HLA-G功能研究进展

ＨＬＡ Ｇ基因是一类非经典的ＭＨＣ Ｉ类基因。它所编码的分子集中分布于母 胎界面。早期的实验主要研究了ＨＬＡ Ｇ分子在母 胎免疫中所起的作用。近期发现,ＨＬＡ Ｇ还可能参与肿瘤逃逸机体的免疫监视以及诱导Ｔ淋巴细胞耐受。本文就近期对ＨＬＡ Ｇ分子的功能研究进展作一综述。     

HLA—G研究进展

ＨＬＡ－Ｇ分子属ＭＨＣ Ⅰ类非典型分子（ＭＨＣ Ⅰｂ）组织特异性地高表达于胎母界面的滋养层细胞,ＭＨＣⅠ、Ⅱ类抗原是缺乏的,ＨＬＡ－Ｇ分子通过ＮＫ细胞受体抑制ＮＫ细胞杀伤性,并作为ＣＤ８＾＋细胞毒抑制性Ｔ细胞的识别和激活因子,抑制ＣＴＬ的杀伤作用,ＨＬＡ－Ｇ在胎母耐受中发挥重要作用。     

用PCR—RFLP方法研究藏族HLA0—DQA1和—DQB1基因多态性

应用目前ＨＬＡ研究领域中成熟的、有效的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术,从ＤＮＡ水平对藏族健康群体进行了ＨＬＡ－ＤＱＡ１（４９人）和－ＤＱＢ１（４９人）基因分型,这在国内外属首次。所采用的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术是在ＨＬＡ－ＤＱＡ１和－ＤＱＢ１各等位基因全部序列已知的情况下,对其第２个外显子碱基序列扩增进而进行ＲＦＬＰ分析的方法。这种方法得到的ＲＦＬＰ的所有片段都是已知序列,因而精确度很高,同时为     

新疆维吾尔族,哈萨克族人群HLA—DQA1,—DQB1两基因座多态性的研究？…

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术,首次对我国新疆地区维吾尔族和哈萨克族２个少数民族群体的ＨＬＡ－ＤＱＡ１,－ＤＱＢ１两个基因座的多态性进行了研究,结果显示,在ＤＱＡ１８个等位基因中,维族和哈族表现为ＤＱＡ１＊０３０１最常见,最少见的ＤＱＡ１等位基因,在维族中的ＤＱＡ１＊０４０１和０６０１,而在哈族中ＤＱＡ１＊０６０１;在ＤＱＢ１１６个等位基因中,ＤＱＢ１＊０２０１和＊０３０１在维族和哈族中均表现为     

新疆维吾尔族、哈萨克族人群HLA-DQA1、-DQB1两基因座多态性的研究及与25个种族或民族的比较分析

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术,首次对我国新疆地区维吾尔族和哈萨克族２个少数民族群体的ＨＬＡ－ＤＱＡ１、－ＤＱＢ１两个基因座的多态性进行了研究。结果显示,在ＤＱＡ１８个等位基因中,维族和哈族均表现为ＤＱＡ１＊０３０１最常见。最少见的ＤＱＡ１等位基因,在维族中为ＤＱＡ１＊０４０１和＊０６０１,而在哈族中为ＤＱＡ１＊０６０１;在ＤＱＢ１１６个等位基因中,ＤＱＢ１＊０２０１和＊０３０１在维族和哈族中均表现为最常见。在维族中未观察到ＤＱＢ１＊０５０２、＊０５０３２和＊０５０４,在哈族中未观察到ＤＱＢ１＊０５０３２、＊０５０４和＊０６０５等位基因。统计分析表明,维族和哈族ＤＱＡ１、ＤＱＢ１各等位基因的分布无显著性差异,说明维、哈族间具有较密切的亲缘关系。在以２７个种族或民族的ＨＬＡ－ＤＱＡ１、－ＤＱＢ１两基因座基因频率构建的分子系统树上,维族和哈族独立于其他群体而聚类,独处一支。维族和哈族接近蒙古人种,而离高加索人种较远。     

