几种直接从高温热泉沉积物中提取DNA方法之比较

用酶解法,化学裂解法和微波炉法,冻融法等物理裂解方法组合出5种方法直接从滇西一个高温热泉沉积物提取DNA。经常规的琼脂糖凝胶电泳检测,发现用溶菌酶,蛋白酶K酶解,SDS化学裂解结合微波炉法裂解不仅可以得到较大量的DNA。而且碎片段较少,提取出来的DNA经RNA酶和蛋白酶K处理后可直接进行PCR扩增。同时DGGE（变性梯度凝胶电泳）电泳检测,结果表明,此法不仅可以得到该种环境中较多微生物分类单位的DNA,而且还能够较好地体现出它们在量上的差异。     

利用微波炉高通量制备大肠杆菌质粒

利用微波炉可以简单、快速地高通量制备大肠杆菌质粒。     

微波炉对培养基的灭菌探讨

当前,实验室配置培养基通常是采用蒸汽杀菌锅灭菌,这种经典方法不足之处是操作不方便、花费时间多,耗电大且蒸汽杀菌锅不太安全等。这里摸索出一种用微波炉对培养基灭菌的安全快速简便方法。 微波能量对微生物的杀灭机理,目前公认的还是经     

利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

制备基因组ＤＮＡＰＣＲ模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组ＤＮＡ ,然后做ＰＣＲ扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组ＤＮＡＰＣＲ模板的程序 ,具有良好的重复性。1　材料与方法1.1　材料酿酒酵母菌种 1ｃ163 6ｄａｒｇ11,ｕｒａ 3为比利时ＯｒｉａｎｅＳｏｅｔｅｎｓ馈赠。酵母载体ｐＹＸ13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉ａｒｇ 13ｃＤＮＡ的酵母表达载体ｐＹＸＡ5。培养基为ＳＤ或ＹＰＤ固体培养基。1.2　酵母质粒提取[3]取 1.5ｍｌ…     

利用微波-热效应进行限制性内切核酸酶反应的可行性验证

限制性内切酶催化的酶解反应是分子生物学实验中的常用技术.鉴于酶切反应时间长,有人提出采用微波释放的热效应催化限制性内切酶解反应,以期缩短酶解时间.但微波是否能代替传统酶切反应还需验证.本研究设计了一系列的酶切 试验,验证微波酶切是否有效.结果表明：短时间（2 min）微波炉高火处理未导致DNA降解及内切酶失活.对于质粒的单酶切和部分双酶切,短时间（2 min）微波炉处理可替代水浴加热完成酶解反应.对于部分双酶切体系,微波炉处理酶切不完全,不能替代温水浴.使用微波酶解需严格控制时间,切勿时间过长.     

利用微波炉快速制备水稻基因组DNA PCR模板

建立了利用微波炉法快速制备水稻基因组DNA PCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。     

利用微波炉快速筛选大肠杆菌阳性克隆

利用微波炉制备的质粒模板可以非常可靠地进行PCR扩增,由此可以快速地达到筛选大肠杆菌阳性克隆的目的。     

基因工程

960406 通过微波裂解大规模制备质粒DNA[英]/Wang,B.…∥BioTechniques-1995,18(4)-554～555[译自DBA,1995,14(11),95-06158] 用微波炉加热细菌的方法有效地简化了已建立的质粒DNA大规模制备法。对培养于超级培养液(1.2％胰胨,2.4％酵母提取液、0.5％(vol./Vol.)甘油、50mM K_2HPO_4、28mM KH_2PO_4)中的细菌培养物进行离心,将沉淀重悬于10ml改     

微波炉和高压锅抗原修复与不修复免疫组织化学效果的定量对比分析

某些研究认为 ,免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露。组织经 1 0 %福尔马林固定。甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联 ,使决定簇的构像改变。从而影响检测蛋白表达。要充分暴露抗原决定簇 ,微波炉和高压锅抗原修复是目前常采用的方法 [1,2 ]。本实验利用高灵敏 HPIAS-1 0 0 0图像处理系统进行定量对比分析 ,从而得到微波炉和高压锅修复与否乳腺癌组织中 P53、ras P2 1、PCNA蛋白表达的阳性率和阳性表达程度对比。为得到三种癌基因蛋白免疫组织化学染色最佳效果提供详细资料。材料和方法1 .材料乳腺癌组织标本五例 ,…     

