戊型肝炎检测方法及疫苗研究进展

从ＨＥ及其病原戊肝病毒（ＨＥＶ）研究发现历史开始列举了ＨＥＶ当前主要研究成果。着重论述了有效的检测ＨＥＶ基因、抗原和抗体研究进展。国际上应用于临床诊断、流行病学研究的抗—ＨＥＶ诊断试剂的简况。ＨＥ疫苗的研究已进入临床前阶段,猴体实验结果显示获得高抗体滴度被动免疫可保护试验猴免于ＨＥＶ攻毒后肝炎。主动免疫显示了更完全的保护效果,双剂主动免疫既保护猴免于ＨＥＶ攻毒后肝炎又保护猴免于ＨＥＶ感染     

戊型肝炎病毒感染分子生物学检测方法研究进展

随着戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)分子克隆技术的成功建立 ,ＨＥＶ分子生物学的研究取得了极大进展 ,与之相关的ＨＥＶ检测方法也正在不断完善。该方法包括两方面 ,即采用基因工程重组抗原建立的抗体诊断方法 ,以及采用逆转录———聚合酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)建立的基因诊断方法 ,分别检测抗ＨＥＶ及ＨＥＶＲＮＡ。1　抗ＨＥＶ的检测利用体外表达的各种ＨＥＶ重组蛋白 ,已建立了多种抗ＨＥＶ检测方法 ,包括酶联免疫方法 (ＥＩＡ)和蛋白印迹技术 (ＷＢ)等用于ＨＥＶ感染的临床诊断和实验研究。第 1代抗ＨＥＶＥＩＡ检测试剂由 3块酶联反应板组成 …     

病毒性肝炎HAV，HBV，HCV，HDV和HEV重叠感染的研究

采用ＥＬＩＳＡ法检测了１０８例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血清中的五种肝炎病毒──甲型（ＨＡＶ）、乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）和成型（ＨＥＶ）肝炎病毒的标志物,并采用ＰＣＲ技术检测了患者血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ及ＨＤＶＲＮＡ。结果五种肝炎病毒重叠感染者３５例（３２．４％）,单纯ＨＢＶ感染者７３例（６７．６％）。ＨＢＶ、ＨＡＶＭ重感染率为４．６％,ＨＢＶ、ＨＣＶ二重感染率为９．２％,ＨＢＶ、ＨＤＶＭ重感染率为１４．８％,ＨＢＶ、ＨＥＶ二重感染率为１．９％,ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ三重感     

抗-HEV·IgM/IgG抗体规律的分析研究

采用病例对照研究,用ＥＬＩＳＡ方法检测抗－ＨＥＶ·ＩｇＭ／ＩｇＧ,通过滴度动态变化,进行几何平均滴度,不同病期和组别灵敏度,特异性的比较,初步确定抗－ＨＥＶ·ＩｇＭ≥１∶２００,抗－ＨＥＶ·ＩｇＧ≥１∶１００为临界值,经抗－ＨＥＶ·ＩｇＭ／ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ的评价认为可分别代表急性期和恢复期的诊断与感染标志。抗－ＨＥＶ·ＩｇＭ和抗－ＨＡＶ·ＩｇＭ双阳性血清应排除假阳性、抗－ＨＥＶ·ＩｇＧ阳性虽可持续八年其保护作用有待探讨     

人脐带动,静脉内皮细胞的异质性研究

异质性是内皮细胞重要的生物学特征之一。本文从体外培养细胞的形态、免疫细胞化学反应和脱落细胞形态等方面研究了人脐带动脉内皮细胞（ＨＵＡＥＣ）和静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的异质性。实验结果表明：１．体外培养的ＨＵＡＥＣ以多角形为主,ＨＵＶＥＣ以长３梭形为主;２．ＨＵＡＥＣ表面的ⅧＲ：Ａｇ较少,ＨＵＶＥＣ表面的ⅧＲ：Ａｇ较多;３．脱落的ＨＵＡＥＣ长而曲折,呈带形,但ＨＵＶＥＣ则短而平直,呈梭形。上述结果     

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白的研究进展

本文概述了近年来利用体外表达系统对丙肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜糖蛋白的翻译后加工、折叠、装配的研究进展。目前的研究表明：ＨＶＣＥ１、Ｅ２蛋白通过非共价键相连形成的异源二聚体代表了ＨＣＶ糖蛋白的天然构象;Ｅ１和ＥＡ２Ｃ末端的跨膜区能使其锚定于内质网;ＶＣ包膜糖蛋白在内质网中完成其加工及成熟的过程;分子伴侣及Ｅ１、Ｅ２蛋白 旁侧序列对形成天然ＨＣＶ包膜糖蛋白复合物起重要作用。     

