不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分含量的影响

目的:比较不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中4种活性成分含量的影响.方法:采用生晒法、烘干法、蒸制生晒法和蒸制烘干法对灰毡毛忍冬花蕾进行干燥处理.参照《中国药典》,利用高效液相色谱(HPLC)-紫外扫描(UV)法测定干燥样品中绿原酸和木犀草苷的含量;利用HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)法测定干燥样品中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量.结果:蒸制烘干法处理的灰毡毛忍冬花蕾中绿原酸含量和皂苷总量最高,分别为3.705％和11.834％,木犀草苷含量为0.103％,均高于《中国药典》对山银花和金银花指标物质含量的规定.结论:不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分的含量有较大影响,以蒸制烘干法最优.     

不同季节灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和木犀草苷含量的分析

目的：比较分析不同季节的灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和木犀草苷的含量,为综合利用茎叶资源提供参考依据.方法：采用蒸制晒干法对灰毡毛忍冬的茎叶进行干燥处理,利用超声波法提取样品中的绿原酸和木犀草苷并通过高效液相色谱法进行含量测定.结果：绿原酸和木犀草苷含量在不同季节的灰毡毛忍冬茎叶中差异明显.绿原酸含量依次为花＞叶＞茎,以秋季（11月份）叶片样品中的绿原酸含量最高（3.031％）,是花蕾中含量的96％;木犀草苷含量总体趋势为叶＞花和茎,以冬季（2月份）叶片样品中的含量最高（0.558％）,是花蕾中含量的4.6倍;二者均高于2010版《中国药典》对山银花和金银花指标物质含量的规定.结论：秋冬季节对灰毡毛忍冬进行休眠期整型修剪,副产物叶片资源丰富,药源成分充足,具有广阔的开发应用前景.     

灰毡毛忍冬LmCCoA OMT基因的全长克隆及功能初步分析

绿原酸是灰毡毛忍冬生长发育过程中产生的重要的次级代谢产物,而CCoA OMT是绿原酸合成过程中的关键基因.为进一步揭示灰毡毛忍冬LmCCoA OMT基因的功能,本研究利用RACE技术克隆LmC-CoA OMT全长基因,通过生物信息学进行分析,并在大肠杆菌中表达该蛋白.此外,通过RT-qPCR和HPLC的方法研究CCoA OMT基因表达量和绿原酸的含量之间的相关性.结果显示LmCCoA OMT基因全长1 096 bp(GenBank:MN103348),ORF 735 bp,编码245个氨基酸.系统进化树分析发现LmCCoA OMT与藤本植物牵牛花的亲缘关系最近.生物信息学分析表明LmCCoA OMT的氨基酸序列不具有跨膜结构,其蛋白三级结构主要以α-螺旋和无规卷曲的形式存在.在大肠杆菌BL21(DE3)中表达结果显示,其分子量为31.36 kD.RT-qPCR及HPLC结果表明,CCoA OMT基因在灰毡毛忍冬和金银花早期花中表达量最高,在末期表达量最低,且表达量与绿原酸含量有相关性.本研究为深入研究LmCCoA OMT基因功能及阐明灰毡毛忍冬绿原酸合成的分子机制提供了科学依据.     

HPLC-TOF/MS归属续断指纹图谱中的化学成分

目的:对续断指纹图谱进行成分归属研究,为科学评价和有效控制其质量提供依据。方法:采用HPLC-TOF/MS技术,通过正离子模式和负离子模式检测获得精确分子量,结合文献和对照品推测续断HPLC-TOF/MS指纹图谱中的化学组成。结果:采用HPLC-TOF/MS法推测了15个成分,用对照品确认了木通皂苷D、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、川续断皂苷V、川续断皂苷X、川续断皂苷VII和3-O-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元等8个成分。结论:该研究比较全面地阐明了续断的化学组成,使指纹图谱的特征性更强,为续断的鉴别与质量评定奠定了基础。     

基于形态和分子证据的大花忍冬复合群的种间关系(英文)

