人乳腺癌MCF-7细胞系凋亡过程中bcl-2基因的结合蛋白

 Ｍ Ｃ Ｆ ７ 是 ｐ５３ 为野生型的人乳腺癌细胞系．为探讨该细胞系凋亡过程中 ｂｃｌ ２ 基因的下调机制,以 ５ 氟尿嘧啶（５ Ｆｕ）诱导凋亡,用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增出人 ｂｃｌ ２（ｈｂｃｌ ２）基因调控区长度为 ５５８ｂｐ 的片段,经亚克隆后的序列分析证实其准确性．用此 Ｐ Ｃ Ｒ 产物作为探针与 ５ Ｆｕ 刺激 １２ ｈ 后的 Ｍ Ｃ Ｆ ７ 核内蛋白质粗提物进行 Ｓｏｕｔｈｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹及凝胶阻滞（ Ｅ Ｍ Ｓ Ａ）分析．以未用 ５ Ｆｕ 刺激者为对照．结果显示,细胞核内一分子量为 ５３ ｋ Ｄ 的结合蛋白与 ｂｃｌ ２ 调控区的结合信号明显增强,而一种２０ ｋ Ｄ 的 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白与该区的结合信号明显减弱．这些结果提示ｐ５３ 蛋白有可能是ｂｃｌ ２ 的负转录因子,２０ ｋ Ｄ 的 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白有可能是ｂｃｌ ２ 的正转录因子．     

亚硒酸钠对四氯化碳损伤草鱼肝原代细胞与肝组织的保护作用

不同浓度四氯化碳（ＣＣｌ４）对草鱼肝原代细胞的损伤实验中,ＣＣｌ４浓度为１０μｌ／ｍｌ可引起细胞血清中丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）逸出量与细胞破损率显著增高,培养液中添加亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）０．２μｇ／ｍｌ,则可降低ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ的逸出量,减轻细胞破损程度。Ｎａ２ＳｅＯ３保护实验中,Ｎａ２ＳｅＯ２＋ＣＣｌ４组预先腹腔注射（ｉｐ）０．１ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ连续三日,末次ｉｐＣＣｌ４混合液１ｍｌ／ｋｇ．ｂｗ,２４ｈ内肝组织超氧物歧化酶（ＳＯＤ）相对活性比ＣＣｌ４组提高达９１．５％,第七日仍提高达５４．５％,与对照组的水平基本接近;血清中丙氨酸氨基转氨酶（ＡＬＴ）水平逐渐降低。本实验还观察到Ｎａ２ＳｅＯ３可引起肝脂质过氧化物显著降低,肝微粒体蛋白含量与细胞色素Ｐ—４５０活性升高;组织切片观察显示肝组织损伤程度减轻,７２ｈ后细胞核增多。表明Ｎａ２ＳｅＯ３可提高草鱼肝清除自由基能力,增强肝脏解毒功能。     

盐度和CO2倍增环境下碱蓬幼苗呼吸酶活性的变化

研究了生长在正常大气ＣＯ２和ＣＯ２倍增环境中的盐生植物碱蓬（Ｓｕａｅｄａｓａｌｓａ）幼苗呼吸酶活性对ＫＣｌ和ＮａＣｌ的反应．结果表明,在ＣＯ２倍增（７００μｌ·Ｌ－１）和正常大气ＣＯ２（３５０μｌ·Ｌ－１）下,３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ和ＮａＣｌ均能抑制琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）和苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）活性,而异柠檬酸脱氢酶（ＩＤＨ）活性为ＮａＣｌ抑制、ＫＣｌ促进;ＮａＣｌ和ＫＣｌ明显抑制细胞色素氧化酶（ＣＯ）和光呼吸中乙醇酸氧化酶（ＧＯ）、羟基丙酮酸还原酶（ＨＰＲ）活性;并指出在ＫＣｌ胁迫下,ＣＯ２使三羧酸循环（ＴＣＡＣ）的运行变慢,ＮａＣｌ胁迫下使其加快,ＴＣＡＣ运行限速步骤与ＭＤＨ无关,ＣＯ为盐对呼吸代谢影响的重要位点．另外,Ｋ＋、Ｎａ＋对蛋白表达的影响有差异,ＣＯ２可使盐胁迫下的碱蓬幼苗蛋白表达降低．     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白,用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８：１的金属：蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ＰＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域,通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外     

蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白的分离纯化

将ＡＢＡ通过一个１０ 碳原子的臂高效率地（６～８ ｍｍｏｌ／Ｌ凝胶）偶联到琼脂糖凝胶４Ｂ上,制成亲和层析柱,用以纯化蚕豆（Ｖｉｃｉａｆａｂａ Ｌ．） 叶片下表皮ＡＢＡ 结合蛋白（ＡＢＡ＿ＢＰ）。样品上柱后,通过ＮａＣｌ 盐梯度洗脱去掉大部分非特异结合的杂蛋白后,用１ ｍｍｏｌ／ＬＡＢＡ亲和洗脱竞争亲和柱中的ＡＢＡ＿ＢＰ,纯化到一种ＡＢＡ特异结合蛋白,纯化了１１２ 倍。纯化蛋白与ＡＢＡ 最大结合为５８．３３ ｎｍｏｌ／ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ,Ｋｄ 值为２１ ｎｍｏｌ／Ｌ,亚基分子量为４４ ．２ ｋＤ,纯度约为９０ ％ 。纯化的ＡＢＡ结合蛋白具有典型的蛋白质紫外吸收光谱,在２８０ ｎｍ 处有明显吸收峰     

蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择

以蚕豆（ＶｉｃｉａｆａｂａＬ．）叶片下表皮为材料,比较ＴｒｉｔｏｎＸ１００、冷丙酮和（ＮＨ４）２ＳＯ４对ＡＢＡ结合蛋白（简称ＡＢＡＢＰ）的提取效果。结果表明：０．５％（Ｗ／Ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ１００去垢剂提取的ＡＢＡＢＰ与ＡＢＡ特异结合活性较高（０．４８７ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔｅｉｎ）,维持结合活性的时间较长（４℃下反应４０ｈ保持最大结合的６０％）;而冷丙酮法提取的ＡＢＡＢＰ特异结合活性只有０．３２５ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔｅｉｎ,且容易失活,１０ｈ仅保持最大结合的３０％左右。实验比较了各种盐离子对ＡＢＡＢＰ的影响,高盐（＞３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）不利于ＡＢＡＢＰ的结合反应,低浓度ＫＣｌ对ＡＢＡＢＰ活性略有促进。ＡＢＡＢＰ的结合活性需要介质中有一定量的Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋,用ＥＤＴＡ螯合介质中Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋后,ＡＢＡＢＰ活性大大降低,分别为最大结合的７５％和６０％。ＡＢＡＢＰ与ＡＢＡ反应的最适ｐＨ在６．５,这些条件为亲和层析纯化ＡＢＡＢＰ提供了依据。     

高钙引起的学习记忆障碍与突触界面结构参数的变化

本研究选用１月龄小鼠,观察了海马内注射ＣａＣｌ２造成高钙水平对小鼠学习和记忆行为的影响,并对海马ＣＡ３区进行突触超微结构定量分析。结果表明,与对照组相比：（１）ＣａＣｌ２组小鼠一次性被动回避反应的步入潜伏期有缩短的趋势,说明该组小鼠记忆减弱;同时Ｙ－迷宫分辨学习能力也显著下降（Ｐ〈０．０１）;（２）ＣａＣｌ２组海马ＣＡ３区突触后致密物质极显著变薄（Ｐ〈０．００１）,而突触间隙宽度显著增大（Ｐ〈０．     

NaCl胁迫对螺旋藻生长及抗氧化酶活性的影响

在０１％～５．０％ＮａＣｌ浓度范围的培养基中培养极大螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｍａｘｉｍａ）,发现ＮａＣｌ浓度高于２．０％时螺旋藻生长受到明显抑制。培养７天后测定超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、抗坏血酸过氧化物酶（ＡＳＡＰＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量。结果表明：在盐胁迫下,ＳＯＤ酶活性升高;抗坏血酸过氧化物酶和过氧化氢酶活性在低盐胁迫下活性升高,高盐胁迫下抗坏血酸过氧化物酶活性迅速降低,过氧化物酶则完全失活;ＭＤＡ含量先随盐胁迫程度增加而降低,后随盐胁迫的进一步增强恢复至对照水平。     

