血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系及其诊断价值分析

摘要 目的：探讨卵巢癌患者血浆外泌体中微小RNA（miR）-1290和 miR-1307的表达,分析两者与临床病理参数的关系及诊断价值。方法：选取2019年1月至2021年1月于靖江市人民医院诊治的60例卵巢癌患者为卵巢癌组,另分别选取同期52例良性卵巢肿瘤患者和50例女性健康体检者为良性肿瘤组和健康对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-1290、miR-1307在各组血浆外泌体中的表达,分析miR-1290、miR-1307与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血浆外泌体miR-1290、miR-1307对卵巢癌的诊断效能。结果：与良性肿瘤组和健康对照组相比,卵巢癌组的血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平较高（P＜0.05）。卵巢癌组的miR-1290表达水平与FIGO分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-1307表达水平与FIGO分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）;卵巢癌患者血浆外泌体miR-1307表达与miR-1290表达呈显著正相关（r＝0.478,P＜0.05）。血浆外泌体miR-1290、miR-1307联合应用诊断卵巢癌的曲线下面积（AUC）（0.95CI）为0.726（0.526～0.926）,高于两指标单独应用的0.724（0.466～0.987）、0.845（0.750～0.933）。结论：卵巢癌患者血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平升高,两者联合检测对卵巢癌的早期诊断具有较高的价值,有望成为新的卵巢癌的分子标志物。     

原子力显微镜下淋巴瘤患者血浆外泌体的物理特征

目的 外泌体是细胞外囊泡的一种，被认为是一种生物信息载体。本文探究在AFM检测下淋巴瘤患者血浆中外泌体的物理特性。方法 从不同亚型淋巴瘤患者的外周血中提取外泌体，首先利用静电吸附法将分离的外泌体固定在云母基质上，然后应用原子力显微镜（AFM）扫描获取外泌体的多参数图像。在纳米/微尺度上，取得外泌体的形貌与力学信息并统计比较。结果 利用AFM表征单个外泌体的力学信息。其中，表面黏附力图像显示，外泌体边缘的能量耗散高于中心部分，因此具有显著边缘效应，来自不同亚型淋巴瘤患者的血浆中外泌体杨氏模量存在差异。结论 血浆中外泌体可被提取并在经过处理固定后可被AFM捕获并测量，血浆外泌体有望成为肿瘤诊断及治疗的新型生物标志物，外泌体的物理特性可能与其生物学性能存在关联。     

间充质干细胞来源外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及机制研究

摘要 目的：探究间充质干细胞外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及其机制。方法：收集体外培养的间充质干细胞上清，超高速冷冻离心获取外泌体。采用纳米颗粒系统和透射电子显微镜分别检测外泌体粒径大小、形态结构和功能完整性。通过免疫荧光、ELISA和细胞流式等方式检测LPS刺激下，外泌体对BV2细胞的表型极化和炎症因子释放的影响。采用Western Blot法检测间充质干细胞外泌体对BV2细胞JAK1/STAT3通路活化的影响。结果：（1）间充质干细胞分泌的外泌体粒径大小主要介于40-100 nm，透射电镜显示外泌体形态呈典型膜性"杯盘"状结构；（2）流式结果表明，相比于对照组，LPS组能显著激活M1型小胶质细胞表面标志物CD11b和M2型小胶质细胞表面标志物CD206的表达，而经外泌体处理，CD11b的表达显著被抑制，CD206显著升高。同时ELISA结果证实，相比于LPS组，外泌体组分泌的促炎症因子（IL-1β、IL-6）和NO水平显著降低（P<0.05），抗炎因子（IL-10）显著升高 (P<0.05)；（3）间充质干细胞外泌体显著提高了BV2细胞JAK1/STAT3通路的磷酸化水平。结论：间充质干细胞外泌体通过激活JAK1/STAT3通路有效促进脑内小胶质细胞M1型向M2型极化。     