大花忍冬复合群主要分布在中国南部及周边地区,是忍冬属的主要疑难类群之一,包含大花忍冬、灰毡毛忍冬、细毡毛忍冬、菰腺忍冬和锈毛忍冬5种。该复合群是中国南部金银花的重要野生替代资源。本研究通过形态和生境观察、叶表皮微形态扫描和分子系统学分析相结合的方法,探讨了大花忍冬复合群的种间关系。结果表明,分子系统学方法没有解决该复合群之间的关系,仅灰毡毛忍冬的区分较为明显,基于形态学证据大致可将大花忍冬复合群分为以下3小群:菰腺忍冬以其独有的蘑菇状腺体与其他4种显著不同,毛被长度也明显长于其他种类;锈毛忍冬与大花忍冬的毛被较稀疏,但锈毛忍冬的花冠筒较短,气孔特征独特;灰毡毛忍冬与细毡毛忍冬的叶背密覆柔毛,二者的上表皮角质膜结构有差异。该复合群的物种形成和传播机制仍待深入研究。     

不同种类无机盐对灰毡毛忍冬“渝蕾1号”悬浮培养体系中细胞生长和绿原酸含量的影响

为提高灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养体系中绿原酸的含量,该研究探讨了B_5培养基中不同浓度的无机盐对灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养细胞生物量及绿原酸含量的影响,通过在悬浮培养体系中添加不同浓度的无机盐,采用重量法测定灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养细胞的生物量及采用高效液相色谱法测定绿原酸的含量。结果表明:当硝态氮和铵态氮配比与B_5培养基中硝态氮和铵态氮配比一致时,即NO_3~-/NH_4~+摩尔比值为13∶1时,培养体系有利于细胞的生长和绿原酸的积累。当KNO_3浓度为3.5 g·L~(-1)时,细胞生物量达到最大,为19.26 g·L~(-1);当KNO_3在较低浓度(0.5 g·L~(-1)和1.5 g·L~(-1))时,积累较多的绿原酸。NO_3~-的两项研究结果均与对照浓度(2.5g·L~(-1))有一定的差异。另外,对(NH_4)_2SO_4来说,在高于对照浓度0.134 g·L~(-1),即浓度为0.268 g·L~(-1)时,生物量和绿原酸含量都达到了最大。P、Ca、Mg三种矿质元素的研究结果表明,当Na H_2PO_4·2H_2O浓度为0.10 g·L~(-1)、Ca Cl_2的浓度为0.20 g·L~(-1)时,细胞的生长和绿原酸的积累均可达到最大值;而对Mg~(2+)来说,低浓度促进细胞的生长,高浓度促进绿原酸的积累。兼顾细胞生物量和绿原酸含量两个指标,需选择适中的浓度。这些结果均与对照浓度有一定的差异。这说明灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮细胞所需无机盐的浓度与B_5培养基无机盐的浓度有一定的差异,选择适宜的浓度可促进其悬浮细胞的生长及次生代谢产物绿原酸的积累。该研究结果为绿原酸的工业化生产打下了基础。     

基于指纹图谱、多指标定量和网络药理学的蓍草质量标志物预测分析

目的：采用指纹图谱和网络药理学的方法,分析预测蓍草的潜在中药质量标志物（Q-Marker）。方法：采用高效液相色谱法建立蓍草的指纹图谱,对21批蓍草进行相似度评价并对共有峰进行指认和归属,再运用网络药理学方法,构建“成分-靶点-通路”网络图,分析预测蓍草的Q-Marker,并测定其含量。结果：建立了21批蓍草的指纹图谱,相似度均大于0.910,确认了13个共有峰,通过对照品比对指认出6个色谱峰并测定其含量,6个峰分别为绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、百蕊草素Ⅱ和3,4,5-三咖啡酰奎宁酸。经网络药理学分析筛选出发挥抗炎、抗菌作用的绿原酸、百蕊草素Ⅱ和3,4,5-三咖啡酰奎宁酸3个活性成分,38个核心靶点和20条关键通路。初步预测绿原酸、百蕊草素Ⅱ和3,4,5-三咖啡酰奎宁酸可作为蓍草潜在的Q-Marker。结论：预测分析得到的蓍草QMarker,为蓍草药材质量控制提供一定参考,为后续其药效物质基础及作用机制研究奠定基础。     