微波在肾小球基底膜PASM染色方法中的应用改进

临床诊断肾小球疾病中,经皮肾穿刺活检(肾穿刺)是重要的检查方法之一,对于肾脏疾病的正确诊断和分类起到很重要的作用,实际应用中,除做免疫荧光抗体外,用特殊染色Gomori六胺银(PASM)方法来显示肾基底膜的改变。在光镜下用HE染色难以观察肾血管球基底膜的改变,如基底膜增厚、“钉突”、“双轨”等改变。通过PASM染色能观察到以上改变。按常规的PASM染色法较复杂,染色过程比较费时,温度和时间较难控制。为了克服这一缺点,我们利用微波炉染色取得了较好的效果,现方法介绍如下。材料和方法1·标本与切片标本来自广州军区广州总医院肾穿刺…     

小经验介绍——微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用

经过实验摸索和实践,我们发现一种利用微波处理在10 min内可使聚丙烯酰胺凝胶染色及脱色完成的方法.a 将电泳后的凝胶(厚度0 75 mm)取出,置于培养皿中用蒸馏水冲去残留缓冲液.b 加入染色液将凝胶完全浸泡其中,放入微波炉内高火档照射20 s,停留1 min,再照射10 s. c 取出染色液(回收还可再用2次),用蒸馏水冲去凝胶上残留染色液.d 加入脱色液,高火档照射20 s,取出脱色液,然后加入新鲜脱色液再照射20 s,重复 5～6次,直至背景清晰透明.     

从cDNA文库中筛选分析阳性克隆的简便方法

cDNA文库中阳性克隆的传统筛选分析法既费时又费力.利用微波炉加热的方法,简化了原位杂交中噬菌斑裂解、DNA变性与固定的程序;进一步运用PCR扩增技术,特异扩增克隆载体中插入的cDNA片段,加快了阳性克隆分析的进程.     

用微波炉快速制作腊叶标本

我们经过反复试验 ,利用微波具有快速干燥、杀灭虫卵的特性快速制作腊叶标本 ,方法如下 :1 )常规方法采集植物标本 ,小心剪去含水量大的果实部分 (按常规方法另行处理后附上 )。 2 )把标本按要求折叠成一定形状 ,注意同一面应有叶的正反两面。夹上镜面瓷砖 ,根据茎叶的厚度不同调整瓷砖的厚薄及层数 ,压紧压平。 3 )把标本连同瓷砖置于微波炉中(一次不超过三层 ,中间应有间隙 ) ,周围放上干燥剂。用高火 (推荐 90 0Ｗ以上 ) ,快速干燥 1 3ｍｉｎ ,迅速取出 ,放在吸水纸上晾摊。换一次吸水纸后即可用上台纸固定成型。由于微波具有强大的杀菌…     

100～700 mL液体培养基的微波灭菌效果观察

为研究家用微波炉对少量液体培养基的灭菌效果,对100 -700 mL液体培养基采取微波分别进行灭菌,测定其灭菌时间,并对达到灭菌效果的培养基通过接种不同细菌进行质检.结果显示100、200、300、400、500、600、700 mL液体培养基分别在4.5、5.0、7.0、9.0、12.0、19.0、25.0 min达到最有效的灭菌效果.室温保存15 d仍无细菌生长.枯草杆菌黑色变种芽胞菌测试无菌生长.金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及普通变形杆菌在液体培养基里的生长现象、特种后细菌的菌落和形态染色特征及其生化反应均无明显差异.实验表明2 450 MHz,700 W的微波炉对100 - 700 mL的液体培养基不但能快速达到有效的灭菌效果,且营养成分不会被破坏.     

