动物细胞工程 第2卷

包括的内容有:一、产物的产生:1.细胞产物——总论;2.细胞产物的结构与合成;3.淋巴细胞杂交瘤——单克隆抗体的生产与应甩:4.细胞培养中昆虫致病病毒的产生。二、后处理:5.澄清和灭菌;6.动物细胞培养物中的病毒失活;7.培养动物细胞中产物的提纯;8.浓缩;9.病毒分离和亚单位疫苗的制备;10.佑剂;11.配方和贮存。     

一种细胞培养发酵罐的评价

人和动物细胞的体外培养在生物学和医学研究中起着重要作用。然而,将动物细胞培养应用于生产却因在获得足够的产额及生物活性方面的困难而受到限制。传统上一直把细胞培养产物用作人类和牲畜的病毒疫苗,这些疫苗至今已大规模应用。在过去的七年中,大规模细胞培养技术已用于α—和β—干扰素的生产。最近,动物细胞培养技术也已用来生产大量的单克隆抗体和一些遗传工程蛋白质。     

一种高效和经济的单克隆抗体制备新方法

杂交瘤技术使得单克隆抗体大量制备成为可能,采用该技术制备单抗的关键步骤是杂交瘤细胞的培养,常规方法是用细胞培养瓶水平方式培养,这需要经常细心照料细胞使之处于健康状况,此外,如要获得大量的单抗,还需要通过进一步重新接种来扩大细胞数量。本文报道了一种高效而又简便易行的在标准细胞培养瓶中制备单克隆抗体的方法。该方法的关键在于将杂交瘤细胞和其适合的培养液放在水平的细胞培养瓶中培养,直到９０％的细胞达到融合,然后补加培养液至培养瓶的颈部,将瓶子竖直地放置在培养箱中培养３～４周,直到９０％～９５％的细胞死亡…     

动物细胞大量培养

1.前言 在生物技术过程申,人们已广泛地围绕着细菌、酵母、丝状真菌的大量培养来生产各种酶、抗生素、蛋白质等产物。然而,许多有重要价值的蛋白质等生物物质,必须借助动物细胞培养获得,例如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。由于生产的需要,推动了动物细胞大量培养新工艺、新技术的开发和发展,向大型化、自动化和精巧化方向发展,成为现代生物技术的一个重要组成部分。     

蛋白水解物在动物细胞培养中的应用研究进展

蛋白水解物是蛋白质经水解得到的混合物,其主要成分为肽类。蛋白水解物可优化动物细胞培养基的组成,并且其中所含部分肽段可作为外部分子信号对细胞代谢、生物合成、生长、凋亡及产物表达等生命活动产生特殊的调控作用,因而被广泛应用于动物细胞培养领域,以生产单克隆抗体、疫苗、干扰素等生物制品。其作为无血清或低血清培养基的营养成分,可消除或降低血清带来的病毒微生物污染。随着蛋白水解物生产工艺的改进及优质产品的问世,其必将在细胞培养等生物技术领域发挥越来越重要的作用。     

杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展

单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。     

应用动力学方法在线检测Vero细胞培养过程中的摄氧率

流加和灌注培养已被广泛应用于动物细胞培养 ,以获得高活性、高密度的细胞和高的产物得率。在这些培养过程中 ,一般通过离线检测关键参数 (如细胞密度、营养和代谢产物的浓度 )来人为调整灌注速率和补料策略 ,但是 ,当细胞密度较高时 ,由于细胞代谢旺盛使得培养的微环境变化很快 ,这就需要更加频繁快速地调整操作条件 ,从而导致因频繁取样和离线分析所带来的污染危险及大量人力、物力的浪费。这在大规模细胞培养过程中是不可取的。因此 ,要建立大规模、高效动物细胞培养过程 ,有必要研究和探索在线检测技术 ,以实时掌握细胞培养过程所处的状…     

动物细胞的微囊固定化培养

动物细胞培养的目的是多方面的,如:科研应用;作为病毒的宿主生产疫苗;获得细胞分泌的产物(抗体、干扰素、促红细胞生成素、tPA等)或细胞本身。尽管动物细胞培养的成本和复杂性要大于微生物的培养,但由于真核基因遗传及表达系统有着原核细胞无法替代的优越性:如蛋白质翻译后的加工过程,包括糖基化,二硫键形成,肽键剪切等,致使许多有天然活性的大分子只能借助于动物细胞表达。鉴于生物安全性原因,用动物细胞表达生产的临床应用生物制品更易被接受。 对生物制品日益迫切的需求是动物细胞大量培养技术发展的动力之一。而重组DNA技术与细胞生物     

无血清培养昆虫细胞(BTI-Tn-5B1-4)的适应过程

昆虫细胞培养是近年来迅速发展起来的动物细胞培养工程中的一个新领域。人们可以利用杆状病毒在昆虫细胞内的感染、复制,来大量生产昆虫病毒作为生物杀虫剂[1]。而昆虫细胞杆状病毒表达载体系统的建立,则可通过昆虫细胞的体外培养大量表达病毒携带的外源基因。实践证明,这…     

简易的杂交瘤细胞载体培养

通常杂交瘤细胞是悬浮培养在扁瓶或搅拌瓶中,其培养的细胞浓度和抗体的产量都不高。大量生产单克隆抗体则要依靠各种细胞培养器、中空纤维、微胶囊、固定化细胞和连续灌注等系统,但这些系统设计复杂,技术要求高,价格昂贵,效果不一。最近Wang G等人采用园片状聚脂载体(Fibra-     

