一种单克隆抗体酶免疫测定法的建立及其在检测家畜促滤泡激素中的应用

以牛促滤泡激素(bFSH)为抗原,制备出对bFSH特异的单克隆抗体(McAb)并进行了抗体的纯化和特性分析。以方阵交叉匹配试验挑选出最佳抗体配对,建立了一种可测定微量促滤泡激素的双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS—ELIsA)．用IBM—PC微机对DAS—ELISA测出的数据进行了分析。本DAS—ELISA法已成功地应用于家畜血清促滤泡激素水平的检测。     

共价连接的多肽酶联免疫测定法的研究

采用紫外线照射及戊二醛活化处理聚苯乙烯酶标板后再包被八肽胆囊收缩素（CCK-8）,以此为基础进行酶联免疫吸附试验（ELISA）,通过不同的洗涤过程对CCK-8与酶标板相互作用的性质进行研究.结果表明,该包被方法可使CCK-8通过共价交联的方式稳定地结合于固相载体上,该方法适用于不同来源的酶标板,处理后的酶标板性质稳定,可储存使用,测定的批内及批间变异系数分别为4.75%和7.80%,方法稳定可靠,重复性好,便于推广应用.     

酶联免疫吸附试验技术方法的进展

<正>酶联免疫吸附试验(Enzgme—Linked immunosorbentassay.ELISA)是由Engvall和Peylman)及Vanweemen和Schuttys)于1971年首先提出的一种用酶标记抗体或抗原的方法,该方法将抗原抗体的免疫反应和酶的催化作用结合起来,可敏感地检测体液中微量的抗原或抗体,用于多种疾病的诊断和血清流行病学调查,近10余年来,国内外许多学者为了进一步提高它的敏感性和特异性,在技术方     

抗HBsAg碱性磷酸酶双功能抗体的构建及对临床标本的初步检测

酶联免疫吸附试验(ELISA)在对微量抗原或抗体的检测中具有重要意义,酶标记物主要是抗体,其标记酶一般为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),常规的酶标抗体都是采用化学交联方法制备的,需要交联、纯化等多步蛋白质操作,易失活、成本高。随着分子生物学技术的发展,采用基因工程方法可将抗体基因和酶基因融合表达,获得既有抗体的抗原结合活性又有酶的催化活性的双功能抗体融合蛋白,不仅易于大量制备、成本低,而且提高了     

酶联免疫法(ELISA)测定内源植物激素

用酶联免疫法测定植物激素兼备灵敏、专一、快速等特点。在聚苯乙烯微量滴定板上依次分别连接上单克隆抗体(mAb)、抗原和酶标抗原,再通过酶促催化底物反应的量来确定非标记抗原(植物激素)的量,测定激素的极限量可达0.01pmol。本文介绍了吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA_4)、玉米素核苷(ZR)、异戊烯基腺嘌呤(iPA)和脱落酸(ABA)的ELISA程序。在植物材料测定中,发现鸭跖草表皮气孔与其ABA、iPA的含量有关。     

两种NC膜条上马铃薯A病毒DAS-ELISA检测研究

基于双抗体夹心ELISA反应原理,在两种不同加工成形的硝酸纤维素膜条(NC strip)上进行了马铃薯A病毒(PVA)的检测研究,并以酶标板ELISA做参比。结果表明,在NC条-2(NC strip-2)上的检测灵敏度与酶标板ELISA相当,而反应试剂的用量仅为酶标板ELISA的百分之一;NC条-1(NC strip-1)由于加样点间易发生交叉污染而不适合进行ELISA检测。应用NC条-2可稳定进行PVA的ELISA检测,为进一步开展微流体斑点免疫检测研究奠定了基础。     

两种NC膜条上马铃薯A病毒DAS-ELISA检测研究

基于双抗体夹心ELISA反应原理,在两种不同加工成形的硝酸纤维素膜条（NC strip）上进行了马铃薯A病毒（PVA）的检测研究,并以酶标板ELISA做参比。结果表明,在NC条-2(NC strip-2)上的检测灵敏度与酶标板ELISA相当,而反应试剂的用量仅为酶标板ELISA的百分之一;NC条-1(NC strip-1)由于加样点间易发生交叉污染而不适合进行ELISA检测。应用NC条-2可稳定进行PVA的ELISA检测,为进一步开展微流体斑点免疫检测研究奠定了基础。     

ELISA检测RSV感染的研究

呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿呼吸道感染的重要病原之一,早期快速诊断RSV感染是防止本病蔓延,及时采取正确治疗措施的关键;所以,急待寻求快速诊断的方法。本试验建立了酶联免疫吸附测定(ELISA)检测RSV感染的方法。对其敏感性、特异性、重复性进行了检验;并在临床应用上与病毒分离和/或补体     

