用于核酸分子杂交实验的电泳转移器

核酸分子杂交实验中需要把电泳分离的核酸区带转移到载体膜上。转移的方法有吸水纸法和电泳法。前者简便,但对大分子核酸效果较差,需时较长。后者效率与分子量无关,转移迅速,但实验设备稍复杂。目前,国际上电泳转移多用带铂电极的凝胶脱色器(亦有专用设备出售),转移时间1～6小时。我们在研究对一重氮苯砜乙基纤维素纸(DBSE纸)杂交法中自制了简单的电泳转移器,以不锈钢作电极,转移需时15分钟～1小时,效果满意。     

实验6 核酸的印迹法杂交

一、印迹法转移核酸 1.瑟慎印迹转移(Southern Blot) (1)按实验要求用某一限制性内切酶消化DNA样品。一般情况下,每微克DNA用3—10单位酶(质粒,噬菌体DNA等每微克3个单位酶,哺乳类DNA每微克8—10单位),37℃下保温5小时或过夜即可完全消化。     

一种从凝胶简单快速回收核酸的好方法

从凝胶中分离DNA或DNA片断是基因工程中常用的手段.在重组DNA、分子杂交、基因诊断等实验中,经常需要从凝胶中分离并回收核酸或核酸片断.目前分离DNA片断的方法很多.常用的如电洗脱法、冻融法等操作烦琐且得率较低;低融点琼(王旨)糖法得率较高,但价格昂贵,特别是回收的DNA片断常混有细小琼(王旨)糖颗粒,影响以后的酶切、连接等.我们摸索了一种简便方法,能够从琼(王旨)糖凝胶中高纯度、高得率地分离核酸或核酸片断,回收所得的DNA片断可以直接用于各种酶切反应和基因重组实验.现以分离P~(ZB24)重组质粒中2.3kb的大R蠖核多角体基因片断为例,说明如下:     

药用寄生植物锁阳线粒体基因内含子序列分析

被子植物线粒体cox1基因的Group玉内含子常含有水平基因转移(horizontal gene transfer,HGT)现象。本研究对药用寄生植物锁阳(Cynomorium songaricum)线粒体基因cox1、cox2、nad1序列进行扩增分析,利用最大似然法对cox1和cox2基因内含子和外显子分别进行聚类分析,结果显示cox1内含子聚类结果与其他3个聚类结果不相符,说明该内含子可能存在水平基因转移现象。对比了锁阳6个不同居群间线粒体基因cox1、cox2、nad1外显子与内含子序列平均距离,发现6个不同居群间cox1基因内含子同源性高达100%,说明该基因内含子可能具有功能。结合生物信息学分析表明该内含子很有可能编码核酸内切酶,而DNA核酸内切酶被认为能促进内含子的转移。3'Co-conversion tracts(3'CCT)是被子植物内含子发生转移的痕迹,对锁阳cox1基因序列进行检测发现其含有3'CCT序列且长度为35 bp,RT-PCR实验验证得到cox1基因内含子可以独立转录m RNA。因此,锁阳cox1基因内含子很可能编码一个核酸内切酶,且促进了其内含子的转移。     

用Digoxigenin标记DNA探针作基因转移山羊的整合检测

对采用外源基因原核显微注射法生产的基因转移山羊,用一种新的DNA非同位素标记法即地高辛配基标记DNA探针作外源基因整合检测.结果表明:地高辛标记核酸探针能检测出基因转移动物基因组中整合的外源基因.     

南昌地区婴幼儿腹泻轮状病毒核酸电泳分析

应用核酸凝胶电泳法对49份婴幼儿急性腹泻粪便标本进行了分析研究。试验结果表明,其中34份呈现轮状病毒核酸电泳型。包括长型和短型两个亚群。在长型中有两种不同的电泳图型,并且对轮状病毒的实验诊断与电镜检测做了比较,结果证实二者的敏感性和特异性相似,而核酸电泳法具有更多的优点,便于推广应用。     

Aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞白血病(CML)小鼠模型凋亡信号转导的影响

SELEX技术筛选人慢性粒细胞白血病(CML)核酸适配子,合成aptamer-si RNA核酸复合物,观察aptamer-si RNA核酸复合物干预NOD/SCID小鼠慢性粒细胞白血病(CML)bcr-abl融合基因及P210、P53、TNF-α、bcl-xl相关因子表达水平。将K562细胞接种于全身照射后的裸鼠,待皮下成瘤后取出瘤块,制备成瘤细胞混悬液,再尾静脉接种于NOD/SCID小鼠,实验成功建立了全身播散型白血病模型,对实验小鼠行随机分组,以RT-PCR法检测aptamer-si RNA核酸复合物治疗小鼠体内bcr-abl融合基因表达水平,ELASA法检测小鼠P210、P53、TNF-α、bcl-xl表达水平。实验结果表明:Aptamer-si RNA核酸复合物可显著降低模型小鼠体内融合基因bcr-abl及融合蛋白P210表达水平,能提升P53表达,抑制TNF-α、bcl-xl过度表达,其抑制效果与aptamer-si RNA核酸复合物浓度有一定的相关性。aptamer-si RNA核酸复合物通过干预CMLbcr-abl融合基因及其表达的融合蛋白P210,影响细胞信号传导通路途径,有效阻断了CML传变的进展,揭示了aptamer-si RNA核酸复合物干预CML疾病的微观机理。     

以琼脂糖胶为载体的DNA分子杂交

以硝基纤维素滤膜或二偶氮苄氧甲基纸(diazobenzyloxymethyl paper,简称 DBM 纸)为载体转移核酸分子,并以此载体进行分子杂交是广为应用的生化技术之一。由于现在使用的各种载体吸附核酸分子的能力都存在一定的局限性,所以核酸分子转移杂交技术仍在不断改进。尤其引人注目的是 Purrello 以     

再狭窄基因治疗最新进展

旁路转流及血管成形术是慢性动脉缺血重要有效的治疗手段,但再狭窄严重限制了脸远期疗产。近两年来,随着血管基因转移技术的发展,基因治疗通过向血管壁转移ＳＭＣ增殖治疗基因或通过反义核酸技术为再狭窄防治带来了新的希望。     

超声诱导基因转移

植物基因工程的关键技术之一,是把外源基因导入植物细胞.目前,植物细胞的基因转移方法有:(1)农杆菌Ti或Ri质粒载体法;(2)病毒载体法;(3)磷酸钙核酸沉淀吸收法;(4)PEG介导DNA直接转移法;(5)脂质体载体法;(6)显微注射法;(7)电激基团转移法:(8)基因枪喷射法;(9)激光微束法等.前两种方法是以生物体作为载体介导基因转移,属生物方法中间三种方法是以化学药物介导基因转移.属化学方法;后四种是以物理手段介导基因转(?)属物理方法.由于物理方法操作比较简单,不受宿主范围的限,因此近年(?)发展迅速.     

PCR防污染技术的研究进展

聚合酶链式反应（PCR）是一种高灵敏核酸扩增技术,广泛应用于核酸检测中。但在实际应用过程中,扩增产物及其他核酸片段的污染会导致假阳性的结果,制约了PCR在临床检测中的应用。为了解决这一问题,建立了许多PCR防污染的方法,除了早期建立的并已得到广泛应用的物理隔绝法、光照法及水解法外,近年来还发展了酶消化法、化学修饰法及DEAE纤维素法。本文对PCR防污染技术的原理、应用及进展进行了综述。     

14种蜂花粉的DNA和RNA分析

本文使用紫外光吸收法,分析了芝麻、葵花、泡桐等１４种蜂花粉中核酸（ＤＮＡ和ＲＮＡ）的含量,以进一步探讨花粉的抗衰老作用。结果说明不论那一种花粉,均含有丰富的核酸,但种类不同的花粉其中核酸的含量是不完全相同的。     

一种切口平移法制备生物素标记核酸探针的简便方法

用切口平移法制备生物素标记的核酸探针,其所用试剂质量稳定、可靠,标记重复性好,且制备的探针易长期保存.我们在制备人IL-6 cDNA等基因探针的实验中,对常规的切口平移法制备生物素标记核酸探针的方法作了简化改进,省略了分离步骤,经斑点杂交试验证明效果良好.     

