L,D-转肽酶LdtMt2-厄他培南加合物的新状态I-plus结构（英文）

具有多重耐药性和广泛耐药性的结核分枝杆菌菌株正在全球范围内传播,因此迫切需要新的抗结核药物.结核分枝杆菌的L,D-转肽酶LdtMt2直接参与肽聚糖的形成、细菌毒性和β-内酰胺抗性.该酶是潜在的抗结核靶标,可以被碳青霉烯类抗生素抑制,碳青霉烯类抗生素是FDA批准的用于治疗肺结核的药物.据报道,LdtMt2与碳青霉烯类抗生素(如厄他培南、亚胺培南和美洛培南)相互作用时,存在两种不同的中间状态,即状态Ⅰ和Ⅱ.状态Ⅰ被认为是初始加合物形成状态,而状态Ⅱ被认为是稳定的蛋白质-配体相互作用状态,并伴有碳青霉烯类抗生素和蛋白质的局部构象排列.本文报告了一个LdMt2-ertapenem新中间状态Ⅰ-plus,具有与状态Ⅱ相同的碳青霉烯类抗生素构象和与状态Ⅰ相似的局部蛋白质构象.该新状态是从状态Ⅰ转变为状态Ⅱ的中间状态,构象变化发生在厄他培南分子而不是蛋白质.我们的工作有助于阐明碳青霉烯类抗生素对LdtMt2作用后发生的变化,并与其他报道的中间状态一起揭示L,D-转肽酶如何与碳青霉烯类抗生素相互作用.     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药相关基因的筛选

为了在基因组水平筛选获得铜绿假单胞菌PAO1对碳青霉烯类抗生素耐药相关基因,本研究通过构建PAO1转座突变体文库、筛选对亚胺培南、美罗培南和比亚培南耐药及敏感突变株;通过随机PCR、核苷酸测序及序列比对的手段,确定了突变体中转座子的插入位点及其破坏的基因,获得了48个PAO1中对碳青霉烯类抗生素耐药和敏感相关的基因,其中27个基因突变后表现为耐药性增强,21个基因突变后表现为药物敏感性增强.本实验筛选获得的48个基因中有5个与Alvarez-Ortega和Dotsch等人筛选的基因重复.通过对PA0011,PA0667及PA3901进行基因敲除及遗传互补,进一步确证这3个基因均与PAO1对碳青霉烯类的耐药性相关.本次筛选发现了38个新的与碳青霉烯类耐药相关的基因,其中包括13个class4类基因.对这些新基因的进一步研究,不仅有利于全面了解铜绿假单胞菌的耐药机制及其调控网络,而且有利于药物作用靶点的发现,为有效治疗铜绿假单胞菌的感染提供新思路.     

深圳地区耐亚胺培南临床菌株耐药机制及可移动基因元件分析

目的了解深圳地区耐亚胺培南临床菌株的分布及携带碳青霉烯酶基因的情况,并检测其携带的可移动基因元件。方法 2014—2016年中山大学附属第八医院(深圳)送检标本中分离耐亚胺培南菌株96株,参照美国CLSI的M100S25标准进行药敏分析;采用Carba NP-d试验检测碳青霉烯酶表型;PCR检测碳青霉烯酶基因及可移动基因元件I类整合子、插入序列共同区(Insertion sequence common region,ISCR),对肠杆菌科加测质粒复制子类型。结果 96株耐亚胺培南临床菌株对多种临床常用抗菌药物均耐药;其中52株碳青霉烯酶表型阳性;68株携带碳青霉烯酶基因,其中61株携带D类碳青霉烯酶基因,3株携带bla_(VIM),2株携带blaKPC,1株携带bla_(IMP),1株携带bla_(NDM-1);I类整合子检出率为69.8%,其可变区携带有耐药相关基因盒aad A1、aac A4、dfr A12、aad A5、dfr A17和未知功能的orf F,未发现碳青霉烯是耐药基因;ISCR1检出率为16.7%;肠杆菌科菌株64.3%携带质粒,以Inc F型为主。结论深圳地区耐亚胺培南临床菌株具有多重耐药表型,绝大多数产碳青霉烯酶,碳青霉烯酶基因多存在于细菌染色体上,这类菌株同时携带多种可移动的基因元件及耐药基因,因此,其耐药性具有稳定遗传和水平播散的能力,应密切关注。     

