血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系及其诊断价值分析

摘要 目的：探讨卵巢癌患者血浆外泌体中微小RNA（miR）-1290和 miR-1307的表达,分析两者与临床病理参数的关系及诊断价值。方法：选取2019年1月至2021年1月于靖江市人民医院诊治的60例卵巢癌患者为卵巢癌组,另分别选取同期52例良性卵巢肿瘤患者和50例女性健康体检者为良性肿瘤组和健康对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-1290、miR-1307在各组血浆外泌体中的表达,分析miR-1290、miR-1307与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血浆外泌体miR-1290、miR-1307对卵巢癌的诊断效能。结果：与良性肿瘤组和健康对照组相比,卵巢癌组的血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平较高（P＜0.05）。卵巢癌组的miR-1290表达水平与FIGO分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-1307表达水平与FIGO分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）;卵巢癌患者血浆外泌体miR-1307表达与miR-1290表达呈显著正相关（r＝0.478,P＜0.05）。血浆外泌体miR-1290、miR-1307联合应用诊断卵巢癌的曲线下面积（AUC）（0.95CI）为0.726（0.526～0.926）,高于两指标单独应用的0.724（0.466～0.987）、0.845（0.750～0.933）。结论：卵巢癌患者血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平升高,两者联合检测对卵巢癌的早期诊断具有较高的价值,有望成为新的卵巢癌的分子标志物。     

原子力显微镜下淋巴瘤患者血浆外泌体的物理特征

目的 外泌体是细胞外囊泡的一种，被认为是一种生物信息载体。本文探究在AFM检测下淋巴瘤患者血浆中外泌体的物理特性。方法 从不同亚型淋巴瘤患者的外周血中提取外泌体，首先利用静电吸附法将分离的外泌体固定在云母基质上，然后应用原子力显微镜（AFM）扫描获取外泌体的多参数图像。在纳米/微尺度上，取得外泌体的形貌与力学信息并统计比较。结果 利用AFM表征单个外泌体的力学信息。其中，表面黏附力图像显示，外泌体边缘的能量耗散高于中心部分，因此具有显著边缘效应，来自不同亚型淋巴瘤患者的血浆中外泌体杨氏模量存在差异。结论 血浆中外泌体可被提取并在经过处理固定后可被AFM捕获并测量，血浆外泌体有望成为肿瘤诊断及治疗的新型生物标志物，外泌体的物理特性可能与其生物学性能存在关联。     

miRNA-125a在脑卒中的作用及其机制研究

摘要 目的：探究miR-125a在脑卒中的作用及其分子机制,为miR-125a在脑缺血治疗中的应用提供理论基础。方法：收集正常和脑卒中患者的血浆,Realtime PCR检测miR-125a的表达水平,ROC曲线分析敏感性和特异性。Person相关性分析miR-125a表达水平与患者NIHSS评分和脑梗死体积的相关性。Realtime PCR检测MCAO模型大鼠脑皮质和血浆中miR-125a表达水平,并进行相关性分析。9.4T磁共振测量MCAO模型大鼠脑梗死体积。Realtime PCR和Western Blot法检测AQP4 mRNA和蛋白的表达水平。结果：研究一共收集到70例正常和50例缺血性脑卒中患者的血浆样本,两组在性别（χ² = 1.469,P = 0.225）和年龄（Z = -0.208,P = 0.835）上无差异。缺血性脑卒中患者血浆中miR-125a表达水平高于正常组（Z = -7.01,P = 0.000）。预后良好患者血浆中miR-125a表达水平低于预后不良患者（Z = -2.183,P = 0.029）。血浆中miR-125a表达水平在区分正常者和缺血性脑卒中患者的敏感性和特异性较好（ROC = 0.876,P = 0.000）。血浆中miR-125a表达水平与患者NIHSS评分正相关（r = 0.303,P = 0.032）,和脑梗死体积正相关性（r = 0.399,P = 0.004）。MCAO大鼠脑皮质中miR-125a表达水平升高（t = 8.918,P = 0.000）,血浆中miR-125a表达水平升高（t = 4.928,P = 0.000）,脑皮质与血浆中miR-125a表达水平呈正相关（r = 0.823,P = 0.044）。第3天时,sh-miR-125a组脑梗死体积小于NC组。sh-miR-125a组AQP4 mRNA和蛋白表达水平小于NC组。结论：血浆中miR-125a表达水平在区分正常和脑卒中患者具有较好的敏感性和特异性,抑制miR-125a表达会通过降低AQP4的表达,减少脑梗死体积,为miR-125a在诊断和治疗脑缺血中的应用提供了理论基础。     