新型冠状病毒抗体检测试剂的临床性能评估方案

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已在全球形成大流行,目前其确诊主要依靠病毒核酸检测,但核酸检测存在漏诊及对检测条件要求较高等不足。与核酸检测相比,抗体检测通常具有普及面广、样品采集便捷、容易实现高通量、成本低等优点,与核酸检测联合应用可有效弥补核酸检测的缺陷。本研究设计了评价新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体检测试剂盒的详细方案,包括对研究对象、样本量评估、纳入及排除标准、盲法设计、实验标本、伦理、研究管理及质量控制、数据管理与统计分析、结果报告的具体内容和考量,旨在帮助使用者在大规模应用抗体检测试剂前系统地评估抗体检测试剂的灵敏度、特异度等关键临床性能,以根据各自的检测目的在不同抗体检测试剂中做出合理的选择提供参考。     

PCR 防污染技术的研究进展

聚合酶链式反应(PCR)是一种高灵敏核酸扩增技术,广泛应用于核酸检测中.但在实际应用过程中,扩增产物及其他核酸片段的污染会导致假阳性的结果,制约了PCR在临床检测中的应用.为了解决这一问题,建立了许多PCR防污染的方法,除了早期建立的并已得到广泛应用的物理隔绝法、光照法及水解法外,近年来还发展了酶消化法、化学修饰法及DEAE纤维素法.本文对PCR防污染技术的原理、应用及进展进行了综述.     

国产49型玻璃纤维滤纸在同位素液体闪烁测量中的应用

当前玻璃纤维滤纸在生物样品软β射线的测量中已日益广泛应用。但国内过去尚无此类滤纸供应。我们在以前的工作中曾用酸碱消化法对组织细胞内核酸等生物大分子进行均相测量,处理样品时方法比较繁杂,实验周期长,成本也高。为此,我们与上海红光造纸厂配合,摸     

第二章 核酸的化学(提要)

核酸是生物体内普遍存在的一类生物大分子。根据化学组分,核酸可以分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。所有生物细胞内部含有这两类核酸,但在病毒,要么只含DNA,要么只含RNA,没有既含DNA又含RNA的病毒。类病毒只是游离的小分子RNA。核酸的生物功能是多种多样的,但最主要的是它具有贮存和传递遗传信息的功能。DNA在细胞内主要存在于染色体中,是遗传信息的主要载体,通过半保留复制将全部遗传信息传给子细胞。细胞核和细胞质中都有RNA。RNA至少有三种主要类型:(1)核糖体RNA(rRNA),(2)转移RNA(tRNA),(3)信使RNA(mRNA)。它们在蛋白质生物合成     

用碘标记核酸检查鼻咽癌上皮细胞中的EB病毒基因

用同位素碘化钠直接标记核酸。以细胞内原位杂交实验检查鼻咽癌上皮细胞中的EB病毒基因。共检查病理确诊的10例鼻咽癌活检标本的细胞涂片,其中9例直接证实有EB病毒核酸。本文建立并改进了细胞内原位核酸杂交技术,首先使用重组的单链DNA作探针,并将碘标记的核酸用于原位核酸杂交实验。     

测定印染物上蛋白的一般免疫化学方法

<正>“从凝胶上转移大分子到固相基质上的过程”叫印染法。它在大分子的研究及其功能分析中已成为有价值的广泛使用的方法。Towbin等人1979年最先发表了不同于核酸印染法的蛋白印染法的研究报告,自此之后发表了大量应用简便的蛋白印染技术的综述中,讨论了此法的优点和应用范围。     

蛋白质的印迹法

所谓印迹法就是生物样品(如核酸、蛋白质等)先经过凝胶(琼脂、聚丙烯酰胺等)电泳后,载有样品区带或点子的凝胶通过压片扩散或电泳迁移,把凝胶中分离的样品转移到硝酸纤维素滤纸上,并用一定的探针进行检测的方法。