中国人群5—羟色胺2A受体基因中T102C多态性与精神分裂症的联系

在研究５－羟色胺２Ａ受体基因多态性与精神分裂症的关联分析中,调查了２０２例精神分裂症患者及２０２例正常对照。各相匹配组间比较未发现基因型和等位基因频率的显著性差异。结果提示,在中国人群中５－羟色胺２Ａ受体的静态Ｔ１０２Ｃ突变与精神分裂症之间不存在关联。     

PCR—SSP分型检测上海汉族人群HLA—Cw位点血清学和非血清学鉴定的等位 …

应用补体介导的微量淋巴细胞毒实验可检出ＨＬＡ－Ｃｗ１￣１０,但有２０％￣５０％的空白不能检出。利用ＰＣＲ－ＳＳＰ对７０例上海汉族样本进行ＨＬＡ－Ｃｗ等位基因分型,首次在中国汉族人群中检出Ｃｗ＾＊１２０１／１２０２、１２３０、１３０１、１４、１６０１、１６０２、１７０１等非血清学鉴定的抗原,并对血清学鉴定抗原的基因进行分型,依次为Ｃｗ＾＊０１、０２、０３０２／０３０４、０３０３、０４、０５０１、０６     

重组RA—538及反义c—myc腺病毒对人胃癌,食管癌和bcl—2高表达细胞系的作用

本课题研究ＲＡ５３８、反义c-ymc重组腺病毒对人胃癌（ＳＧＣ７９０１）、食管癌（Ｅ Ｃ１０９、ＥＣ８７１２）、正常人胚肺２ＢＳ（２ＢＳ）及ｂｃｌ－２高表达细胞第的体仙外生物学作用及其分子机制。结果显示Ａｄ－ＲＡ５３８及Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ对ＳＧＣ７９０１细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用,并能抑制其ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２、ｃｙｃｌｉｎＤ１基因的表达及刺激ｂａｘ基因的表达。对ＥＣ１０９、ＥＣ８     

三种蛋白磷酸酶抑制剂对A_（23187）诱导的HL－60细胞程序性死亡的影响

钙离子载体Ａ２３１８７可以引起细胞内Ｃａ２＋浓度升高,并可诱导某些细胞程序死亡。本文发现１ｇ／ｍｌＡ２３１８７作用于ＨＬ－６０细胞４小时即可诱导程序死亡,以无毒性浓度的蛋白磷酸酶２Ｂ（ＰＰ２Ｂ）的抑制剂环抱菌素Ａ（ＣｓＡ）（０．５－３ｇ／ｍ１）预处理可以抑制Ａ２３１８７诱导的ＨＬ－６０细胞程序死亡,磷酸酶１、２Ａ、２Ｃ的抑制剂ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ（ＯＡ）和酪氨酸磷酸酶的抑制剂钒酸钠（ｓｏｄｉｕｍｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ,ＳｏＶ）则无此效应。流式细胞术测定群体细胞内总Ｃａ２＋变化发现,ＣｓＡ不抑制Ａ２３１８７诱导的胞内Ｃａ２＋浓度升高,表明ＣｓＡ作用于Ｃａ２＋升高后的下游事件。     

病理性近视与HLA的关联性研究

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对江浙沪籍汉族５５例病理性近视眼（ＰＭ）患者的ＨＬＡⅡ类ＤＱＢ１基因的第二个外显子进行了基因分型。结果发现ＨＬＡ－ＤＱＢ１＊０２０１、＊０３０３、＊０４０１等位基因在ＰＭ患者中和正常人中的分布有显著的差异（Ｐｃ＜０．０５,ＡＦ分别为０．１６３６,０．１０９１,０．１６３６,０．１０９１ｖｓ．０．０４００,０．０３００,０．０４００,０．０２００）,可能与ＰＭ的致病相关。ＤＱＢ     