血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p与非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系

摘要 目的：研究血清外泌体长链非编码核糖核酸（lncRNA）前列腺癌基因表达标记1（PCGEM1）、微小核糖核酸（miR）-129-5p与非小细胞肺癌（NSCLC）患者临床病理特征及预后的关系。方法：选取2016年2月-2018年1月南京脑科医院收治的125例NSCLC患者作为NSCLC组,同期选取体检的70例健康人群作为健康组。采集两组静脉血,提取血清外泌体;采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p表达情况;采用Pearson相关性分析lncRNA PCGEM1与miR-129-5p的关系。并分析血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p与NSCLC患者临床病理特征的关系。对NSCLC患者行5年随访,绘制Kaplan-Meier曲线分析预后情况,多因素Cox比例风险回归模型分析预后不良危险因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析lncRNA PCGEM1、miR-129-5p对NSCLC预后的预测价值。结果：：NSCLC组lncRNA PCGEM1相对表达量高于健康组,miR-129-5p相对表达量低于健康组（P＜0.05）。血清外泌体lncRNA PCGEM1相对表达量与miR-129-5p表达呈负相关（r= -0.420,P＜0.05）。血清外泌体lncRNA PCGEM1、miR-129-5p表达与患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关（P＜0.05）。Kplan-Meier生存曲线显示,lncRNA PCGEM1低表达组5年生存率69.05%高于lncRNA PCGEM1高表达组35.53%,miR-129-5p高表达组5年生存率68.09%高于miR-129-5p低表达组33.80%。多因素Cox比例风险回归显示,TNM分期III期、有淋巴结转移、lncRNA PCGEM1高表达、miR-129-5p低表达为NSCLC患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线显示,lncRNA PCGEM1、miR-129-5p联合检测对NSCLC预后的预测曲线下面积（AUC）为0.865,预测价值高于两者单独预测。结论：NSCLC患者血清外泌体lncRNA PCGEM1表达上调、miR-129-5p表达下调,二者表达与NSCLC患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关,且与患者预后密切相关,对NSCLC预后不良具有较好预测价值。     

肺鳞状细胞癌和腺癌PD-L1蛋白及相关miRNA表达差异的研究

摘要 目的：探讨肺鳞状细胞癌（鳞癌）和腺癌PD-L1蛋白及相关miRNA表达的差异。方法：2019年5月至2020年11月来我院就诊的非小细胞肺癌初治患者纳入本项研究；按照病理类型，将患者分为腺癌组和鳞癌组；H&E染色检测免疫细胞数量；免疫组化检测PD-L1、ki-67、PD-1、CTLA-4和LAG-3的表达；miRNA测序筛选鳞癌和腺癌间差异表达的miRNA。结果：H&E染色结果显示鳞癌组微环境中免疫细胞的数量为86.86±8.96个/高倍视野（HPF），腺癌组的数量为26.29±3.99个/HPF（t=6.173，P＜0.001）；肺鳞癌组微环境免疫细胞PD-1、CTLA-4和LAG-3阳性表达的比例分别为53.71±6.88%、35.29±3.25%和34.43±3.29%，腺癌组阳性表达的比例分别为22.29±3.80%、13.43±2.32%和24.00±1.98%（t=3.997，P=0.002；t=5.476，P＜0.001；t=2.719，P=0.019）；肺鳞癌组患者PD-L1蛋白阳性表达的比例为76.67%，腺癌组的比例为36.67%（P=0.001）；肺鳞癌PD-L1（miR-135、miR-24和miR-30b等）和PD-1（miR-802、miR-155和miR-3127-5p等）相关miRNA的表达均显著高于腺癌。结论：肺鳞癌PD-L1蛋白及相关miRNA的表达、微环境免疫细胞PD-1、CTLA-4和LAG-3阳性比例均显著高于腺癌。     