单克隆抗体酶联免疫吸附测定数据的微机分析

单克隆抗体酶联免疫吸附测定法(McAb-ELISA)是一种具有高特异性、准确性和敏感性的酶免疫测定技术。随着单克隆抗体技术的发展,针对各种抗原,尤其是酶和激素等蛋白抗原的微量McAb-ELISA相继建立并获得越来越广泛的应用。但是,人工处理McAb-ELISA测定数据比较费时费力,还可能掺杂主观因素。所以欧美发达国家在生物研究中已普遍引入计算机技     

以酶标免疫吸附法测定大鼠肝脏精氨酸酶含量

本文利用丙酮沉淀、凝胶过滤、离子交换层析等方法提纯了大鼠肝脏精氨酸酶,在SDS-PAGE中表现为单一的蛋白质带,其亚基分子量为37,000.建立了大鼠肝精氨酸酶的酶标免疫吸附测定法(ELISA),比较了两种常规的精氨酸酶活性测定法与ELISA法,并初步探讨了ELISA法在精氨酸酶测定方面的一些应用。     

脱落酸的酶标免疫测定

使用国产辣根过氧化物酶(HRP)合成酶标记物,用竞争法进行了植物内源激素脱落酸(ABA)的酶标免疫测定研究。测定范围为0.0125ng—100ng,在此范围内logitB/B。与ABA浓度的对数之间呈较好的线性关系。检测的灵敏度达到5×10~(-14)克分子。比较了两种酶标记方法对于测定的影响,结果发现直接使ABA共价结合到HRP上形成ABA-HRP酶标记物比先将ABA与牛血清白蛋白(BSA)结合后,然后进一步再与HRP反应形成ABA—BSA—HRP复合物灵敏度高,非特异性吸附小,而且合成步骤较少。酶标记物的稀释度直接影响测定的灵敏度和浓度对数与logit B/B。之间的线性关系好坏;在以每毫升3—6微克免疫球蛋白包埋免疫吸附板进行测定时,用每毫升5微克酶标记物的浓度获得了最佳结果。     

H5亚型禽流感病毒单抗-生物素捕获ELISA的建立

目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系。用该方法检测H1—H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性。结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1∶5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为025个血凝单位。该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应。结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗—生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础。     

木香倍半萜对血管内皮细胞生长因子的抑制作用

对ELISA法测定人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)的检测条件进行研究,考察了酶标板种类、一抗包被时间、紫外辐照等对酶联免疫反应的影响,优化了检测条件:可采用广州洁特公司生产的酶标板替代进口Costar酶标板,一抗包被时间24 h,一抗包被前紫外辐照30 min可明显提高酶标板对包被抗体的亲和力.利用优化的检测条件测定了木香挥发油、土木香挥发油、木香主要单体成分脱氢木香内酯(dehydrocostus lactone,1)和木香烯内酯(costunolide,2)对人肺腺癌A549细胞分泌VEGF的抑制作用,同时以MTT法测定药物对A549肿瘤细胞生长的抑制作用.结果表明,木香挥发油、土木香挥发油、脱氢木香内酯和木香烯内酯在不影响细胞增殖的浓度范围内,可明显抑制A549细胞分泌VEGF.     

二斑叶螨对阿维菌素敏感性的快速检测方法筛选

为了寻找一种快速检测二斑叶螨Tetranychus urticae Koch对阿维菌素敏感性的试验方法,本试验分别采用酶标板法、玻璃管法、离心管法、玻片浸渍法和培养皿封膜法,测定了阿维菌素处理后1、2、3和4 h时二斑叶螨的死亡率。结果发现,酶标板法和玻璃管法操作不方便;离心管法无法准确判断死亡与否;玻片浸渍法作用速度慢;培养皿封膜法方便快捷。据此得出,采用培养皿封膜法于处理后3 h观察结果,可以省时省力的测定二斑叶螨对阿维菌素的敏感性。     

黄曲霉毒素B1抗独特型抗体的制备和应用研究Ⅱ.抗独特型抗体应用

以抗独特型抗体(anti-idiotype antibody,Ab2)的酶切片段Fab2替代黄曲霉毒素B1(AFB1)建立一种不需要使用AFB1的无毒酶联免疫吸附(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)试剂盒,研究该试剂盒特异性、稳定性和AFB,的加标回收,并将该试剂盒用于农产品和饲料中AFB1的检测。结果表明,该试剂盒具有和常规ELISA试剂盒一样的特异性和加标回收能力,无毒试剂盒和常规试剂盒一样都可以用于农产品和饲料中AFB1的检测,并且两种试剂盒的检测结果并无显著差异,无毒ELISA试剂盒在适当处理后,4℃放置3个月和-20℃放置5个月,以间接非竞争ELISA测定的吸光值分别是起始时的85％和87％。     