酿酒酵母3——磷酸甘油脱氢酶的诱导,提纯和性质

在ＹＥＰＤ培养中添加ＮａＣｌ,可以诱导酿酒酵母细胞内３－磷酸甘油脱氢酶的形成,当ＮａＣｌ浓度达５％时,酶比活从０．０５Ｕ／ｍｇ提高到０．５Ｕ／ｍｇ;若再限制培养基中葡萄糖浓度在１００ｍｇ／Ｌ以下,酶比活可达到０．８９Ｕ／ｍｇ。酶比活与培养基中的ＮａＣｌ浓度的函数关系式为：Ｓａ＝０．１２９Ｃ＾３－０．０３８Ｃ＾２＋０．０３４Ｃ＋０．０６３。粗酶液经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５凝胶过滤,Ｂｌｕｅ Ｓｅｐ     

天花粉蛋白Glu160在N-糖苷酶活性中的作用

用浸泡法得到了（Ｅ１６０Ａ）天花粉蛋白（ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ, ＴＣＳ）,（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ与Ａｄｅ 和（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ与ＦＭＰ复合物的晶体．在Ｍａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 面探测器系统上分别收集了０．２０ ｎｍ ,０．１９ｎｍ 和０．２０５ ｎｍ 分辨率的Ｘ 射线衍射数据,数据处理用Ｍａｒ Ｓｃａｌｅ 程序系统完成．用同晶差值Ｆｏｕｒｉｅｒ法解析了（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ－Ａｄｅ,（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ－Ａｄｅ 和（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ－ＦＭＰ的晶体结构,结构修正利用Ｘ－ＰＬＯＲ程序,修正结果,晶体学Ｒ因子分别为０．１６６,０．１７６,０．１７９．键长和键角的ＲＭＳ偏差分别为０．００１０ ｎｍ 和２．５０３°,０．００１３ ｎｍ 和２．６６５°,０．００１２ ｎｍ 和２．６７６°．在这三个结构中均未见到Ｇｌｕ１８９侧链方向的改变．Ａｄｅ 或ＦＭＰ仍结合在Ｎ－糖苷酶活性口袋之中,它夹在Ｔｙｒ７０和Ｔｙｒ１１１两个侧链环之间,与Ｔｙｒ７０环近乎平行．这一结果表明：ＴＣＳ中的Ｇｌｕ１６０分别突变成Ａｌａ 和Ａｓｐ,仍能与ＡＭＰ发生Ｎ－糖苷酶反应,但是活性降低了一些．可见Ｇｌｕ１６０对ＴＣＳ与ＡＭＰ的作用是重要的,但不是必要的．     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,ＭＴ）,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白（ａｐｏＭＴ）．用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８１的金属蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ｐＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ｉ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域．通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外扫描等鉴定,证明确实得到了Ｎ末端为Ｍｅｔ,分子量３０００左右,金属蛋白摩尔比为５～５．５１的ＭＴβ结构域,其氨基酸组成与理论值基本相符     

NaCl（2 mol／L）处理PSⅡ颗粒的Ca^2＋重结合

回加Ｃａ＾２＋对ＮａＣｌ（２ ｍｏｌ／Ｌ）处理菠菜ＰＳⅡ颗粒放氧活恬的作用表现出有两种Ｋｍ值分别为０．０２１和０．５４５ｍｍｏｌ／Ｌ高亲和与低亲和的Ｃａ＾２＋重结合过程。高浓度ＮａＣｌ和低ｐＨ（３．０）处理支Ｃａ的ＰＳⅡ颗粒的光抑制放氧活性半衰期明显减小,重结合Ｃａ＾２＋后,虽然大部分丧失的放氧活性可恢复,但ＰＳⅡ颗粒放氧活性对光抑制的敏感性却并不随之恢复,ｔ１／２无明显改变。显然,重组Ｃａ＾２＋     