弥散加权成像联合血清CEA、TFF1、sE-cadherin对乳腺良恶性肿块的鉴别价值研究

摘要 目的：探讨弥散加权成像（DWI）联合血清癌胚抗原（CEA）、三叶因子1（TFF1）、可溶性上皮钙黏蛋白（sE-cadherin）对乳腺良恶性肿块的鉴别价值。方法：选择2020年1月至2022年1月中国中医科学院广安门医院收治的81例乳腺肿块患者,所有患者均接受DWI检查并记录标准化表观弥散系数（ADC）,检测血清CEA、TFF1、sE-cadherin水平。以手术病理或空芯针活检病理学结果为准,分析ADC联合血清CEA、TFF1、sE-cadherin鉴别乳腺良恶性肿块的价值。结果：经病理学检查确诊恶性乳腺肿块29例（恶性组）,良性乳腺肿块52例（良性组）。恶性乳腺肿块T1WI低信号影或等信号影,T2WI 呈高信号影或混杂信号,DWI呈高信号影。恶性组ADC值低于良性组（P＜0.05）,血清CEA、TFF1、sE-cadherin水平高于良性组（P＜0.05）。联合ADC值和血清CEA、TFF1、sE-cadherin鉴别乳腺肿块良恶性的曲线下面积为0.869,高于单独指标的0.677、0.681、0.654、0.581。结论：乳腺恶性肿块DWI图像呈高信号影,ADC值降低。乳腺恶性肿块患者血清CEA、TFF1、sE-cadherin水平增高,联合ADC值和血清CEA、TFF1、sE-cadherin可有效鉴别乳腺肿块性质。     

外泌体lncRNA-MIR100HG/miR-100表达变化与胃癌临床病理特征、无疾病进展生存率的相关性

摘要 目的：探究胃癌患者血清外泌体长链非编码RNA-MIR100HG（lncRNA-MIR100HG）及微小核糖核酸-100（miR-100）表达情况,并分析其与患者临床病理特征和无疾病进展生存率之间的相关性。方法：收集60例胃癌患者和60例良性疾病患者,提取外泌体,检测lncRNA-MIR100HG/miR-100的表达情况并进行组间比较。采用Pearson相关分析lncRNA-MIR100HG与miR-100表达水平的相关性,应用单因素卡方检验分析与胃癌患者临床病理特征相关性,采用Kaplan-Meier生存分析lncRNA-MIR100HG/miR-100表达情况与无疾病进展生存率。结果：（1）胃癌组患者血清lncRNA-MIR100HG显著高于,miR-100相对表达水平显著低于胃良性疾病组（P<0.05）;（2）Pearson相关分析结果显示血清lncRNA-MIR100HG和miR-100存在显著负相关关系（r=-0.483,P<0.05）;（3）单因素卡方检验分析结果显示：胃癌患者血清lncRNA-MIR100HG相对表达水平与肿瘤大小、分化程度、肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结转移和远处转移相关,血清miR-100相对表达水平与肿瘤大小、分化程度、临床分期和淋巴结转移相关（P<0.05）;（4）血清lncRNA-MIR100HG、miR-100低水平表达胃癌患者PFS显著长于高水平患者（χ²=37.371,P＜0.05）,miR-100高水平表达胃癌患者PFS显著长于低水平患者（χ²=28.631,P＜0.05）。结论：胃癌患者血清外泌体lncRNA-MIR100HG/miR-100表达水平与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、临床分期等病理特征相关,lncRNA-MIR100HG高表达与miR-100低表达可能提示胃癌患者预后越差。     