研究报告: 基于Ser-SELEX技术的结肠癌血清适配体的筛选及其应用研究

目的 为了解决癌症早期诊断困难的问题，实现结肠癌的早期检测。方法 采用Ser-SELEX技术筛选了结肠癌血清的特异性适配体。通过前期结肠癌血清正筛-正常人血清反筛步骤和后期结肠癌血清正筛-其他癌症血清反筛步骤循环的方式，经过16轮筛选流程，共选取4条候选适配体，并对其进行序列分析、二级结构和三级结构模拟、特异性分析等。结果 候选适配体主要形成的结构是茎环和假结两种，qPCR法测试亲和力，K_d约为10 nmol/L，适配体与结肠癌患者血清特异性结合情况分析表明，候选适配体APT-2具有良好特异性，且此种方法检出率约为 82.5%。结论 适配体（APT-2）应用于结肠癌早期诊断具有良好的发展前景。     

CTLA-4在弥漫大B细胞淋巴瘤患者外泌体的表达及初步机制研究

摘要 目的：探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外泌体的表达及初步机制。方法：2019年6月至2020年11月就诊于本院的DLBCL患者纳入本项研究,分为缓解组和复发组;选取来医院体检的健康志愿者做为对照组;采用试剂盒分离外泌体,CD63抗体包被磁珠结合后,流式细胞术检测CTLA-4+外泌体的比例;流式细胞术检测CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和调节性T细胞（Treg细胞）的比例。结果：相对于对照组,缓解组DLBCL患者CTLA-4+外泌体的比例升高了37.42%;复发组DLBCL患者CTLA-4+外泌体的比例为6.04%,相对于缓解组,差异具有显著的统计学意义;复发组DLBCL患者CD4/CD8⁺T细胞比值和Treg细胞比例分别为0.85和0.44%,相对于缓解组,差异均具有显著的统计学意义;相关性分析结果显示CTLA-4+外泌体比例与CD4/CD8⁺T细胞比值呈负相关,而与Treg细胞比例呈正相关。结论：CTLA-4+外泌体比例在DLBCL患者显著升高,且与淋巴瘤的治疗效果和抗肿瘤免疫反应均具有紧密的相关性。     

分泌包载ANXA2-MS2 RNA外泌体的稳转细胞株的构建

摘要 目的：基于MCP-MS2示踪系统构建能稳定分泌含有标签的膜联蛋白A2（ANXA2）RNA的外泌体的供体细胞株。方法：利用慢病毒载体构建稳定表达MCP-EGFP的HEK293细胞株,采用流式细胞技术筛选具有较好荧光特性的单克隆细胞株。然后再次通过慢病毒稳定表达系统构建出能分泌结合有MCP-EGFP标记的ANXA2 RNA外泌体的供体细胞株。通过透射电镜、NTA、NanoFCM、共聚焦显微镜等仪器对供体细胞所产生的外泌体进行表征。结果：通过慢病毒载体成功构建了MCP-EGFP稳定表达细胞株,然后利用该细胞株通过慢病毒载体成功导入含有MS2标签的ANXA2基因。实验结果表明,构建的供体细胞与正常细胞所分泌的外泌体形态相似,实实施时荧光定量PCR的结果显示分泌的外泌体中含有MS2特殊序列,而同时Western blot的结果显示分泌的外泌体中含有EGFP蛋白。结论：通过慢病毒法成功建立了能分泌含有MS2标记的ANXA2 RNA的外泌体供体细胞株,为高效、稳定的装载特定RNA外泌体的供体细胞株的构建提供了新的方法和理论基础。     

胶质瘤来源外泌体通过高迁移率族蛋白B1促进胶质瘤干细胞形成

摘要 目的：研究胶质瘤来源外泌体中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对胶质瘤干细胞形成的影响及其意义。方法：使用外泌体提取试剂盒提取原代胶质母细胞瘤来源外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度电位仪和Western blotting对外泌体进行鉴定;采用Western blotting检测外泌体中HMGB1的表达量;通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体对胶质瘤干细胞形成的影响;siRNA敲低HMGB1的表达水平,并通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体中HMGB1对胶质瘤干细胞形成的影响。结果：原代胶质瘤细胞可以分泌外泌体到肿瘤微环境并且外泌体中存在HMGB1;原代胶质瘤细胞来源外泌体可以上调邻近胶质瘤细胞干性相关分子CD133、OCT4、NANOG、SOX2的表达并促进干细胞克隆球的形成;通过siRNA敲低原代胶质瘤细胞HMGB1的表达后,外泌体中HMGB1的含量降低并且外泌体促进胶质瘤干细胞形成的作用减弱。结论：胶质瘤细胞来源外泌体可以通过HMGB1促进胶质瘤干细胞的形成。     