黑曲霉产木聚糖酶发酵条件的研究

正交设计试验结果表明,黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｍ１２）产木聚糖酶活力达７６．６０ｕ／ｍｌ,合适的产酶发酵条件如下,培养基（ｇ／Ｌ）：麸皮４０,尿素６．６７,ＫＨ２ＰＯ４ １．０,ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．５,ＮａＣｌ０．３,Ｔｗｅｅｎ－８０ ３．０,ＣａＣＯ３ ２．０,２８℃,１２０ｒ／ｍｉｎ水浴振荡培养５．５ｄ。     

正常麻醉犬动脉血和脑脊液酸碱及电解质值

２０条正常麻醉犬经股动脉插管和枕骨下经皮穿刺在严格隔绝空气情况下，分别取得动脉血和脑脊液（ＣＳＦ）样本，用ＩＬ－１３０３型血气分析仪和Ｂｅｃｋｍａｎ－７００型生化分析仪检测酸碱变量及电解质。通过酶反应分光光度法检测乳酸（Ｌａｃｔ）。应用（Ｎａ＋＋Ｋ＋）－（Ｃｌ－＋Ｌａｃｔ＋ＨＣＯ３－）公式计算阴离子隙（ＡＧ）。经统计学处理结果表明ＣＳＦＰＨ、Ｋ＋、ＡＧ＜动脉血（ｐ＜０．０１）；ＣＳＦＰＣＯ２、ＨＣＯ３－、Ｃｌ－、Ｌａｃｔ＞动脉血（ｐ＜０．０１）；ＣＳＦＮａ＋同动脉血比较无明显差异（ｐ＞０．０５）。     

人骨形成蛋白-2A与小鼠成骨细胞表面特异性结合的研究

作者证实在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白-２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）Ｃ端肽段具有骨诱导活性,再利用噬菌体呈现载体克隆并表达了ｈＢＭＰ２ＡｃＤＮＡ３’端５６７个核苷酸,表面呈现有人ＢＭＰ２ＡＣ端肽段的噬菌体与小鼠成骨细胞系（ＭＣ３Ｔ３）能够特异地结合,用抗Ｍ１３噬菌体抗体进行ＥＬＩＳＡ实验呈阳性反应,同时用^３ＨＴｄＲ参入重组ＢＭＰ２Ａ噬菌体时放射性计数比对照组高近１０倍,推测小鼠成骨细胞表面存在有人ＢＭＰ２Ａ受体。     

突触前神经末梢的一种钙结合蛋白──突触泡融蛋白（synaptotagmin）

突触泡融蛋白（ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ）是突触囊泡的膜结合蛋白,其Ｃ端有两个与ＰＫＣ和磷脂酶Ａ＿２的Ｃ＿２区有同源序列的重复区,基于其Ｃ＿２区结合Ｇ２￣（２＋）的特性,故推测为钙受体。离体和活体的许多研究支持这种推测,并表明此蛋白与钙激发的神经递质释放密切相关。近年来的研究指出：（１）缺乏突触泡融蛋白则导致递质释放障碍;（２）在胞吐过程中此蛋白可能促进融合和排放;（３）单独作为钙受体或作为协同钙受体而起作用。     

三价盐对C_8-卵磷脂胶团溶液相分离的作用

用激光散射技术结合浊点法测定了加有不同离子强度的四种三价稀土盐（ＬａＣｌ３,ＣｅＣｌ３,Ｌａ（ＮＯ３）３,Ｃｅ（ＮＯ３）３）的Ｃ８－卵磷脂溶液的液－液相分离曲线,从中得出了相分离临界温度（Ｔｃ）和临界浓度（Ｘｃ）随盐类型和盐离子强度变化曲线。发现各种三价盐都使Ｔｃ和Ｘｃ随离子强度的增加先降低,然后再使之升高。其变化也遵循我们导出的式子：ＴＣ＝ＴＣ０＋Ａ１Ｉ１２－Ａ２Ｉ所描述的规律。各种正、负离子对Ｔｃ和Ｘｃ的相对作用程度分别为：Ｃｅ３＋＞Ｌａ３＋;ＮＯ３－＞Ｃｌ－。用液－液相分离曲线的实验数据,根据吉布斯自由能模型,还计算了胶团的作用因子Ｃ和形成因子Δμ．借助这两个表象参数,利用加盐表面活性物胶团溶液的唯象理论,从理论上算出了各两相共存曲线,其结果与实验值的吻合令人满意。     