戊肝病毒活性肽的选择,合成与应用

对戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）编码蛋白序列进行了亲水性分析及二级结构预测,选择亲水性强、具有β－转角与β－折叠的区段,采用多肽固相合成法合成了ＨＥＶ基因组３个开读框架（ＯＲＦ１,ＯＲＦ２和ＯＲＦ３）中可能的抗原表位,以免疫学方法进行鉴定并选出了分别来自ＨＥＶ３个ＯＲＦ的、具有重要生物活性与应用前景的３段肽（ＥＨ１７４、ＥＨ２６５、ＥＨ３６２）。在此基础上,进行了抗ＨＥＶＥＬＩＳＡ新型检测试剂盒的实验室研究及临床试用。结果表明,所研究的戊肝抗体检测试剂盒特异性高、临床符合性好、具有可重复性,在戊肝辅助诊断及流行病学调查中具有重要意义。     

疱疹病毒对抗病毒药物抗性的回顾

本文就单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）、水痘带状疱疹病毒（ＶＺＶ）、人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）等疱疹病毒的抗病毒药物,产生抗性的机理和抗病毒治疗的策略等方面进行了回顾。     

免疫胶体金试剂的制备及应用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒

报道了用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的方法。实验采用１０ｎｍ胶体金标记纯化兔抗鼠ＩｇＧ制备了免疫胶体金探针试剂。用本法从戊型肝炎患者粪便提取物中检出ＨＥＶ呈球形,直径３２±５ｎｍ。此方法具有快速、灵敏、直观等特点,在ＨＥＶ生物学性质研究中,有一定的应用价值。     

戊肝与丙肝病毒在献血员人群中感染状况的对比研究

采用市售试剂对武汉地区乡村献血员进行血清抗ＨＥＶ与抗ＨＣＶ检测,两者的阳性率分别为５．７４％及９．３５％。在２８８份有ＡＬＴ记录的单采浆献血员中,有近期ＡＬＴ升高史的献浆者抗ＨＥＶ及抗ＨＣＶ检出率分别为１４．０４％及１４．１８％,均显著高于无近期ＡＬＴ升高史的献浆者。对上述标本同时进行多项血清ＨＢＶ标志检测,抗ＨＥＶ阳性及抗ＨＣＶ阳性组献血员多项ＨＢＶ标志检测结果与相应阴性组比较均未见显著的差别。     

新型HCV EIA诊断试剂盒的研制

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原,以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段,已经在原核细胞中获得有效的表达。同时,相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现,由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体）,阳转率高（约９９％阳性检出率）,特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原,研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％,同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％,阳性检出率提高了约２％,３次重复性达１００％,表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％;外科类住院病人检出率约２８．８％;肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％,慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者     

丙型肝炎病毒C+E1区基因在原核细胞中的克隆与表达

将丙型肝炎病毒Ｃ＋Ｅ１区基因插入到原核高效表达载体ｐＢＶ２２１质粒中,构建了质粒ｐＢＶ２２１ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１作为表达载体,然后,将含有该质粒的宿主大肠杆菌进行升温诱导表达ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１区基因,并对表达产物进行了生物活性的检测。结果表明,插入到表达载体ｐＢＶ２２１中的ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１基因片段能够得到有效的表达,表达产物主要为非融合蛋白形式存在于细胞中,同时这种Ｃ区和Ｅ１区连接共表达的产物保持了良好的抗原活性     

以人工合成多肽为抗原的戊型肝炎病毒抗体检测方法的建立和评价

酶联法是ＨＥＶ感染的主要检测方法,多采用基因表达产物为抗原。近来由于人工合成多肽抗原克服了基因重组抗原制备复杂、非特异结构多、难以纯化的缺点,已广泛用于多种病毒感染的检测。根据已发表的ＨＥＶ氨基酸序列的保守性及亲水性等特点,设计合成了两个多肽ＥＳＰ１和ＥＳＰ２,分别位于ＯＲＦ２和ＯＲＦ３区,以此为混合抗原建立了检测ＨＥＶ抗体的间接ＥＬＬＳＡ法,与市售优质试剂比较,其阳性符合率为９７．７５％,阴性符合率为９９．４３％,总符合率为９８．８６％。该方法灵敏度高、特异性强、安全快速,是检测ＨＥＶ感染和流行病学调查的理想方法。     

戊型肝炎病人血清抗—HEV IgG与IgM和HEV RNA的动态变化

利用酶联免疫试验（ＥＩＡ）及逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测了２１０份急性非甲非乙非丙肝炎患者血清和４０例戊型肝炎（戊肝）病人系列血清。在急性非甲非乙非丙肝炎血清中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ、抗－ＨＥＶ ＩｇＭ和ＨＥＶ ＲＮＡ阳性率分别为６２．８６％、４５．２３％和４０．４８％。在戊肝系列血清检测中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ阳性率发病１个月内为９２．５％,发病２￣６个月１００％,１２个月９４．７％,     