HLA复合体与感染性疾病的关系

人类白细胞抗原（ＨＬＡ）是人类主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）的基因产物,为目前已知的最复杂的人类基因复合体。由于ＭＨＣ分子在个体免疫调节中起主要作用,故其在控制个体对疾病的易感性方面也起重要作用。本文总结了近年来ＨＬＡ复合体与感染性疾病相关性的研究进展。     

BALB／c等小鼠线粒体DNAD环区PCR—SSCP分析

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析ＢＡＬＢ／ｃ等７个近交系小鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的多态性,探讨其遗传起源及亲缘关系,结果发现,这些小鼠ｍｔＤＮＡ的高变异性区,Ｄ－ｌｏｏｐ ５’及３’端的ＳＳＣＰ电泳带型完全相同,未发现多态性。表明ＴＡ２、６１５、Ｔ７３９、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ３Ｈ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＤＢＡ／２等近交系小鼠的ｍｔＤＮＡ具有高度的同源性。     

急性白血病细胞中抗凋亡蛋白bcl－2及其mRNA的表达

采用免疫组织化学与原位杂交方法检测了２５例急性髓系或淋巴系白血病骨髓活检组织及６种白血病细胞株中ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ水平。结果２１例白血病标本中存在ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ的一致性高表达;５种白血病细胞株（ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２）均能表达一定水平的ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ（Ｍｏｌｔ－４例外）。提示ｂｃｌ－２基因的功能状态与淋巴造血系统肿瘤密切相关。     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

重组人粒系集落刺激因子（rhG—CSF）对白血病细胞HL—60生长 …

本文研究了ｒｈＧ－ＣＳＦ对人白血病细胞系ＨＬ－６０的作用。结果表明：ｒｈＧ－ＣＳＦ能够显著抑制ＨＬ－６０细胞生长和Ｃ－ｍｙｃ基因的表达,降低＾３Ｈ－ＴｄＲ的摄入。在含ｒｈＧ－ＣＳＦ的培养液中经过２－５天的培养,部分ＨＬ－６０细胞具备ＮＢＴ还原能力。这或许说明ｒｈＧ－ＣＳＦ能导致ＨＬ－６０细胞向成熟方向分化的结果。     

核酶对bcl－2mRNA的体外切割

通过微机对ｂｃｌ－２ＲＮＡ二级结构的分析,设计针对ｂｃｌ－２片段５＇ＣＧＣＧＡＣＣＣＧＧＵＣＧＣＣＡＧＧＡＣＣＵＣＧ３＇的“锤头状”（Ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ,ＲＤ）基因,平端连接于ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）ＨｉｎｃⅡ位点,克隆后经测序表明序列正确,ｂｃｌ－２和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因经体外转录,５０℃作用２ｈ,从１６５６－１６５７（Ｃ－Ｇ）位之间切断ｂｃｌ－２ＲＮＡ片段．     

HCV核心蛋白免疫优势肽AA32—45抗原化抗体的构建

经定点突变,在抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体重链Ｖ区产生一个ＸｈｏＩ位点并插入编码ＨＣＶ核心蛋白免疫优势肽ＡＡ３２￣４５的互补寡核苷酸片段,构成抗原化ＶＨ基因。抗原化ＶＨ与人γ３恒区ｃＤＮＡ拼接成嵌合重链基因并与嵌合轻链基因共同构建成杆状病毒表达系统转移载体,经共转染筛选到重组病毒ＢａｃＨＬ－Ｅ１和ＢａｃＨＬ－Ｅ２,感染Ｓｆ９细胞分别表达Ｉｇ－Ｅ１和Ｉｇ－Ｅ２。Ｉｇ－Ｅ１与正常免疫球蛋白分子一样能形成四聚     