浙江忍冬属植物新资料

报道了浙江忍冬科（Caprifoliaceae）忍冬属（Lonicera L.）植物分类研究的若干新发现：排除了L. macrantha在我国的分布和细毡毛忍冬（L. similis）在浙江的分布;恢复了L. guillonii的种级地位,并将异毛忍冬（L. macrantha var. heterotricha）作为其新异名,将灰毡毛忍冬（L. macranthoides）组合为其变种;描述了一新种——华大花忍冬（L. sinomacrantha）和一新变型——红花菰腺忍冬（L. hypoglauca f. pulchra）,编制了浙江产大花忍冬复合群的分类检索表。     

不同外源激素对灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生物量生长和绿原酸含量的影响

为探索外源激素对灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生长及其代谢产物绿原酸含量的影响,该研究通过在培养基中添加不同种类和浓度的外源激素,以诱导其愈伤组织的产生及增殖生长,并采用称量法和高效液相色谱法分别检测愈伤组织生物量和绿原酸含量。结果表明:不同外源激素及其组合对愈伤组织生物量和绿原酸含量的积累产生不同的影响;培养基中添加单一外源激素时,对愈伤组织生物量影响最大的为TDZ激素;和对照相比,不同浓度的TDZ均使生物量显著提高,其中0.5 mg·L-1的TDZ使生物量达最大,为0.62 g;对绿原酸积累影响的结果不太一致,除TDZ激素影响最小以外,0.5 mg·L-1的NAA使愈伤组织中的绿原酸含量积累最多,为11.18 mg·g-1;外源激素组合中,含有TDZ激素的组合生物量偏高,但绿原酸含量偏低,这与单一外源激素的结果一致。MS+0.5 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-12,4-D培养基使愈伤组织中绿原酸含量积累较多,为15.53 mg·g-1,且生物量达最高,为0.65 g,因此该激素组合为该研究最适培养基组合。通过筛选适宜的外源激素及其组合能促进灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生物量的提高和次生代谢产物绿原酸的积累。研究结果对从灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织中获得大量的绿原酸提供了重要依据。     

基于HPLC指纹图谱及网络药理学的杜仲质量标志物预测分析

通过建立杜仲不同部位HPLC指纹图谱分析方法,结合网络药理学预测杜仲潜在质量标志物。基于中药质量标志物(Q-Marker)的理论依据,结合指纹图谱和网络药理学对杜仲Q-Marker进行初步预测分析,对63批杜仲不同部位样品进行相似度评价,同时分别进行主成分分析(PCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA);通过网络药理学筛选杜仲相关成分的靶点和通路,构建“成分-靶点-通路”网络图,预测杜仲的Q-Marker。本研究建立了63批杜仲不同部位的指纹图谱,相似度均大于0.900,经筛选得到8个化合物,173个靶点,包括PIK3R1、HRAS、AKT1、EGFR、SRC等11个核心靶点,涉及氨代谢、癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、癌症蛋白聚糖、PI3K-Akt信号通路、卵巢类固醇生成等主要通路,并构建成分-靶点-通路图。预测绿原酸、芦丁、京尼平苷为杜仲叶潜在Q-Marker,桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷为杜仲皮潜在Q-Marker,京尼平苷酸、京尼平苷、桃叶珊瑚苷为杜仲雄花潜在Q-Marker,将绿原酸、京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷为杜仲果荚潜在Q-Marker。     