血浆外泌体microRNA-6886和microRNA-6819在乳腺肿块良恶性鉴别诊断中的价值

摘要 目的：探讨microRNA-6886（miR-6886）和microRNA-6819（miR-6819）在乳腺肿块良恶性患者血浆外泌体中的表达水平及鉴别诊断价值。方法：分别选取41例和18例经病理确诊为乳腺恶性肿块和乳腺良性肿块的患者。通过Exo QuickTM试剂盒分离两组患者血浆外泌体,实时荧光定量PCR检测血浆外泌体中miR-6886、miR-6819和miR-7110的相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析单个miRNA或多个miRNA联合在乳腺良恶性肿块鉴别诊断中的价值。各组间比较采用非参数秩和检验进行分析。结果：乳腺恶性肿块组中血浆外泌体miR-6886和miR-6819的表达水平明显低于乳腺良性肿块组,差异具有统计学意义（miR-6886,Z=-2.321,P=0.020;miR-6819,Z=-2.321,P=0.020）。miR-7110的表达水平在两组间没有统计学差异。单个miRNA检测时,miR-6886的AUCROC=0.691,灵敏度和特异度分别为65.8%和72.2%;miR-6819的AUCROC=0.691,灵敏度和特异度分别为73.1%和66.6%;miR-6886和miR-6819联合检测时,AUCROC=0.806,灵敏度和特异度分别为80.5%和77.8%,与单独miR-6886和miR-6819检测相比,AUC差异均有统计学意义（miR-6886,Z=4.082,P＜0.001;miR-6819,Z=2.182,P=0.029）。结论：血浆外泌体miR-6886+miR-6819联合检测,有望成为良好的乳腺良恶性肿瘤鉴别的血清学标志物。     

血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p与非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系

摘要 目的：研究血清外泌体长链非编码核糖核酸（lncRNA）前列腺癌基因表达标记1（PCGEM1）、微小核糖核酸（miR）-129-5p与非小细胞肺癌（NSCLC）患者临床病理特征及预后的关系。方法：选取2016年2月-2018年1月南京脑科医院收治的125例NSCLC患者作为NSCLC组,同期选取体检的70例健康人群作为健康组。采集两组静脉血,提取血清外泌体;采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p表达情况;采用Pearson相关性分析lncRNA PCGEM1与miR-129-5p的关系。并分析血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p与NSCLC患者临床病理特征的关系。对NSCLC患者行5年随访,绘制Kaplan-Meier曲线分析预后情况,多因素Cox比例风险回归模型分析预后不良危险因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析lncRNA PCGEM1、miR-129-5p对NSCLC预后的预测价值。结果：：NSCLC组lncRNA PCGEM1相对表达量高于健康组,miR-129-5p相对表达量低于健康组（P＜0.05）。血清外泌体lncRNA PCGEM1相对表达量与miR-129-5p表达呈负相关（r= -0.420,P＜0.05）。血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p表达与患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关（P＜0.05）。Kplan-Meier生存曲线显示,lncRNA PCGEM1低表达组5年生存率69.05%高于lncRNA PCGEM1高表达组35.53%,miR-129-5p高表达组5年生存率68.09%高于miR-129-5p低表达组33.80%。多因素Cox比例风险回归显示,TNM分期III期、有淋巴结转移、lncRNA PCGEM1高表达、miR-129-5p低表达为NSCLC患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线显示,lncRNA PCGEM1、miR-129-5p联合检测对NSCLC预后的预测曲线下面积（AUC）为0.865,预测价值高于两者单独预测。结论：NSCLC患者血清外泌体lncRNA PCGEM1表达上调、miR-129-5p表达下调,二者表达与NSCLC患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关,且与患者预后密切相关,对NSCLC预后不良具有较好预测价值。     

外泌体在淋巴瘤中的研究进展

摘要：病毒感染和环境污染等使得淋巴瘤的发病率逐年升高,早期诊断和精准治疗具有十分重要的临床意义。外泌体是一种脂质双层膜结构的微小囊泡,介导了细胞间交流和信息交换。近几年许多研究证实外泌体是淋巴瘤的发生、进展和耐药的重要机制。外泌体内核酸和小分子可用于淋巴瘤的早期诊断和预测患者预后。材料学修饰可显著增强外泌体治疗的靶向性和治疗效能。本文总结了外泌体生物学特性、分离和鉴定方法、与肿瘤相关性、及其在淋巴瘤中的研究进展,为淋巴瘤的预警和治疗提供参考。     