经G—蛋白敏感的跨膜信号通路调控心血管肌源性张力

本研究探讨低氧和ＡｌＦ－４等药物经Ｇ－蛋白敏感的跨膜信号通路对心血管肌源性张力的调控作用。在含有稳定表达Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换蛋白的ＣＫ１．４细胞中,用ｆｕｒａ－２荧光影像确定细胞低氧对胞浆游离Ｃａ２＋［Ｃａ２＋］ｉ的影响。在离体犬心乳头肌、颈动脉、主动脉及肺动脉恒温灌流样本中,用张力－电换能器测量低氧灌流和ＡｌＦ－４等药物对心血管肌源性张力的影响。在整体犬体内,按拉丁方设计,用１２５Ｉｓｏｄ－１获得不同剂量ＶＩＳＡ高效剂细胞内分布等药代动力学参数。结果表明：①在ＣＫ１．４细胞中,低氧抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换蛋白,产生Ｃａ２＋内流,升高［Ｃａ２＋］ｉ;②低氧灌流削弱ＡｌＦ－４所致的血管收缩而明显易化Ｃａ２＋内流所致的心乳头肌收缩,与结果１）吻合;③ＶＩＳＡ高效剂分布至细胞内,协同ＡｌＦ－４,模拟并激活Ｇ－蛋白敏感的跨膜信号通路,显著改善低氧所致的Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换蛋白等跨膜大分子和心血管收缩蛋白氧化损害。     

普通鸡冠花序中黄酮类化合物的研究

红色普通鸡冠（Ｃｅｌｏｓｉａ ａｒｇｅｎｔｅａ Ｌ．,ｒｅｄ ｆｌｏｗｅｒ）花序乙醇提取物用Ｍｇ＋ＨＣｌ,Ｚｎ＋ＨＣｌ,１％ＦｅＣｌ３－乙醇液,２％ＡｌＣｌ３－乙醇液,１％ＮａＯＨ进行显色反应,呈现黄酮类化合物性质特征颜色。又以槲皮素、山奈酚、异鼠李素为对照品,采用ＨＰＬＣ法测定分析了不同花期花序中黄酮醇的含量。结果表明,晚期花序干品中总黄酮含量（以甙元计）为０．７６１％。     

雄激素对人前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调节作用

 为探讨雄激素对人前列腺中鸟氨酸脱羧酶（ Ｏ Ｄ Ｃ）基因表达的调节作用,以研究雄激素诱导前列腺良性增生的分子机理,分离培养了人胎儿前列腺间质细胞,以 Ｍ Ｔ Ｔ 法测定不同浓度 Ｄ Ｈ Ｔ对细胞的促增殖作用;以最适浓度的 Ｄ Ｈ Ｔ（１ ０００ μｇ／ Ｌ）刺激该细胞,分别于 ０,３,６,１２,２４,３０ ｈ 提取总 Ｒ Ｎ Ａ,用斑点杂交及 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 法分析测定各组细胞中 Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的丰度,并对杂交膜进行薄层扫描定量．结果显示：（１） Ｄ Ｈ Ｔ 对前列腺间质细胞的增殖呈双相调节作用,即在低浓度时随着 Ｄ Ｈ Ｔ 浓度的增加,对该细胞的促增殖作用增强,１ ０００ μｇ／ Ｌ时刺激活性最强,高浓度 Ｄ Ｈ Ｔ 对该细胞的刺激作用降低．（２）斑点杂交显示,在 １ ０００ μｇ／ Ｌ Ｄ Ｈ Ｔ 刺激细胞后 ６ ｈ 时, Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ开始明显升高,２４ ｈ 达高峰（约为 ０ ｈ 的 ４８ 倍）,至 ３０ ｈ 有所降低．（３） Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果显示,人胎儿前列腺间质细胞中有两种 Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ,分别为 ２０ ｋｂ 和 ２６ ｋｂ,经扫描定量结果显示：１ ０００μｇ／ Ｌ Ｄ Ｈ Ｔ 对两种 Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