灰毡毛忍冬次皂苷乙抑制白血病细胞HL-60的增殖及其机制研究

研究了灰毡毛忍冬次皂苷乙(MB)在体外对白血病细胞HL-60和结肠癌细胞LOVO增殖的抑制作用,并初步探讨其分子机制。采用MTT法检测MB的增殖抑制作用;利用RT2ProfilerTMPCR Array芯片实时定量PCR扩增肿瘤发生中84个关键基因。结果表明MB对两种肿瘤细胞生长均有抑制作用,且对HL-60效果更好。以HL-60作为细胞模型,总共发现差异基因20个,其中上调基因14个,下调基因6个,主要作用是阻滞细胞周期和降低细胞侵袭转移。     

基于16S rRNA基因测序研究金银花和山银花对急性肺损伤大鼠肠道菌群的影响

目的研究金银花(忍冬)和山银花(灰毡毛忍冬和黄褐毛忍冬)对急性肺损伤(ALI)大鼠肠道菌群的影响。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、忍冬组、灰毡毛组和黄褐毛组,每组10只。灌胃给药5 d后,除正常组外其余组大鼠均腹腔注射LPS,建立ALI模型。检测大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,HE染色观察肺脏组织病理学变化,利用Illumina MiSeq测序平台对大鼠粪便样本进行16S rRNA基因测序。结果与正常组相比,模型组大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高(均P0.05),组织切片显示肺组织结构发生改变,提示造模成功;与模型组相比,忍冬组和黄褐毛组大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量降低(均P0.05),灰毡毛组对ALI改善不明显(P0.05)。Alpha多样性显示,与模型组比较,除灰毡毛组外均能下调急性炎症引起的菌群丰度和多样性的增加。利用LEfSe分析挖掘差异菌属,与正常组相比,模型组大鼠肠道志贺菌属、Turicibacter、变形杆菌属丰度增加,Adlercreutzia丰度减少。忍冬可降低变形杆菌属丰度,增加阿克曼菌属、双歧杆菌属、拟杆菌属、Adlercreutzia等的丰度;黄褐毛忍冬使脱硫弧菌属丰度减少,拟杆菌属、阿克曼菌属、瘤胃球菌属等丰度增加。由菌群与炎症因子的关联性分析看出,志贺菌属、脱硫弧菌属、梭菌属与IL-1β、IL-6和TNF-α的含量呈正相关,阿克曼菌属、瘤胃菌属、双歧杆菌属与IL-1β、IL-6和TNF-α的含量呈负相关。结论研究表明忍冬和黄褐毛忍冬可能通过调节肠道菌群结构,影响炎症因子水平而对急性肺损伤有一定的预防作用。     

黄褐毛忍冬生药学鉴定研究

黄褐毛忍冬具有消炎、抗菌、免疫调节等多种功效,但容易与忍冬属其他物种混淆,通过生药学研究将为黄褐毛忍冬的鉴定工作和药材标准的制定提供科学依据。该文采用植物学鉴定、显微镜观察、薄层色谱鉴定和分子鉴定的方法从植物学性状、药材显微特征、薄层色谱和ITS(internal transcribed spacer)序列特征等方面对黄褐毛忍冬进行了专属性特征鉴定。结果表明：(1)黄褐毛忍冬花朵横切面分泌细胞较多,花瓣外表面有黄褐色腺毛;花冠表皮上层细胞为多角形,蚌形花粉囊对开,花粉粒形状规则,有三角形和卵圆形两种,油室椭圆形。(2)粉末显微检测发现中柱鞘纤维呈短棱形;木栓细胞棱角明显,呈浅黄色;木纤维呈粗短的棱形,偶见有弯曲;网纹导管较多,细胞腔密布草酸钙方晶。(3)薄层色谱显示黄褐毛忍冬花中三柰酚含量较高,三柰酚可作为黄褐毛忍冬的检视成分。(4)基于ITS序列系统聚类结果显示,ITS序列可以作为DNA条形码将黄褐毛忍冬、灰毡毛忍冬、华南忍冬和金银花准确地区分。上述结果表明黄褐毛忍冬生药学特征明显,该研究为黄褐毛忍冬药材鉴定、成分分析和质量标准制定提供了参考。     