宁波地区肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测研究

目的对宁波地区耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因进行研究了解。方法收集2010年1月至11月耐亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)或厄他培南(ETP)的肠杆菌科菌株进行Hodge试验确认,对于阳性试验菌株PCR同时检测blaKPC、blaNDM-1、blaIMI-1、blaGES、blaSME、blaNmcA和blaSHV-387种基因。结果共收集到肠杆菌科细菌256株,其中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌16株,占6.1%;采用改良Hodge试验确认阳性10株,占62.5%株。PCR检测显示10株均携带有blaKPC,其中肺炎克雷伯菌6株,产气肠杆菌2株,阴沟肠杆菌2株。结论宁波地区产blaKPC型碳青霉烯酶是肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类药物的关键因素,其编码基因位于可转移质粒进行传播使得目前的耐药情况越来越严峻。     

一株洛菲不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究

目的研究洛菲不动杆菌对亚胺培南、美洛培南耐药的分子机制。方法K-B纸片琼脂扩散法检测洛菲不动杆菌B69对头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、阿米卡星的耐药性,琼脂对倍稀释法检测B69对亚胺培南、美洛培南的最低抑菌浓度;PCR扩增OXA、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因,测序确定耐药基因型别;粗提酶水解亚胺培南纸片试验检测酶活性。结果洛菲不动杆菌B69具有多重耐药性;PCR扩增IMP基因阳性,经测序为IMP-8;粗提酶水解亚胺培南。结论产IMP-8型金属β-内酰胺酶是洛菲不动杆菌B69对碳青霉烯耐药的重要机制。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌（Pa）是临床最常见的条件致病菌,尤其是在医院获得性感染中占有非常重要的地位,但近年来随着碳青霉烯类抗生素的广泛应用,耐碳青霉烯类的铜绿假单胞菌株逐渐增多。据拉丁美洲抗生素监测组资料显示,亚胺培南的敏感性由1997年的77．1％降至2001年的62．2％,美罗培南由83．0％降至64．4％。PATZER等报道显示,1986—1992年临床分离的Pa菌株中耐亚胺培南株仅为1．8％,1994年至1996年耐亚胺培南株为2．6％,     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药机制.方法 收集2008年11月至2009年4月我院临床分离的铜绿假单胞菌31株,根据药敏结果分为碳青霉烯类耐药组(21株)和碳青霉烯类敏感组(10株).另设1株标准株ATCC 27853,用亚胺培南-EDTA(乙二胺四乙酸)抑制试验检测菌株是否产生金屑酶,采用PCR法检测各菌株的外膜孔道蛋白oprD2基因,探讨铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制.结果 21株耐药株有7株产生金属酶;21株耐药株经oprD2基因扩增,15株阴性,6株阳性,10株敏感株全部阳性.统计学检验结果表明,碳青霉烯类耐药组与敏感组oprD2基因阳性率的差异有极显著性(P＜0.01).结论 oprD2基因缺失和金属酶是本院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制.     

厄他培南不敏感大肠埃希菌耐药性及同源性分析

目的探讨临床分离大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及流行情况,为临床用药和院内感染监控提供依据。方法收集2012年8月至2013年7月温州医科大学附属第二医院厄他培南不敏感的大肠埃希菌10株,采用VITEK Compact2全自动微生物分析仪检测18种常用抗菌药物的MIC值;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR扩增包括碳青霉烯酶基因在内的多种B．内酰胺酶基因;应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性。结果分离菌株来自不同病区无聚集现象,标本来源以尿液为主;菌株对广谱青霉素、三代、四代头孢菌素、氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药严重,对氨基糖苷类抗生素较为敏感;PCR扩增几乎所有菌株携带ESBL基因,只有一株除外,其中主要是blarsm和、blactx-mo3株blaNOM-1基因阳性,未检出其他碳青霉烯酶基因;脉冲场凝胶电泳分析表明,菌株之间没有克隆关系。结论该院分离10株大肠埃希菌对碳青霉烯类耐药主要是存在NDM-1金属酶联合ESBL,菌株间未发现克隆传播。     

亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌碳青霉烯酶基因检测

为了解亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌碳青霉烯酶的主要基因型及其流行情况,收集哈尔滨医科大学附属第一医院临床分离出的亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌24株,采用Vitek-2 Compact进行细菌鉴定、药敏试验,聚合酶链反应（PCR）扩增,DNA测序确定菌株产碳青霉烯酶基因型情况。结果显示,24株阴沟肠杆菌均表现为多重耐药,20株菌扩增出KPC-2条带,经测序证实为KPC-2型碳青霉烯酶基因。该院亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶的主要基因型别为KPC-2型,临床与实验室应加强监测和控制。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测