CTLA-4在弥漫大B细胞淋巴瘤患者外泌体的表达及初步机制研究

摘要 目的：探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外泌体的表达及初步机制。方法：2019年6月至2020年11月就诊于本院的DLBCL患者纳入本项研究,分为缓解组和复发组;选取来医院体检的健康志愿者做为对照组;采用试剂盒分离外泌体,CD63抗体包被磁珠结合后,流式细胞术检测CTLA-4+外泌体的比例;流式细胞术检测CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和调节性T细胞（Treg细胞）的比例。结果：相对于对照组,缓解组DLBCL患者CTLA-4+外泌体的比例升高了37.42%;复发组DLBCL患者CTLA-4+外泌体的比例为6.04%,相对于缓解组,差异具有显著的统计学意义;复发组DLBCL患者CD4/CD8⁺T细胞比值和Treg细胞比例分别为0.85和0.44%,相对于缓解组,差异均具有显著的统计学意义;相关性分析结果显示CTLA-4+外泌体比例与CD4/CD8⁺T细胞比值呈负相关,而与Treg细胞比例呈正相关。结论：CTLA-4+外泌体比例在DLBCL患者显著升高,且与淋巴瘤的治疗效果和抗肿瘤免疫反应均具有紧密的相关性。     

剪切波弹性成像定量参数对乳腺肿块良恶性的鉴别价值及其与组织Ki-67和C-erbB-2表达的关系研究

摘要 目的：探讨剪切波弹性成像（SWE）定量参数对乳腺肿块良恶性的鉴别价值,分析其与组织Ki-67和表皮生长因子受体2（C-erbB-2）表达的关系。方法：选择2021年1月至2022年1月于湖南省妇幼保健院超声医学科行乳腺SWE检查的106例乳腺肿块患者,根据术后或组织活检的病理检查结果分为恶性组59例和良性组47例。对比恶性组和良性组SWE参数的差异以及不同Ki-67和C-erbB-2表达乳腺癌病灶SWE参数的差异。Spearman分析乳腺癌病灶SWE参数与乳腺癌组织Ki-67和C-erbB-2表达的相关性。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析乳腺病灶SWE参数鉴别乳腺肿块良恶性的价值。结果：恶性组AE-max、Shell1 E _max 、Shell2 E _max 、Shell3 E _max 高于良性组（P＜0.05）。联合AE-max、Shell1 E _max 、Shell2 E _max 、Shell3 E _max 鉴别乳腺肿块良恶性的曲线下面积为0.841,高于单独参数鉴别的0.657、0.599、0.642、0.609（P＜0.05）。Ki-67阳性组、C-erbB-2阳性组AE-max、Shell1 E _max 、Shell2 E _max 、Shell3 E _max 高于阴性组（P＜0.05）。乳腺癌病灶AE-max、Shell1 E _max 、Shell2 E _max 、Shell3 E _max 与Ki-67和C-erbB-2表达均呈正相关（P＜0.05）。结论：乳腺恶性肿块与良性肿块的SWE参数存在明显差异,且与乳腺癌组织的Ki-67、C-erbB-2阳性表达有关,乳腺SWE检查有助于鉴别乳腺肿块良恶性。     

胶质瘤来源外泌体通过高迁移率族蛋白B1促进胶质瘤干细胞形成

摘要 目的：研究胶质瘤来源外泌体中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对胶质瘤干细胞形成的影响及其意义。方法：使用外泌体提取试剂盒提取原代胶质母细胞瘤来源外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度电位仪和Western blotting对外泌体进行鉴定;采用Western blotting检测外泌体中HMGB1的表达量;通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体对胶质瘤干细胞形成的影响;siRNA敲低HMGB1的表达水平,并通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体中HMGB1对胶质瘤干细胞形成的影响。结果：原代胶质瘤细胞可以分泌外泌体到肿瘤微环境并且外泌体中存在HMGB1;原代胶质瘤细胞来源外泌体可以上调邻近胶质瘤细胞干性相关分子CD133、OCT4、NANOG、SOX2的表达并促进干细胞克隆球的形成;通过siRNA敲低原代胶质瘤细胞HMGB1的表达后,外泌体中HMGB1的含量降低并且外泌体促进胶质瘤干细胞形成的作用减弱。结论：胶质瘤细胞来源外泌体可以通过HMGB1促进胶质瘤干细胞的形成。     

