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1.
以随机整合方式获得的转基因动物外源基因的拷贝数、整合位点及染色体核型等遗传背景并不清楚,可能会存在外源基因的沉默整合、无效整合、毒性整合以及其表达水平不可预测等问题。文中选取了6只原代(F0)及其相对应的子一代(F1)的人乳铁蛋白(hLF)转基因山羊作为研究对象,分别颈静脉采血、提取DNA,通过染色体核型分析、实时荧光定量PCR(qPCR)、ELISA和Westernblotting等检测技术,研究其外源基因的遗传背景与表达水平。结果显示,6只F0代转基因山羊的染色体没有明显的形态变异、数量改变等异常情况。相对拷贝数高低不同(2–16),且能够稳定地遗传给下一代,F0和F1代hLF基因拷贝数一致。F1代转基因山羊表达hLF水平最高可达1.12 g/L(L3-1,拷贝数8)。结果表明,整合的外源基因能够稳定地遗传下一代,也没有对转基因山羊个体的生长发育造成障碍,而且拷贝数高低与hLF表达水平无明显的相关性,这为转基因山羊及其他转基因动物的新品种培育奠定了基础,解析了遗传背景。  相似文献   
2.
李志沭  仇志琴  黄玉政  胡礼仪  成勇 《生物磁学》2009,(15):2977-2979,2959
在转基因动物乳腺生物反应器研究中,组织特异性表达水平、表达率和表达定位性是决定性的指标。因此,高效表达乳腺生物反应器的制备是许多研究者要实现的目标,也是走向产业化的基本要求。本文从基因构件、动物基因转移方面叙述了如何提高乳腺生物反应器表达水平、增强表达特异性及表达率,着重探讨如何提高动物乳腺生物反应器表达水平。  相似文献   
3.
为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因。首先针对山羊BLG第3外显子识别位点设计了1对特异性TALEN-3-L/R质粒对;同时,构建了含有1个HSV-TK负筛选基因的hLF基因打靶载体BLC14-TK。TALENs质粒对转染山羊胎儿成纤维细胞,2μg/m L嘌呤霉素筛选3 d,PCR扩增产物测序来验证其切割DNA活性。打靶载体BLC14-TK与TALEN-3-L/R质粒对共转染山羊胎儿成纤维细胞,经700μg/m L G418和2μg/m L GCV共筛选药物抗性细胞株;通过整合检测和同源重组检测来筛选hLF基因打靶细胞株;BLG~–/hLF~+打靶细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植。结果为:TALEN-3-L/R致突变率为25%-30%;获得BLG~–/hLF~+打靶细胞6株;共制作重构胚胎335枚,移植受体山羊23只,B超检测到30-35 d的妊娠受体9只(妊娠率39.1%),其中1只50日龄克隆胎儿验证为BLG~–/hLF~+基因型。以上结果表明获得BLG基因座定点整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,为培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基础。  相似文献   
4.
蔡惠罗  李成勇 《动物学报》1995,41(3):299-304
位于突触体质膜的外向型(ecto)Mg^2-ATP酶具有水解ATP活性,能量偶联的AC-MA荧光淬灭实验表明Mg^2+-ATP酶水解ATP时向膜内转移质子,建立跨膜质子梯度,跨膜质子梯度可以被电中性K^+/H^+离子载体Nigericin消除,利用H^+敏感的BCECF荧光分子测定突触的pHi变化,结果表明水解ATP产生的质子转移突触体pHi下降了光分子测定突触的pHi变化,结果表示水解ATP产生  相似文献   
5.
设计了以hSOD1、hSOD3为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动增强子构建乳腺特异性表达载体rhSOD1、rhSOD3,共转染母山羊胎儿成纤维细胞,采用PCR和扩增产物序列分析筛选获得SOD1/3克隆细胞株,应用体细胞核移植(SCNT)制备双转基因山羊。出生小羊经PCR和扩增产物序列分析验证是否成功整合外源基因,经Western blotting、ELISA及体外活性检来验证分析表达产物。结果表明:获得SOD1/3转基因山羊胎儿成纤维细胞系6株;原代双转基因体克隆山羊1只(♀);从该转基因羊乳汁中检测到rhSOD1、rhSOD3,浓度分别为:88.81±8.36 mg/L和267.82±12.67 mg/L;转基因羊乳汁中重组人SOD酶活性为1 432±157 U/mL。研究表明,以双载体和单标记基因转染山羊胎儿成纤维细胞可获得双基因整合转基因细胞系,并且以SOD1与SOD3功能基因均可在山羊乳腺中共同表达,表达产物具有较好的生物学活性。  相似文献   
6.
目的:观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对于废用性骨质疏松(disuse osteoporosis,DOP)大鼠骨形态学及血清学指标的影响,探讨PEMF治疗废用性骨质疏松的作用及其可能的机制。方法:选择雌性SD大鼠,体重250~280 g,随机分为4组,即正常对照组(INT组)、废用模型组(DOP组)、药物治疗组(ALN组)、脉冲电磁场组(PEMF组),每组20只,除正常对照组外,其余大鼠通过改良胫骨-尾部固定法制动建立模型废用性骨质疏松模型,ALN组大鼠灌胃予以阿仑膦酸钠(1 mg·kg-1·d-1)治疗,PEMF组大鼠予以PEMF照射40 min·d-1治疗,治疗后2、4、8、12周时检测各组大鼠的血清学指标并观察其骨组织形态学。结果:治疗2周后,与INT组比较,其余各组血清钙无明显差异,血磷明显降低(P0.05或P0.01),骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALT)、抗酒石酸磷酸酶(TRAP)则显著升高(P0.01)。治疗4周后,与ALN组比较,PEMF组BGP、ALT显著升高(P0.01);ALN组骨小梁排列比较DOP组紧密,整齐,骨小梁间隔较大,网状结构断裂程度较轻。治疗8周后,与DOP组比较,余组ALP、TRAP降低(P0.01),与ALN组相较,PEMF组BGP、ALT显著升高(P0.01)。治疗12周后,与DOP组比较,余组BGP、ALP、TRAP降低(P0.05或P0.01),与药物治疗组相较,PEMF组BGP、ALT、TRAP显著升高(P0.05或P0.01)。PEMF组比较ALN组,骨小梁排列整齐有序,骨小梁数目增多,网状结构完整,骨小梁体积增大,厚度增厚。结论:PEMF通过增强成骨细胞功能促进骨形成,同时降低破骨细胞抑制骨吸收,可达到治疗废用性骨质疏松疾病的作用。  相似文献   
7.