非放射性反相杂交法在HLA－DQA1位点基因分型中的应用

将遴选的经适当接尾的１２个ＨＬＡ－ＤＱＡ１序列特异性寡核苷酸固定在一张滤膜上,用生物素标记的ＤＱＡ１特异性扩增产物与滤膜上的序列特异性寡核苷酸在四甲基氯化铵杂交体系中杂交,然后经洗膜封膜,杂交信号用非放射性的碱性磷酸酶显色法检测,根据杂交斑点的显示结果分析标本的基因型。采用这种方法初步确定了ＨＬＡ－ＤＱＡ１位点８种单倍型等位基因：ＤＱＡ１０１０１、０１０２、０１０３、０２０１、０３０１１、０４０１、０５０１和０６０１．非放射性反相杂交法可对各种来源的杂合性标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类基因快速分型,并适合在临床器官移植的组织分型配型、疾病易感性研究和法医鉴定等领城中应用。     

应用PCR-SSOP技术研究中国汉族、维吾尔族HLA-A基因座基因多态性

人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigen,HLA)基因复合物位于6p21.3,有220多个不同的功能基因,是人类基因组最复杂的遗传多态系统。HLA等位基因的变异在医学、法医学、人类学等领域具有重要的意义。自从1964年以来,HLA分型一直采用经典的微量淋巴细胞毒实验,但该方法是血清学水平的分,不能识别很多特异性的等位基因,而且高质量的抗体也不易获得。从20世纪90年代起,在国家自然科学基金的资助下,首先开展HLAⅡ类位点基因分研究及大规模群体多态性调查,所获得的中国主要民族基因数据已应用于多个领域。相比之下,HLAⅠ类基因数量更丰富,包含了A、B、C、E、F、G和假基因H、J、K、L等10个位点;基因分子结构更复杂,更具多态性。因此,HLAⅠ类DNA分型比HLAⅡ类分型及行多困难。直至目前中国人群HLA－A基因座基因多态性和分布频率的研究尚未充分进行。而任何DNA标记用于遗传分析、法医鉴定等领域之前,必须先进行群体调查,建立不同民族基因数据库,这是不可逾越的基础工作。鉴于此,采用灵敏而非同位素污染的PCR－SSOP基因分型技术,对165个汉族和162个维吾尔族个体的HLA－A基因座多态性进行调查。结果在汉族群体中发现22种等位基因,频率最高的是HLA－A＊1101（19．7％）,其次是＊201（12．72％）;在维族群体中发现22种等位基因,频率最高的是＊2407（17．90％）,等位基因＊0101、＊0201和＊3301的频率均大于10％;HLA－A＊0203、＊0205、＊0302、＊2403和＊3302仅在汉族群体中检出;HLA－A＊0205、＊0211、＊2301、＊2502、＊68012和＊6802仅在维族群体中检出。按照Hardy-Weinberg平衡定律检验,两个民族各等位基因型频率的预期值与实际观察值相吻合（P＞0．05）,证明了所获得汉族、维吾尔族HLA－A位点基因频率具有可靠性;同时也表明各等位基因的遗传特征符合符合孟德尔规律。经计算机统计分析,汉族群体HLA－A基因座杂合度（Heterozygosity,H)、个体识别率（Discrimination Power,DP)和非父排排率（Proba-bility of Paternity Exclusion,EPP)分别为0．9029、0．9776和0．8592;维族群体H、DP和EEP分别为0．9063、0．9379和0．7885。和其他遗传标记（如VNTR、STR、SNP）的单一位点相比,HLA－A具有高度的杂合率、个体识别率和非父排除率。因此,HLA－A等位基因在法医个体识别、亲权鉴定、基因诊断、人类学等领域具有重要的应用价值。     

SP—A的分子生物学

肺表面活性物质蛋白Ａ（ＳＰ－Ａ）是一个约６５０ｋＤ的寡聚体巨分子糖蛋白,人ＳＰ－Ａ基因座位由２个功能基因和１个假基因所组成并表现极大的变异性,其表达调控机制极其复杂,它不权对正常肺功能的维持起关键作用,而且在肺部局部防御及免疫调节中扮演重要角色。