高通量测序技术分析急性髓系白血病血浆外泌体微RNA表达谱差异

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,目前的诊断方法不利于疾病的早期发现,且诊断结果重复性较差。已有大量研究显示,细胞外microRNA（miRNA或miR）富集在外泌体（exosome）中,且受其表面膜的保护而具有很好的稳定性,是理想的分子标志物。目前,多种实体肿瘤均已检测到肿瘤特异性外泌体miRNA(exosomal miRNA)。然而,在AML患者中未见此外泌体miRNA报道。本研究探讨急性髓系白血病血浆外泌体miRNA表达谱差异及新miRNA序列。采用solexa高通量测序技术对7例AML患者（AML组）及7例健康对照者（对照组）血浆外泌体miRNAs进行测序,利用Mireap预测软件进行新miRNAs分析,通过edger差异分析软件筛选组间差异miRNA,获得211个已知的差异表达miRNAs以及2个新miRNAs,选择4个差异表达的miRNAs：miR-155-5p、miR-335-5p、miR-451a及xxx-m0038 5p（新miRNA）,在两组（各23例）的血浆外泌体样本中,进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证,验证结果与测序结果一致。对差异表达的外泌体miRNA进行靶基因预测及其GO（Gene Ontology）和信号通路富集分析,发现靶基因聚集的生物学功能多数参与生物进展过程的调控。靶基因主要富集在FoxO、MAPK、Hippo信号通路以及HTLV-I感染等。结果显示,AML患者与健康对照者的血浆外泌体miRNA存在着差异性表达。差异性表达的miRNA特异性很高,对进一步阐明AML白血病发生与发展的分子机制、研发新的无创诊断方法、新的诊断标记物和有效治疗AML的方法具有十分重要和深远的意义。     

非小细胞肺癌患者血浆miR-17和miR-204水平表达的临床意义及其预测价值分析

摘要 目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆miR-17和miR-204表达,分析其表达与临床病理参数的关系及其对NSCLC预后的预测价值。方法：选择我院2015年6月至2017年6月期间收治的117例NSCLC患者（观察组）和同期于我院进行体检的100例健康者（对照组）作为研究对象,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测血浆中miR-17和miR-204表达,分析血浆miR-17、 miR-204表达与NSCLC患者临床病理参数的关系。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血浆miR-17、 miR-204对NSCLC患者预后的预测价值。结果：观察组患者血浆miR-17表达高于对照组（P＜0.05）、miR-204表达低于对照组（P＜0.05）,miR-17表达与淋巴结转移、远处转移有关（P＜0.05）,miR-204表达与TNM分期、远处转移有关（P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示miR-17、 miR-204预测 NSCLC患者预后的曲线下面积（AUC）分别为0.821、0.836。miR-17、miR-204两指标的联合检测对NSCLC患者预后的预测价值更高：敏感度和特异度分别为89.36%(42/47)、92.86%（65/70)。结论：NSCLC患者血浆miR-17、miR-204均存在异常表达,且与患者临床病理参数有关,可能作为NSCLC患者预后预测的潜在生物学指标。     

分泌包载ANXA2-MS2 RNA外泌体的稳转细胞株的构建

摘要 目的：基于MCP-MS2示踪系统构建能稳定分泌含有标签的膜联蛋白A2（ANXA2）RNA的外泌体的供体细胞株。方法：利用慢病毒载体构建稳定表达MCP-EGFP的HEK293细胞株,采用流式细胞技术筛选具有较好荧光特性的单克隆细胞株。然后再次通过慢病毒稳定表达系统构建出能分泌结合有MCP-EGFP标记的ANXA2 RNA外泌体的供体细胞株。通过透射电镜、NTA、NanoFCM、共聚焦显微镜等仪器对供体细胞所产生的外泌体进行表征。结果：通过慢病毒载体成功构建了MCP-EGFP稳定表达细胞株,然后利用该细胞株通过慢病毒载体成功导入含有MS2标签的ANXA2基因。实验结果表明,构建的供体细胞与正常细胞所分泌的外泌体形态相似,实实施时荧光定量PCR的结果显示分泌的外泌体中含有MS2特殊序列,而同时Western blot的结果显示分泌的外泌体中含有EGFP蛋白。结论：通过慢病毒法成功建立了能分泌含有MS2标记的ANXA2 RNA的外泌体供体细胞株,为高效、稳定的装载特定RNA外泌体的供体细胞株的构建提供了新的方法和理论基础。     