拉萨健康藏汉族成人低氧通气反应及肺通气功能比较研究

对海拔３６５８ｍ高原（拉萨）２７名拉萨世居藏族及３０名已习服的移居汉族两组的低氧通气反应（ＨＶＲ）和肺通气功能进行了比较研究。两组的年龄、身高、体重和平时运动强度基本相同。结果显示：世居组的每分钟气量（ＶＥ）,呼吸频率、ＨＶＲ和高二氧化碳通气反应（ＨＣＶＲ）均高于移居组,两组的ＰＥＴＣＯ２及Ｓａｏ２无显著性差异;吸入高浓度Ｏ２后,世居组的ＶＥ增加,ＰＥＴＣＯ２下降,而移居组维持不变。结果表明高原世     

单纯疱疹病毒I型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达

从单纯疱疹病毒Ｉ型ＨＳＶ－１基因组中分离出其包装信号序列,与含ＨＳＶ－１复制起点及ＩＥ－６８基因启动子的ＤＮＡ序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种ＨＳＶ－１扩增子质粒载体ｐＨＳＬ,其中ＬａｃＺ基因置于ＩＥ－６８基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了ＨＳＶ－１温度敏感株ｔｓＫ株的Ｖｅｒｏ细胞,ｐＨＳＬ可在ＨＳＶ－１ｔｓＫ的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和ＨＳＶ－１     

戊型肝炎病毒实验室诊断进展及问题

戊型肝类（ＨＥ）是一种呈流行性,潜伏期短,临床表现类似甲型肝炎的,以肠道传播为主的传染病。随着分子生物学的发展,戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）亦得到了深入研究;本文着重就有关ＨＥＶ的生物学特性,实验室诊断技术进展及存在问题作一综述。     

几种抗氧化剂抑制低密度脂蛋白氧化修饰能力的比较研究

用ＦＯＸ（Ｆｅｒｒｏｕｓｉｏｎｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｆｅｒｒｉｃｉｏｎｉｎｄｉｃａｔｏｒｘｙｌｅｎｏｌｏｒａｎｇｅｆｏｒｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅｓ）法直接测定脂氢过氧化物（ＬＯＯＨ）,观察了低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰过程中ＬＯＯＨ变化的动力学,研究了抗氧化剂ｐｒｏｂｕｃｏｌ、ＢＨＴ、ＶＥ、ＶＣ和β－胡萝卜素对ＬＤＬ氧化修饰的抑制作用,并比较了它们抑制能力的大小。结果显示：ＬＤＬ氧化修饰过程中ＬＯＯＨ的变化呈现三个时相：第一为延迟期,ＬＯＯＨ几乎没有变化;第二为扩增期,ＬＯＯＨ急剧增加;第三为降解期,ＬＯＯＨ达到最大值并开始出现下降趋势。抗氧化剂可以使延迟期的时间延长,延长的时间长短与抗氧化剂的浓度成正比。以ＶＥ或ＶＣ为标准,求出不同浓度各种抗氧化剂延长延迟期的时间及其相应的ＶＥ或ＶＣ浓度,计算出其浓度与相对的ＶＥ或ＶＣ间的倍数,通过比较倍数的大小,得出其抑制ＬＤＬ氧化修饰能力的大小顺序为：ＢＨＴ＞Ｐｒｏｂｕｃｏｌ＞ＶＥ＞ＶＣ＞β－胡萝卜素。     

EHFV感染家兔后组织脏器的病毒抗原定位及其病理变化

采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）１１４株实验感染家兔,用免疫荧光法（ＩＦＡ）及ＰＡＰ双桥法对家兔各脏器组织进行病毒抗原定位,同时将各脏器石蜡切片作常规Ｈ－Ｅ染色,观察受检组织的病理变化。结果表明：家兔在感染后７－１５天中,用ＩＦＡ法在胸腺、心、肺、肝、脾、胰腺、淋巴结、脑、睾丸、卵巢、肾、大肠及小肠中均检出ＥＨＦＶ抗原。用ＰＡＰ双桥法在细胞水平进行病毒抗原定位,发现所有受检组织小血管及毛细血管内皮细胞均为ＥＨＦＶ的原始靶细胞。生殖腺实质细胞病毒抗原阳性,为ＥＨＦＶ的垂直传播提供了实验依据。从肺支气管粘膜内皮细胞、尤其是腔面的纤毛柱状上皮内检出病毒抗原。推测ＥＨＦＶ通过气溶胶造成传播可能是水平传搐的方式之一。病理学初步观察,各脏器组织细胞未发现不可逆的病理损害。     

乙肝疫苗的研究概况

我国是病毒性肝炎的高发区。肝炎病毒包括至少５种：甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）、丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）、戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）,其中尤其以乙型肝炎病毒危害最严重。在我国ＨＢＶ的携带率达１０％以上。目前对于乙型肝...