忍冬属植物开花过程中绿原酸类化合物含量的变化

忍冬是中国传统中药材金银花的药源植物。采用高效液相色谱—光电二极管阵列检测器联用技术(HPLC-PAD)和高效液相色谱—电喷雾离子化—多级质谱联用技术(HPLC-ESI-MSn)对忍冬和4种同属植物在开花不同阶段中绿原酸类化合物进行了定性和定量分析,以明确忍冬属植物花的利用价值及其最佳采收期。结果发现:4种忍冬属植物花蕾及开放花朵中均含有新绿原酸、绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸A和一种异绿原酸的异构体;绿原酸和总绿原酸在花蕾中的含量高于开放花朵,但贯月忍冬变化不显著;火焰忍冬、贯月忍冬、台尔曼忍冬中绿原酸和总绿原酸的含量在花蕾膨大期(大白期)和初花期(银花期)都高于忍冬,而格雷姆忍冬和忍冬差异不显著,研究表明,4种忍冬属植物花及花蕾都具有较高的开发利用价值。     

毛药忍冬花蕾抗氧化活性部位化学成分研究

毛药忍冬(Lonicera serreana)为忍冬属(Lonicera)植物,其花和果实入药,具有清热解毒、凉散风热之功效,但至今缺乏系统化学成分及药理活性研究。为了寻找毛药忍冬中天然抗氧化活性成分,进一步开发利用忍冬属药用植物资源,该研究以DPPH自由基清除法为活性指导,首次对毛药忍冬干燥花蕾75%乙醇提取物的不同极性萃取部位进行抗氧化活性测试,结果发现乙酸乙酯萃取物表现出最强的抗氧化活性(平均清除率为89.45%)。进一步应用现代色谱手段(硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等),从毛药忍冬花蕾的乙酸乙酯萃取物中分离单体化合物,运用现代光谱分析技术(MS、1 H-NMR、13 C-NMR、COSY、HSQC、HMBC、ROESY),并结合文献数据鉴定化合物的化学结构。结果表明:从毛药忍冬干燥花蕾75%乙醇提取物中共分离得到9个化合物,分别鉴定为4个酚酸类化合物:绿原酸(1)、绿原酸甲酯(2)、绿原酸乙酯(3)、咖啡酸(4);4个黄酮类化合物:木犀草素(5)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、槲皮素(7)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(8);1个甾醇类化合物:β-谷甾醇(9)。所有化合物均为从毛药忍冬花蕾中首次分离得到。研究结果可为抗氧化类相关产品的开发提供科学依据。     

基于网络药理学和指纹图谱的一枝蒿抗乙肝病毒质量标志物预测分析CSCD

利用网络药理学和指纹图谱预测分析一枝蒿Artemisia rupestris L.抗乙肝病毒的潜在质量标志物(Q-Marker)。采用网络药理学方法构建“活性成分-靶点-通路”网络,筛选和分析一枝蒿的相关靶点和通路,采用高效液相色谱法建立一枝蒿药材指纹图谱,用正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选组间差异性成分,综合预测一枝蒿Q-Marker。结果表明,网络药理学分析得到潜在的15个活性成分,18批一枝蒿HPLC指纹图谱共有18个共有峰,通过对照品比对指认了8个共有峰,分别为绿原酸、芦丁、蒙花苷、木犀草素、一枝蒿酮酸、芹菜素、蔓荆子黄素和洋艾素,综合分析初步预测一枝蒿酮酸、蒙花苷、芹菜素和木犀草素为一枝蒿潜在的Q-marker。一枝蒿Q-Marker预测分析为药材质量评价提供参考,为阐明其药效物质基础及作用机制奠定基础。     