幽门螺旋杆菌阳性胃癌组织microRNA-1290、microRNA-134表达与肿瘤增殖基因、侵袭基因和预后的关系分析

摘要 目的：探讨幽门螺旋杆菌（Hp）阳性胃癌组织中微小核糖核酸-1290（miR-1290)、微小核糖核酸-134（miR-134）的表达及其与肿瘤增殖基因、侵袭基因和预后的关系。方法： 选取2016年1月至2017年1月重庆大学附属三峡医院收治的126例胃癌患者为研究对象，根据Hp检测结果分为Hp阳性胃癌组（n=84）和Hp阴性胃癌组（n=42），另同期60例慢性胃炎患者为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组组织中miR-1290、miR-134、增殖基因[磷脂酰肌醇3催化亚基A（PIK3CA）、C-myc癌基因（c-myc）]和侵袭基因[碱性螺旋环-螺旋转录因子(Twist)、N钙黏素（N-cad）]的表达。Pearson相关分析Hp阳性胃癌组织miR-1290、miR-134与肿瘤增殖PIK3CA、c-myc和侵袭基因Twist、N-cad表达的相关性，比较不同临床病理特征Hp阳性胃癌患者miR-1290、miR-134表达差异。Kaplan-Meier生存曲线评估miR-1290、miR-134表达与Hp阳性胃癌患者生存预后的关系。结果：Hp阳性胃癌组患者癌组织miR-1290表达高于Hp阴性胃癌组癌组织及对照组胃粘膜组织，miR-134表达低于Hp阴性胃癌组癌组织及对照组胃粘膜组织，差异有统计学意义(P<0.05)。Hp阳性胃癌组织中miR-1290表达与增殖基因PIK3CA、c-myc和侵袭基因Twist、N-cad mRNA表达呈正相关性（r=0.620～0.725，均P<0.05），miR-134与增殖基因PIK3CA、c-myc和侵袭基因Twist、N-cad mRNA表达呈显著负相关性（r=-0.670～-0.784，均P<0.05）。不同肿瘤TNM分期、浸润深度及淋巴结转移Hp阳性胃癌患者癌组织中miR-1290、miR-134表达比较，差异具有统计学意义(P均<0.05) 。Hp阳性胃癌组患者中，miR-1290高表达组和低表达组5年总体生存率分别为48.78%（20/41），75.61%（31/41）。miR-1290高表达组患者累积生存率明显低于miR-1290低表达组(Log rank χ²=6.366，P= 0.012)。miR-134低表达组和高表达组患者5年总体生存率分别为42.86%（18/42），82.50%（33/40）。miR-134低表达组累积生存率显著低于miR-134高表达组(Log rank χ²=10.640，P=0.001)。结论：Hp阳性胃癌组织miR-1290表达增加，miR-134表达降低，两者可能通过促进肿瘤增殖和侵袭基因的表达，导致肿瘤恶性进展及不良预后。     

间充质干细胞来源外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及机制研究

摘要 目的：探究间充质干细胞外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及其机制。方法：收集体外培养的间充质干细胞上清，超高速冷冻离心获取外泌体。采用纳米颗粒系统和透射电子显微镜分别检测外泌体粒径大小、形态结构和功能完整性。通过免疫荧光、ELISA和细胞流式等方式检测LPS刺激下，外泌体对BV2细胞的表型极化和炎症因子释放的影响。采用Western Blot法检测间充质干细胞外泌体对BV2细胞JAK1/STAT3通路活化的影响。结果：（1）间充质干细胞分泌的外泌体粒径大小主要介于40-100 nm，透射电镜显示外泌体形态呈典型膜性"杯盘"状结构；（2）流式结果表明，相比于对照组，LPS组能显著激活M1型小胶质细胞表面标志物CD11b和M2型小胶质细胞表面标志物CD206的表达，而经外泌体处理，CD11b的表达显著被抑制，CD206显著升高。同时ELISA结果证实，相比于LPS组，外泌体组分泌的促炎症因子（IL-1β、IL-6）和NO水平显著降低（P<0.05），抗炎因子（IL-10）显著升高 (P<0.05)；（3）间充质干细胞外泌体显著提高了BV2细胞JAK1/STAT3通路的磷酸化水平。结论：间充质干细胞外泌体通过激活JAK1/STAT3通路有效促进脑内小胶质细胞M1型向M2型极化。     