Two αs1-casein/chloramphenicol acetyltransferase (CAT) gene constructs overlapping by 3.0kb were constructed and co-injected into murine zygotes. In 9 of 10 lines of transgenic mice obtained, based on analysis of structure and expression of the transgene, accurate extrachromosomal homologous recombination (ECR) between the two overlapping DNA fragments was found. Different levels of CAT activity were detected in milk from these lines. The highest CAT activity was about 25-50μg/mL milk. In some mice. CAT activity was found in salvia gland, thymus and spleen extracts. The high frequency and accuracy of ECR reported here will be applicable in the experimental manipulation for generation of relatively large transgene.  相似文献   
8.
目的:观察脉冲电磁场(pulsedelectromagneticfields,PEMF)对于废用性骨质疏松(disuseosteoporosis,DOP)大鼠骨形态学及血清学指标的影响,探讨PEMF治疗废用性骨质疏松的作用及其可能的机制。方法:选择雌性SD大鼠,体重250-280g,随机分为4组,即正常对照组(INT组)、废用模型组(DOP组)、药物治疗组(ALN组)、脉冲电磁场组(PEMF组),每组20只,除正常对照组外,其余大鼠通过改良胫骨.尾部固定法制动建立模型废用性骨质疏松模型,ALN组大鼠灌胃予以阿仑膦酸钠(1mg·kg^-1·d^-1)治疗,PEMF组大鼠予以PEMF照射40min·d^-1治疗,治疗后2、4、8、12周时检测各组大鼠的血清学指标并观察其骨组织形态学。结果:治疗2周后,与INT组比较,其余各组血清钙无明显差异,血磷明显降低(P〈0.05或P〈0.01),骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALT)、抗酒石酸磷酸酶(TRAP)则显著升高(P〈0.01)。治疗4周后,与ALN组比较,PEMF组BGP、ALT显著升高(P〈0.01);ALN组骨小梁排列比较DOP组紧密,整齐,骨小梁间隔较大。网状结构断裂程度较轻。治疗8周后,与DOP组比较,余组ALP、TRAP降低(P〈0.01).与ALN组相较,PEMF组BGP、ALT显著升高(P〈0.01)。治疗12周后,与DOP组比较,余组BGP、ALP、TRAP降低(P〈0.05或P〈0.oD,与药物治疗组相较,PEMF组BGP、ALT、TRAP显著升高(P〈0.05或P〈0.01)。PEMF组比较ALN组,骨小梁排列整齐有序,骨小梁数目增多,网状结构完整,骨小梁体积增大,厚度增厚。结论:PEMF通过增强成骨细胞功能促进骨形成,同时降低破骨细胞抑制骨吸收,可达到治疗废用性骨质疏松疾病的作用。  相似文献   
9.
肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因是动物骨骼肌生长的负调控基因。本研究在获得MSTN基因双等位突变原代兔的基础上,培育具有“双肌”表型性状和稳定遗传的MSTN–/–纯合突变兔,建立原代MSTN双等位突变兔繁育纯合子后代的方法。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备MSTN–/–突变原代兔,原代双等位突变兔与野生型兔配种,产生F1代兔。同一突变系的F1代兔半同胞交配或回交繁殖F2代纯合子兔;后代兔利用基因组DNA PCR扩增产物序列分析和T载体克隆测序鉴定用于筛选纯合子兔;14–19周龄MSTN基因突变兔称量体重。MSTN基因突变兔臀大肌组织切片,统计分析肌纤维横截面积。获得5只MSTN基因突变原代兔,其中3只用于纯合子培育,共获得15只(5种突变子)纯合突变兔(M2-a:3只;M2-b:2只;M3-a:2只;M7-a:6只;M7-b:2只)。在14–19周龄,MSTN–/–纯合突变兔体重极显著高于同龄MSTN+/+野生型兔(平均(2 718±120) g和(1 969±53) g...  相似文献   
10.
目的:探讨腹腔镜下结直肠癌根治术围手术期肠外营养的运用.方法:对我院收治的98例接受腹腔镜下结直肠癌根治术的患者作为研究对象,将其分为实验组以及对照组,实验组患者采用卡文进行营养支持,对照组患者采用自制营养液进行治疗,对两组患者术前2d以及术后5d营养学指标进行评价.结果:术后实验组血红蛋白、总蛋白、血清白蛋白以及前白蛋白含量明显高于对照组(P<0.05),实验组患者其肛门排气时间、住院时间、arnofsky评分、Zubrod-ECOG-WHO分级明显优于对照组(P<0.05).结论:采用卡文进行腹腔镜下结直肠癌根治术围手术期肠外营养有助于改善患者术后营养不良,提高患者预后.  相似文献   
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