黄曲霉毒素B_1抗独特型抗体的制备和应用研究II.抗独特型抗体应用

以抗独特型抗体(anti-idiotypeantibody,Ab2)的酶切片段Fab2替代黄曲霉毒素B1(AFB1)建立一种不需要使用AFB1的无毒酶联免疫吸附(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)试剂盒,研究该试剂盒特异性、稳定性和AFB1的加标回收,并将该试剂盒用于农产品和饲料中AFB1的检测。结果表明,该试剂盒具有和常规ELISA试剂盒一样的特异性和加标回收能力,无毒试剂盒和常规试剂盒一样都可以用于农产品和饲料中AFB1的检测,并且两种试剂盒的检测结果并无显著差异,无毒ELISA试剂盒在适当处理后,40C放置3个月和-200C放置5个月,以间接非竞争ELISA测定的吸光值分别是起始时的85%和87%。     

联合标记物检测在重症感染中合并急性肾损伤的诊断价值

目的:探讨尿中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、尿肾损伤分子-1(kidneyinjury molecule-1,Kim-1)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acecyl-β-D-glucosaminidase,NAG)、尿微量白蛋白(mALB)在重症感染中合并急性肾损伤的敏感性及临床价值。方法:回顾分析60例在新疆自治区人民医院ICU住院的重症感染合并急性肾损伤(AKI)患者的尿NGAL、Kim-1、NAG及mALB的变化情况。健康体检者20例为对照组。尿NGAL、Kim-1、mALB测定采用酶联免疫法(ELISA)检测,尿NAG测定采用对硝基苯酚(PNP)比色法检测,并以ROC曲线分析其敏感性。结果:AKI组患者尿液中的NGAL、Kim-1、NAG、mALB的测定浓度明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001),通过ROC曲线、诊断试验结果显示:尿NGAL、Kim-1曲线下面积分别为0.986、0.956,95%可信区间分别是0.968～1.004、0.910～1.001,较尿NAG、mALB更具有敏感性(P<0.001)。结论:尿NGAL、尿Kim-1的浓度检测对重症感染合并急性肾损伤的诊断更具有敏感性,与NAG、mALB联合检测有助于急性肾损伤的早期监测,对预防急性肾损伤的发生、发展具有重要的临床价值。     

单克隆抗体酶联免疫吸附法检测尿标本中人巨细胞病毒抗原

本文运用抗人巨细胞病毒(HCMV)包膜20KD或/和130KD结构蛋白的单克隆抗体分别建立了4类酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法,共对44人份临床尿标本进行HCMV抗原检测。方法的敏感度可高达10.3—32.8ng HCMV抗原/ml尿,与尿标本中的HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ和EBV抗原无交叉反应,重复性良好,与病毒分离比较,敏感性和特异性在71—83％和88—100％之间;与核酸杂交比较,敏感性和特异性也可分别高达60—100％和83.3—100％。混合使用多种单克隆抗体作为包被抗体会得到较好的技术参数。上述结果提示运用单克隆抗体ELISA将有助于一般临床实验室对HCMV感染的快速诊断。     

标记抗生物素-生物素酶联免疫吸附试验(LABELISA)检测血清抗-HBc/IgM的研究

本文将BAS用于固相免疫吸附试验,建立LAB-ELISA抗-HBc/IgM试验方法,并与普通ELISA法进行了比较。实验表明:本法敏感性较普通ELISA高2—4倍,检出率高出后者6.8％,且具有较好的重复性。为血清抗-HBc/IgM检测提供了一种新的、切实可行的方法。本试验采用改良过碘酸盐法制备酶标记抗生物素,以含A蛋白葡萄球菌菌体亲和吸附试验制备抗-μ抗体,在稀释液中加入凝聚正常兔IgG以克服类风湿因子的干扰、考核方法的特异性采用了含A蛋白葡萄球菌菌体吸附试验及抗HBc-抑制试验。     

建立超敏ELISA-双酶底物循环法检测tau蛋白

利用酶联免疫吸附法(ELISA)的高特异性和双酶底物循环的高灵敏度,建立了ELISA-双酶底物循环扩增检测法.用传统ELISA测定纯化tau蛋白和阿尔茨海默病异常磷酸化tau蛋白的范围值分别为1～32 ng和0.2～10 ng,而此法的测定范围值分别为0.75～200 pg和0.5～50 pg,比传统ELISA的灵敏度分别提高1 300倍和400倍,可测定范围值亦分别扩大了8.5倍和2倍.可准确测定阿尔茨海默病患者脑脊液样品中的微量tau蛋白和异常磷酸化tau蛋白,为阿尔茨海默病的早期诊断和鉴别诊断提供了新技术.