HSP70, and HSP27. These findings are consistent with the hypothesis that Id2 and p53 are responsive to unloading-induced muscle atrophy. Moreover, our data indicate that aging is accompanied with altered abundances of HSP70-1 and HSP70-2 mRNA, in addition to Id2, p53, HSP70, and HSP27 protein in rat gastrocnemius muscle.