日粮添加灰毡毛忍冬藤叶粉对肥育猪血清生化指标与脂肪代谢的影响

本试验旨在研究日粮中添加灰毡毛忍冬藤叶粉对肥育猪血清生化、肝脏中脂肪酸组成以及脂肪代谢相关基因表达的影响。选用同栏舍、同批次的二元杂交(长×大)健康阉公猪(55±1.03 kg)16栏,按照体重相近原则随机分成2个处理组,即基础日粮(对照组)、基础日粮+1%灰毡毛忍冬藤叶粉,每组8个重复,每个重复10头。试验期为60 d。结果表明:1)与对照组相比,日粮添加灰毡毛忍冬藤叶粉降低了血清中总胆固醇(TC)(P0.05),而显著提高C型反应蛋白(CRP)含量(P0.05);2)与对照组相比,日粮中添加灰毡毛忍冬藤叶粉使肝脏中饱和脂肪酸(SFA)中c13:0和单不饱和脂肪酸(MUFA)中的c14:1含量均显著降低(P0.05);3)与对照组相比,日粮中添加灰毡毛忍冬藤叶粉上调了肝脏中甘油三酯脂肪酶(ATGL)和肉碱棕榈酰基转移酶1(CPT1A)的基因表达量(P0.05);而下调了脂肪合成酶(FAS)的基因表达量(P0.10)。综上所述,日粮中添加灰毡毛忍冬藤叶粉能有效降低肥育猪血液中胆固醇和甘油三酯的含量,可能通过调控脂肪代谢基因ATGL、CPT1和FAS的表达,进而调控育肥猪肝脏的脂肪代谢。     

忍冬不同药用部位活性成分的提取及含量分析

以河南封丘忍冬基地所产忍冬整株生药为研究对象,对比不同提取方法对忍冬各部位中活性成分含量大小的影响。用加热回流提取法、索氏提取法和超声波提取法分别对忍冬花蕾、叶、藤和根部中的活性成分进行提取,以绿原酸(CHA)、总黄酮作为指标成分,用薄层色谱法(TLC)、紫外色谱法(UV)和高效液相色谱法(HPLC)测定其含量。结果发现:与其他2种方法相比,用索氏提取法提取的有效成分最高,忍冬花蕾、叶、藤和根部中绿原酸质量分数分别为4.7%、3.0%、3.2%和2.1%,总黄酮的质量分数分别为6.9%、9.2%、3.6%和1.9%。提取效率从低到高分别是乙醇回流提取法、超声提取法和索氏提取法。3种提取方法以忍冬的花蕾、叶、藤、根部的粗提物中都检测到了绿原酸。绿原酸的含量从高到低为花蕾、叶、藤和根部;总黄酮的含量从高到低为叶、花蕾、藤和根部。本研究不仅通过对比得出了最优的提取方法,还为整株忍冬的综合开发利用提供了理论基础。     

缘毛紫菀中的4个三萜皂苷

利用溶剂萃取,大孔树脂、硅胶和聚酰胺的色谱法,对缘毛紫菀的正丁醇萃取物的化学成分进行了研究,从中分离得到4个三萜皂苷,经1H-NMR、13C-NMR等现代波谱技术及化学方法分别鉴定为续断皂苷B(1)、臭瓜皂苷A(2)、三褶脉紫菀皂苷A(3)和东风菜皂苷A4(4)。化合物1为首次从该属植物中得到,化合物2、3和4为首次从缘毛紫菀中得到。     

超声辅助索氏提取忍冬果实中绿原酸的工艺优化

利用超声辅助索氏提取的方法从忍冬果实中提取绿原酸。单因素和正交试验表明,影响绿原酸提取率的主次顺序为:超声温度>乙醇浓度>超声时间>索氏提取时间>液料比;提取的最佳条件为:超声温度60℃,超声时间40min,乙醇浓度70%,液料比(mL∶g)30∶1,索氏提取时间2.5h。忍冬果实中绿原酸的提取率为2.95%;柱色谱分离纯化后的绿原酸红外谱图和标准品的红外谱图基本一致。本研究表明,超声辅助索氏提取忍冬果实中绿原酸的方法,缩短了提取时间,绿原酸提取率高。对忍冬果实的开发利用具有重要的指导意义。