海洋动物的细胞培养与应用

海洋动物的细胞培养与应用童裳亮（青岛海洋大学海洋生命学院２６６００３）动物细胞的规模培养是生物技术（生物工程）的重要内容之一。因为人工培养的动物细胞可以用来分离和鉴定病毒,生产疫苗和昂贵的药物（见表一）。表一人工培养动物细胞的用途动物细胞的短期培养并不困难,但要建立永久性（长生不老）的细胞系,则十分不易。这是因为正常的动物细胞都有其生长、分化、衰老、死亡的规律。     

动物细胞的灌注培养方法

随着基因技术的发展,细胞融合技术和杂交瘤技术在细胞中的应用,ＩＦＮ、ＥＧＦ、ｔ－ｐＡ、ＵＫ、ＥＰＯ等一些高价值的蛋白,相继在动物细胞中表达成功。但是,同传统的微生物细胞培养相比,动物细胞培养存在着细胞倍增时间长、代谢途径复杂、对营养的要求高、对外界环...     

动物细胞生物工程 第1卷

包括的内容有:一,绪论:1.引言 二、细胞培养系统的基本组成部分:2.细胞生物学——基本概念;3.细胞生物——实验;4.细胞生长培养基;5.设备消毒;6.空气消毒;。三、大量细胞培养;7.动物细胞的大批培养和产物;8.动物细胞在连续活动培养基中培养;9.单层细胞生长系统——增殖过程;10.单层细胞生长系统——异型单一过程;     

杂交瘤细胞的大量培养

杂交瘤细胞的大量培养是一项迅速发展的技术。本文评述了杂交瘤细胞培养条件和代谢调控方面的研究进展,包括反应器培养中的过程参数优化、细胞损伤和保护、营养物质利用和有害副产物的形成、细胞生长和单抗分泌的动力学以及长期培养的稳定性等问题。同时,本文也讨论了在生物反应器中培养杂交瘤细胞的操作模式和控制策略的研究工作,特别是近年来备受重视的灌注培养和补料培养。     

杂交瘤细胞的大量培养

杂交瘤细胞的大量培养是一项迅速发展的技术。本文评述了杂交瘤细胞培养条件和代谢调控方面的研究进展,包括反应器培养中的过程参数优化、细胞损伤和保护、营养物质利用和有害副产物的形成、细胞生长和单抗分泌的动力学以及长期培养的稳定性等问题。同时,本文也讨论了在生物反应器中培养杂交瘤细胞和操作模式和控制策略的研究工作,特别是近年来备受重视的灌注培养和补料培养。     

金黄色葡萄球菌肠毒素C3单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法以SEC3重组蛋白免疫Balb／c小鼠,应用细胞融合技术将小鼠的脾细胞与sR／0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法检测筛选及2次有限稀释法克隆化培养,获得目的杂交瘤细胞株,并对其所产生的单克隆抗体进行效价、亲和常数及抗原识别表位等相关性质的鉴定。结果最终获得了两株能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞1C12和2A2,两者细胞培养上清的效价分别为1：3200和1：1600。经分析可知1C12细胞株的亲和力高于2A2细胞株,同时相加实验表明两个单克隆抗体识别抗原表位相同。结论单克隆抗体制备成功,为进一步完善肠毒素SEC3的临床检测奠定了基础。     

用于杂交瘤繁殖的血清补充物

胎牛血清(FBS)已成为用于动物细胞(包括杂交瘤)培养的精选的血清。较廉价的其它血清诸如成牛血清和马血清,它们所含的高浓度免疫球蛋白可能干扰某些筛选测定或单克隆抗体的纯化。为了提供胎牛血清的低廉替代物,研制了一种缺少免疫球蛋白 G 的成牛血清(MBS)。MBS 的免疫球蛋白量非常低(每毫升低于150微克),对血细胞凝集作用、酶标测定和免疫荧光筛选没有干扰。现已用它来进行杂交瘤的常规培养,并产生了与胎牛血清可比拟的结果。然而,结果表明:MBS 不适宜杂交瘤的克隆和融合,但有利于需要大量培养基的克隆繁     

气升式生物反应器在杂交瘤细胞培养中的应用

前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞．通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而且细胞破损技彻底消除,表明该气升式生物反应器给细胞生长、代谢和产物生成提供了理想的培养环境,其设计是成功的。     

微胶囊技术使人单克隆抗体成为可能

Damon Biotech公司正利用微胶囊技术培育人杂交瘤,使之有可能用常规方法生产出浓度为30-100倍的单克隆抗体。此项技术解决了阻碍人单克隆抗体广泛使用的一大难题。今天,大多数单克隆抗体来自小鼠,它们较易生产,但对人体不总是有效的,有时会引起变态反应。在Damon公司的工艺过程中,杂交瘤细胞在液体培养基中的多孔的醣类微胶囊里生长。其养料和代谢产物可通过微胶囊的膜。细胞和高分子量的产物(如单克隆抗体)则保留在胶囊内。生长一段时间后,微胶囊可从培养基中分离出来,经洗涤、破裂,就得到高浓度的单克隆抗体液。     

应用脾内直接免疫法制备鼠痘病毒单克隆抗体

采用脾内直接免疫法和杂交瘤技术获得５株杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养上清液和腹水中单克隆抗体效价分别为１∶８～６４和１０－３～１０－４（ＥＬＩＳＡ）。与其他１０种鼠源性病毒和ＢＨＫ２１细胞无非特异性反应。与传统免疫方法相比较,即节省了抗原、缩短了免疫时间,又可避免因免疫抗原致病性强而导致动物死亡的缺点,是一种具有实际应用的免疫方法。