原位杂交检测microRNA-205在乳腺癌中的表达

目的探讨microRNA-205表达与乳腺恶性病变的关系。方法乳腺疾病及癌组织芯片原位杂交分析microRNA-205的表达;实时定量RT-PCR方法检测正常乳腺细胞株、恶性程度不同的乳腺癌细胞株中microRNA-205的表达。结果原位杂交分析显示,36例正常与良性乳腺病变中,33例(91.67%)表达阳性;36例乳腺癌中,23例(63.89%)表达阳性。microRNA-205的表达在乳腺正常与良性病变中的表达较恶性病变中高且有统计学差异(P=0.011),但与乳腺癌TNM分期、临床分期无关(P0.05)。实时定量RT-PCR结果显示,四个高度恶性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、HS578T、BT549和SUM159PT)中microRNA-205的表达较永生化正常乳腺上皮细胞株MCF10A和四个低度恶性细胞株(MDA-MB-468、T-47D、ZR-75-1和SKBR3)中为低(P0.05)。结论原位杂交适用于microRNA-205的表达分析;组织芯片标本原位杂交与乳腺细胞株实时定量RT-PCR分析结果提示,microRNA-205可能参与了乳腺癌的发生、发展,并随着乳腺癌的演进呈下调趋势。     

黑色素瘤患者血浆miR-21表达与临床病理特征的相关性

摘要 目的：探讨黑色素瘤患者血浆miR-21表达与临床病理特征的相关性。方法：2018年2月到2019年5月选择在本院诊治的黑色素瘤患者121作为黑色素瘤组,另选取同期良性皮肤肿瘤患者121例作为良性组。采集患者的空腹静脉血并提取血浆,采用qRT-PCR 技术检测血浆miR-21表达。调查患者的临床病理特征并进行相关性分析。结果：黑色素瘤组的血浆miR-21相对表达水平显著高于良性组(P<0.05)。在黑色素瘤组中,血浆miR-21相对表达水平与患者的年龄、性别、饮酒、肿瘤部位等无相关性(P>0.05),与临床分期、肿瘤转移、溃疡、吸烟等有显著相关性(P<0.05)。取miR-21诊断黑色素瘤的临界值(4.71),其诊断黑色素瘤的敏感性、特异性、准确性分别为77.6 %、87.0 %和81.7 %。logistic 回归模型分析显示吸烟、溃疡、miR-21表达水平都为影响黑色素瘤发生的重要因素(P<0.05)。结论：miR-21变化在黑色素瘤中呈现高表达,且与临床特征显著相关性,早期鉴别诊断黑色素瘤的预后效果比较好,同时有助于提高患者的生存率与生活质量。     

不同血液净化方法对维持性血液透析尿毒症动脉粥样硬化患者血清microRNA-144和microRNA-155水平的影响及其临床意义

摘要 目的：探讨不同血液净化方法对维持性血液透析（MHD）尿毒症动脉粥样硬化患者血清microRNA-144和microRNA-155水平的影响及其临床意义。方法：选取2019年6月~2020年6月川北医学院附属医院收治的98例MHD尿毒症动脉粥样硬化患者为研究组,另选取98例同期本院体检健康的志愿者为健康对照组,比较两组血清microRNA-144和microRNA-155、血清炎症因子[白细胞介素-6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）]水平。采用Pearson分析法分析血清microRNA-144、microRNA-155水平与MHD尿毒症动脉粥样硬化患者内膜中层厚度（IMT）值、斑块面积及血清炎症因子的相关性。采用多因素Logistic回归分析MHD尿毒症动脉粥样硬化患者IMT增厚的影响因素。将研究组按随机数字表法分为血液透析滤过组和血液灌流组,各49例。血液透析滤过组给予血液透析滤过联合血液透析治疗,血液灌流组给予血液灌流联合血液透析治疗。比较两组血清microRNA-144和microRNA-155、血清炎症因子水平、IMT值和斑块面积。结果：研究组血清microRNA-144、microRNA-155、IL-6、MCP-1、hs-CRP水平明显高于健康对照组（P<0.05）;Pearson相关性结果显示,血清microRNA-144、microRNA-155均与MHD尿毒症动脉粥样硬化患者IMT值、斑块面积及IL-6、MCP-1、hs-CRP均呈正相关（P<0.05）;多因素Logistic回归分析结果显示,血清microRNA-144、microRNA-155、IL-6、MCP-1、hs-CRP水平均是导致MHD尿毒症动脉粥样硬化患者IMT增厚的危险因素（P<0.05）。治疗后,血液灌流组血清microRNA-144和microRNA-155水平均明显低于血液透析滤过组（P<0.05）,IL-6、MCP-1、hs-CRP水平均明显低于血液透析滤过组（P<0.05）,IMT值和斑块面积均明显低于血液透析滤过组（P<0.05）。结论：血清microRNA-144、microRNA-155水平与IMT值、斑块面积及IL-6、MCP-1、hs-CRP水平呈正相关,均是MHD尿毒症动脉粥样硬化患者IMT增厚的危险因素。血液灌流联合血液透析治疗可减轻机体炎症反应,延缓动脉粥样硬化进程,可能与下调患者血清microRNA-144、microRNA-155水平有关。     