Recent advances in the study of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus replication and pathogenesis

It has now been over twenty years since a novel herpesviral genome was identified in Kaposi's sarcoma biopsies. Since then, the cumulative research effort by molecular biologists, virologists, clinicians, and epidemiologists alike has led to the extensive characterization of this tumor virus, Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus(KSHV; also known as human herpesvirus 8(HHV-8)), and its associated diseases. Here we review the current knowledge of KSHV biology and pathogenesis, with a particular emphasis on new and exciting advances in the field of epigenetics. We also discuss the development and practicality of various cell culture and animal model systems to study KSHV replication and pathogenesis.     

A Unique Protease Cleavage Site Predicted in the Spike Protein of the Novel Pneumonia Coronavirus (2019-nCoV) Potentially Related to Viral Transmissibility

正Dear Editor,In December 2019, a novel human coronavirus caused an epidemic of severe pneumonia(Coronavirus Disease 2019,COVID-19) in Wuhan, Hubei, China(Wu et al. 2020; Zhu et al. 2020). So far, this virus has spread to all areas of China and even to other countries. The epidemic has caused 67,102 confirmed infections with 1526 fatal cases     

Curcuminoids as inhibitors of thioredoxin reductase: A receptor based pharmacophore study with distance mapping of the active site

Curcumin is the yellow pigment of turmeric that interacts irreversibly forming an adduct with thioredoxin reductase (TrxR), an enzyme responsible for redox control of cell and defence against oxidative stress. Docking at both the active sites of TrxR was performed to compare the potency of three naturally occurring curcuminoids, namely curcumin, demethoxy curcumin and bis-demethoxy curcumin. Results show that active sites of TrxR occur at the junction of E and F chains. Volume and area of both cavities is predicted. It has been concluded by distance mapping of the most active conformations that Se atom of catalytic residue SeCYS498, is at a distance of 3.56 from C13 of demethoxy curcumin at the E chain active site, whereas C13 carbon atom forms adduct with Se atom of SeCys 498. We report that at least one methoxy group in curcuminoids is necessary for interation with catalytic residues of thioredoxin. Pharmacophore of both active sites of the TrxR receptor for curcumin and demethoxy curcumin molecules has been drawn and proposed for design and synthesis of most probable potent antiproliferative synthetic drugs.     

The structure, reproduction and taxonomy of Vidalia and Osmundaria (Rhodophyta, Rhodomelaceae)

Comprises species occurring mostly in subtidal habitats in tropical, subtropical and warm-temperate areas of the world. An analysis of the type species, V. spiralis (Sonder) Lamouroux ex J. Agardh, a species from Australia, establishes basic characters for distinguishing species in the genus. These characters are (1) branching patterns of thalli, (2) flat blades that may be spiralled on their axis, (3) width of the blade, (4) primary or secondary derivation of sterile and fertile branchlets and (5) position of sterile and fertile branchlets on the thalli. Application of the latter two characters provides an important basic method for separation of species into three major groups. Osmundaria , a genus known only in southern Australia, was studied in relation to Vidalia , and its separation from the Vidalia assemblage is not accepted. Species of Vidalia therefore are transferred to the older genus name, Osmundaria. Two new species, Osmundaria papenfussii and Osmundaria oliveae are described from Natal. Confusion in the usage of the epithet, Vidalia fimbriala Brown ex Turner has been clarified, and Vidalia gregaria Falkenberg, described as an epiphyte on Osmundaria pro/ifera Lamouroux, is revealed to be young branches of the host, Osmundaria prolifera.     

New or rare chromosome counts in Artemisia L. (Asteraceae, Anthemideae) and related genera from Kazakhstan

Fifteen chromosome counts of six Artemisia taxa and one species of each of the genera Brachanthemum, Hippolytia, Kaschgaria, Lepidolopsis and Turaniphytum are reported from Kazakhstan. Three of them are new reports, two are not consistent with previous counts and the remainder are confirmations of very scarce (one to four) earlier records. All the populations studied have the same basic chromosome number, x = 9, with ploidy levels ranging from 2x to 6x. Some correlations between ploidy level, morphological characters and distribution are noted.