摘要：目的 了解余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因类型。方法 收集2014年3月至12月耐亚胺培南和厄他培南的肠杆菌科细菌18株,进行Hodge试验确认。对于阳性试验菌株采用PCR法检测blaKPC、blaNDM-1、blaMH、blaGES、blaSME、blaNmcA和blaSHV-387种基因。结果 18株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌经改良Hodge试验确认阳性11株,占61.1%。经PCR检测显示11株均携带有blaKPC基因,其中肺炎克雷伯菌6株,大肠埃希菌3株,阴沟肠杆菌2株。结论 余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是blaKPC型碳青霉烯酶。     

近三年产气肠杆菌临床感染情况分析

目的监测嵊州市人民医院近三年产气肠杆菌对常用抗生素耐药情况。方法对嵊州市人民医院2013年至2015年间收集的产气肠杆菌临床科室分布情况进行统计,并做临床常用抗生素耐药性分析,用WHONET 5.4软件进行统计学分析。结果分离得到的产气肠杆菌主要来源于神经外科、重症医学科和呼吸内科的痰液和尿液标本。药敏结果显示其对第一、二代头孢类抗生素耐药率普遍较高:对头孢唑啉几乎全耐药,对头孢呋辛耐药率约为55%;第四代的头孢吡肟能明显抑制产气肠杆菌生长,2013年到2015年对头孢吡肟耐药率分别为8.18%、9.14%和10.74%;对氨基糖苷类抗生素庆大霉素和丁胺卡那,以及碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南具有很高的敏感性。结论嵊州市人民医院院感科近年间通过对产气肠杆菌临床用药的合理监测,及时向临床医生反馈微生物实验室的耐药结果,避免了抗生素滥用,使得其对抗生素耐药率未出现明显提高。氨基糖苷类抗生素和碳青霉烯类抗生素对其仍具有很高的疗效,应继续通过药敏试验加强对其耐药性监测,指导临床合理用药。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌医院获得性肺炎的危险因素及耐药性分析

【摘 要】 目的 探讨浙江大学附属第一医院亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌（IRAB）引起医院获得性肺炎（HAP）的危险因素及预后，并了解该院IRAB的耐药情况。方法 回顾性分析该院2011年1月至2012年12月收治的201例鲍曼不动杆菌医院获得性肺炎患者的临床资料，其中IRAB组155例，亚胺培南敏感（ISAB）组46例，两组间采取单因素分析及多因素Logistic回归分析，分析IRAB HAP发生的危险因素，并分析IRAB对其他16种抗菌药物的耐药情况，比较两组患者30天病死率。结果 单因素分析发现：入住ICU、昏迷、气管插管/切开、机械通气、留置胃管、糖皮质激素使用≥1周、2种及以上抗生素联用、分离出AB前28天内碳青霉烯类抗生素使用、低白蛋白血症、入院时APACHE II评分≥20分与IRAB HAP发生显著相关，多因素Logistic回归分析发现：分离出AB前28天内碳青霉烯类抗生素使用、入院时APACHE II评分≥20分是IRAB HAP发生的独立危险因素；而IRAB仅对阿米卡星耐药率较低（38.7%），对头孢哌酮舒巴坦耐药率高达64.5%，且对比ISAB，IRAB对大部分抗菌药物耐药率均明显上升，IRAB组患者死亡率明显上升。结论 分离出AB前28天内碳青霉烯类抗生素使用、入院时APACHE II评分≥20分是IRAB HAP发生的危险因素，IRAB耐药情况极其严重，均为多重耐药菌株，IRAB HAP患者预后差，死亡率高。     