内皮特异性miR-342-5p敲除致小鼠内皮损伤和心血管功能紊乱

摘要 目的：我们前期研究发现有氧运动促进内皮细胞等分泌miR-342-5p,miR-342-5p通过外泌体富集至心肌细胞后发挥心脏保护作用。本研究的主要目的是明确内皮来源的miR-342-5p在心血管功能调控中的作用。方法：我们构建了内皮特异性miR-342-5p敲除小鼠,通过心脏超声检测和血管收缩舒张功能检测观察了该小鼠心血管功能的变化;培养血管内皮细胞,通过对细胞存活率检测、相关蛋白的表达检测等方法对miR-342-5p发挥心血管保护作用的机制进行探究。结果：内皮miR-342-5p敲除致小鼠运动能力降低、心脏收缩功能不变,但舒张功能紊乱。且内皮miR-342-5p敲除致小鼠血管口径变小、微血管密度降低和血管内皮功能紊乱。内皮miR-342-5p敲除致小鼠心血管功能紊乱的机制与其引起的内皮细胞损伤有关。敲低miR-342-5p致内皮细胞中caspase 9水平增加,引起内皮细胞活性降低和凋亡增加。结论：这些结果进一步证实了内皮细胞来源的miR-342-5p在心血管功能中的重要作用,提示miR-342-5p在防治心血管疾病中的潜在应用。     

MiR-150-5p靶向TP53对结直肠癌细胞侵袭和增殖的影响

摘要 目的：探索miR-150-5p靶向调控TP53基因对结直肠癌（colorectal cancer, CRC）在临床和生物学的相关性,研究miR-150-5p调控TP53基因在结直肠癌细胞增殖和侵袭病变中的作用。方法：收集临床手术切除并病理证实的结直肠癌患者的手术及血浆样本（结直肠癌和癌旁组织）60例,另选取癌旁正常粘膜10例,腺瘤30例。根据瘤体直径分为肿瘤＞5 cm（n=30）和≤5 cm（n=30）。qRT-PCR法测定样本中miR-150-5p表达,荧光素酶活性测定以确定TP53是否为miR-150-5p的靶基因。使用SW480细胞株,进行Transwell小室检测细胞侵袭能力,CCK-8检测细胞增值能力,对miR-150-5p进行生物信息学分析。结果：TP53是miR-150-5p的下游基因。癌组织及血浆中miR-150-5p表达量低于癌旁组织,直径＞5 cm瘤体中的miR-150-5p表达量显著低于直径≤5 cm瘤体,Ⅰ-Ⅱ期结直肠癌组织中的miR-150-5p表达显著高于Ⅲ-Ⅳ期（P＜0.05）。上调miR-150-5p后,细胞中TP53表达下降,下调miR-150-5p后,TP53表达升高;CCK-8增殖试验显示细胞中miR-150-5p过表达组抑制细胞增殖（P＜0.05）。结论：MiR-150-5p在结直肠癌组织和细胞中显著低表达,miR-150-5p通过靶向调节TP53抑制人CRC细胞的侵袭和增殖,有望成为结直肠癌治疗的新靶点。