微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用

经过实验摸索和实践 ,我们发现一种利用微波处理在10ｍｉｎ内可使聚丙烯酰胺凝胶染色及脱色完成的方法 .ａ 将电泳后的凝胶 (厚度 0 75ｍｍ)取出 ,置于培养皿中用蒸馏水冲去残留缓冲液 .ｂ 加入染色液将凝胶完全浸泡其中 ,放入微波炉内高火档照射 2 0ｓ,停留 1ｍｉｎ ,再照射 10ｓ.ｃ 取出染色液 (回收还可再用 2次 ) ,用蒸馏水冲去凝胶上残留染色液 .ｄ 加入脱色液 ,高火档照射 2 0ｓ ,取出脱色液 ,然后加入新鲜脱色液再照射 2 0ｓ,重复5～ 6次 ,直至背景清晰透明 .实践中我们认为应注意以下几点 :ａ 盛试剂的培养皿上面应盖一稍大的培养…     

微波石蜡快速制片的实验研究与临床应用──附63例报告

微波石蜡快速制片的实验研究与临床应用──附６３例报告沙市市第二人民医院病理科李国伟,李继兰龚悌,王虹１９８６年Ｂｏｏｎ氏等成功地应用微波处理脱水、透明、浸蜡环节,使制备石蜡包埋组织块３０分钟完成。鉴于其所用的固定剂、包埋剂及微波炉与国内不同,且无临床...     

反复加热与储存对红烧肉圆营养及卫生质量的影响

目的：了解反复加热与储存对红烧肉圆营养与卫生质量的影响,为居民提供合理化、科学性的指导建议。方法：由市场购得猪肉肉糜后制成红烧肉圆,分为反复储存加热、储存不加热两组,均置于冷藏（4℃）条件下储存。反复储存加热组的肉圆每天取出,用微波炉加热1次,进行相关指标检测,取样后继续置于冰箱冷藏环境,连续6d。不加热组每日取样进行相关指标检测,取样后仍放置于冰箱中。结果：与不加热组相比,加热组肉圆中钠的含量第1天始明显增高,过氧化值第3天始显著增高,反复加热贮存2d是安全食用的期限。结论：反复加热能引起红烧肉圆中钠与过氧化值的变化,反复加热贮存不宜超过2d。     

核仁组成区相关嗜银蛋白染色革新法

核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）银染技术已广泛用以研究细胞生长活性,根据ＡｇＮＯＲ数目多少来判定肿瘤的良恶性和对肿瘤进行鉴别诊断。然而ＡｇＮＯＲ技术至今还存在背景非特异性银颗粒沉积问题而影响结果判定。本研究发现影响背景染色结果的主要因素是明胶的质量,采用Ｆａｒｍｅｒ’ｓ液可以清除背景染色,运用微波炉染色不仅可以缩短染色时间而且可以减少银用量。     

微波对菜豆生长发育影响的实验

微波在通讯、导航、电视、核热反应、辐射育种、工业及家用烘烤等方面有广泛的应用。为了探索微波在辐射育种中的作用,浙江嘉兴市清河中学生物兴趣小组在沈莹老师指导下,于1996年4月至8月进行了微波辐射对菜豆生长发育影响的实验。一、实验方法和过程将280颗粒大饱满的菜豆种子平分为两组,实验组的140颗种子用家用微波炉（150w）照射30秒;另一组的140颗未经处理,作为对照组。在1996年4月24日,选择本市嘉北乡百花村4组一块座北朝南,长9．sin、宽3．Zm的壤土地播种。将280颗种子分播4畦,每畦有两纵行,每行35穴,行距40cm,穴距25cm…     

戊二醛诱发红外荧光用于凝胶中蛋白质的检测与定量

蛋白质检测与定量分析在生物化学分析中非常重要,基于戊二醛与蛋白质相互作用后在近红外光谱区域产生非特异性荧光的性质,且荧光信号强度与蛋白质含量存在线性关系,建立一种凝胶中蛋白质检测与定量分析的方法。该方法在室温下凝胶染色需要1 h,但凝胶经过微波炉加热处理,整个染色过程可在3～5 min内完成,且无需脱色,操作简便,所检测的蛋白质含量低至7.8 ng,不失为一种简便、快速有效的蛋白质电泳分析方法。