上海口岸输入性传染性肺结核病患者中结核分枝杆菌北京型特征及耐药性分析

本研究旨在了解上海口岸输入性传染性肺结核病患者中结核分枝杆菌北京型特征及其对一线抗结核药物的耐药情况,从而正确评估输入性结核病给上海地区带来的公共卫生危害,同时为地区传染性结核病防治策略的制定提供依据。针对2009年1月～2013年5月上海口岸入境体检人员中胸部影像学诊断疑似活动性肺结核病的人群,采集其连续3 d的晨痰分离培养结核分枝杆菌,用MGIT960培养法分析其对抗结核药物（链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺）的耐药情况,用目标缺失多重聚合酶链反应（DTM-PCR ）进行结核分枝杆菌北京型分子分型,同时采集其人口学资料。期间共监测到入境外籍疑似活动性肺结核病者193例,其中50例痰液中分离培养到结核分枝杆菌,菌培阳率为25．9％,与我国结核病普查工作中活动性肺结核病菌培阳率（25．9％）相同。分离培养并成功传代、分型的40株结核分枝杆菌中,北京型占57．5％（23／40）,显著低于同期上海口岸出境人群中的90．2％（37／41）。输入性结核分枝杆菌北京型主要来自东南亚地区（71．4％,5／7）和西太平洋地区（57．1％,16／28）。一线5种抗结核药物的耐药性检测结果显示,输入性结核分枝杆菌北京型的总耐药率为30．4％（7／23）,接近上海口岸出境人群的34．1％。输入性耐多药菌株占2．4％（1／42）,分子分型结果显示为非北京型。输入性传染性肺结核病对吡嗪酰胺的耐药率为16．7％,显著高于上海口岸出境人群的2．4％。结果提示,上海口岸输入性肺结核病患者中结核分枝杆菌北京型所占比例显著低于同期出境人群,未发现与性别和年龄相关,未发现输入性结核分枝杆菌北京型对抗结核药物耐药性的显著变化。输入性耐药性结核病带来的公共卫生危害不容忽视,在直接督导下的短程化疗（DOTS）方案中需考虑其高吡嗪酰胺耐药特征。在口岸公共卫生安全风险评估中,需重视输入性结核分枝杆菌北京型与本地流行株的差异。     

以结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶为靶点的抗结核药物筛选及其与D-环丝氨酸的共结晶

【目的】阐释结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶原有抑制剂D-环丝氨酸的作用机制,建立丙氨酸消旋酶抑制剂的高通量筛选模型,并用此模型筛选到新的抑制剂分子。【方法】将结核分枝杆菌中丙氨酸消旋酶基因克隆到pET-28a表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中得到可溶性的大量表达。表达后的蛋白质通过镍离子亲和层析和阴离子交换层析得到纯化,一方面将纯化后的蛋白和D-环丝氨酸共结晶以解析其抑制剂作用的分子机制。另一方面建立并优化丙氨酸消旋酶抑制剂的高通量筛选体系,用D-环丝氨酸验证体系的可行性并用该体系筛选本实验室药物库中的384种小分子片段、792种化合物及2 200种中药样品。【结果】得到的共晶晶体衍射能力2.50?,晶体空间群为P41212,晶胞参数a=b=163.92?,c=57.44?。结构分析表明,D-环丝氨酸进入活性位点之后与磷酸吡哆醛相互作用形成磷酸吡哆胺,使得磷酸吡哆醛的C4?原子与K42之间的相互作用被破坏,从而改变了结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶的活性中心氢键网络。同时经D-环丝氨酸验证建立的抑制剂筛选体系可行,获得阳性化合物分子2个。【结论】依据我们所建立的高通量筛选体系可以有效地为结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶筛选到可信的抑制剂分子。     

426株鲍曼不动杆菌的耐药性分析与OXA-23型碳青霉烯酶检测

目的 了解暨南大学附属第一医院2009年至2011年鲍曼不动杆菌的分布特点和耐药状况,为临床合理使用抗生素提供依据,同时研究广州地区亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中OXA-23型碳青霉烯酶的分子流行病学特征.方法 利用梅里埃VITEK-2 Compact微生物分析仪鉴定细菌,K-B法进行药敏试验,采用WHONET 5.6软件统计分析药敏结果,PCR检测OXA-23型碳青霉烯酶的编码基因.结果 2009年至2011年临床分离出426株鲍曼不动杆菌,主要分离自呼吸科病房(119株,占27.9％)和ICU病房(107株,占25.1％),标本类型以痰液为主(361株,占84.7％),鲍曼不动杆菌对12种抗生素的耐药率总体呈逐年上升趋势,对亚胺培南的耐药率从13.2％上升到39.3％,在124株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中PCR检出98株OXA-23型碳青霉烯酶阳性菌株.结论 鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药性逐年增强,产OXA-23型碳青霉烯酶是其对亚胺培南耐药的主要机制之一.     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测

目的了解余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因类型。方法收集2014年3月至12月耐亚胺培南和厄他培南的肠杆菌科细菌18株,进行Hodge试验确认。对于阳性试验菌株采用PCR法检测bla_(KPC)、bla_(NDM-1)、bla_(MH)、bla_(GES)、bla_(SME)、bla_(NmcA)和bla_(SHV-38)七种基因。结果 18株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌经改良Hodge试验确认阳性11株,占61.1%。经PCR检测显示11株均携带有bla_(KPC)基因,其中肺炎克雷伯菌6株,大肠埃希菌3株,阴沟肠杆菌2株。结论余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是bla_(KPC)型碳青霉烯酶。     

铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药机制

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是医院内感染常见的条件致病菌,其耐药性日益严重,经常仅对碳青霉烯类抗菌药物(如亚胺培南、美洛培南、伊米培南和帕尼培南等)敏感.然而近年来,国内、外文献报道PA对碳青霉烯类抗菌药物耐药(RCPA)呈逐渐上升趋势,这些耐药菌同时还对氟喹诺酮类、氨基糖苷类等其他类型的多种抗菌药物耐药,成为临床治疗的难题.在北美、南美、欧洲和澳大利亚进行的统计显示PA对美罗培南耐药率为75.4%,其他地区的耐药率在62%～70%[1].     

结核分枝杆菌三种耐药基因的检测方法

建立3种结核分枝杆菌耐药基因的检测方法,探讨耐药基因突变与耐药性的关系。将58株临床分离株均做聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR—SSCP)和传统药物敏感试验。结果表明,结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药水平有密切联系,绝大多数结核分枝杆菌耐药基因突变发生在高耐药株,少部分在低耐药株发生基因突变。     

2014—2017年湘潭市第一人民医院临床分离肺炎克雷伯菌耐药性变迁

摘要：目的 了解2014—2017年湘潭市第一人民医院临床分离肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药性变迁。方法 采用VITEK 2 Compact微生物分析仪对细菌进行鉴定和药敏试验,K-B法为补充,对湘潭市第一人民医院2014—2017年肺炎克雷伯菌分布与耐药性进行回顾性分析。结果 肺炎克雷伯菌对头孢唑啉林（>30%）耐药率一直偏高,对哌拉西林/他唑巴坦（2.9%~14.1%）、头孢哌酮/舒巴坦（3.6%~16.8%）、头孢他啶（13.2%~25.8%）、头孢吡肟（8.6%~19.8%）、头孢曲松（27.8%~35.0%）、头孢替坦（2.0%~20.8%）以及碳青霉烯类耐药率有明显上升,尤其是碳青霉烯类抗生素四年间上升了约5倍,而亚胺培南（1.8%~11.1%）、美罗培南（2.4%-11.9%）从2016年开始上升幅度增大。氟喹诺酮类及氨基糖苷类耐药性亦有增长趋势。耐药性较稳定的抗生素是复方新诺明（24.9%~30.5%）、米诺环素（16.5%~19.3%）。2014—2017年该菌产ESBLs亦有上升（30.2%~36.4%）。结论 临床分离的肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的耐药性4年间呈普遍上升趋势。     

奇异变形杆菌耐药性的4年监测及碳青霉烯类耐药株的耐药机制研究

目的了解本地区2007年到2010年奇异变形杆菌的临床分布与常用抗菌药物的耐药情况,了解碳青霉烯类耐药菌株可能存在的机制。方法回顾分析2007年到2010年临床分离奇异变形杆菌的资料及整体耐药情况;对保存的耐亚胺培南（IPM）、美罗培南（MEM）或厄他培南（ETP）的菌株进行复苏,并做Hoage试验进行产碳青霉烯酶的确认,同时对试验菌株进行耐药基因的PCR扩增检测。结果2007年到2010年,奇异变形杆菌在临床各送检样本中以痰液分离率最高：51．1％、34．4％、22．1％和35．4％,其次为尿液：14．3％、28．O％、34．9％和33．6％;耐药监测分析显示,4年间对喹诺酮类、青霉素类、头孢菌素类及氨基糖苷类耐药率相对较高且较为稳定;对碳青霉烯类耐药最低但增加明显,亚胺培南从2007年的1．8％升到2010年的16．1％,美罗培南从2007年的1．7％升到2010年的16．8％。15株耐碳青霉烯类菌株中,Hoage试验阳性7株,6fn。基因阳性11株,blaCTX-M基因阳性13株。结论本地区奇异变形杆菌对临床常用的抗菌药物均有较高的耐药性,对碳青霉烯类药物的耐药率最低,但增加明显。位于质粒上的blaKPc基因所产生的碳青霉烯酶和6如cTx-M基因所产生的超广谱β-内酰胺酶是本菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要原因,临床应引起高度重视。