PCR法快速鉴定眼源性蜡样芽胞杆菌

目的建立一种快速、灵敏、特异的眼源性蜡样芽胞杆菌PCR检测方法,为蜡样芽胞杆菌性眼内炎患者的快速诊断提供依据。方法选择编码蜡样芽胞杆菌细胞毒素的cytK为靶基因设计引物,建立检测眼源性蜡样芽胞杆菌PCR;PCR产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定,基因序列与GenBank比对验证扩增产物;将计数过的5株蜡样芽胞杆菌菌悬液,梯度稀释后分别提取DNA进行PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;分别用眼部常见感染菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、化脓性链球菌、藤黄微球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌和白假丝酵母菌以及枯草芽胞杆菌DNA进行特异性试验;进一步将该方法应用到人工污染致病蜡样芽胞杆菌的房水标本中,并分析其灵敏度。结果5株分离自眼内炎患者标本中的蜡样芽胞杆菌均扩增出360bp左右的DNA片段,测序结果与GenBank比对一致;该法检测在5h内完成,方法灵敏度达7．5～15．0CFU／mL;其他菌株检测未出现非特异性扩增;对模拟感染房水标本的PCR鉴定结果与分离培养对比,二者符合率为100％,模拟标本的检测灵敏度与纯菌结果一致。结论cytK基因为靶基因的PCR用于眼源性蜡样芽胞杆菌的快速检测,具有简便、快速、敏感、特异等特点,为眼内炎患者的快速诊断提供依据,在实际检验工作中有良好的应用前景。     

辽宁省2012‒2015年食源性 蜡样芽胞杆菌污染检测结果分析

摘要：目的 调查辽宁省食品中蜡样芽胞杆菌污染状况,为国家标准的制订与修订提供数据。方法 在辽宁省各市建立监测点,定期对6类食品进行采样,参照历年国家食品安全风险监测工作手册蜡样芽胞杆菌检测标准操作程序对样品进行检测。结果 检测6类食品共2021份,检出蜡样芽胞杆菌183株,检出率达到9.02%。结论 市售婴幼儿食品与熟制米面制品中有一定程度的蜡样芽胞杆菌污染,希望引起政府相关部门的重视,亟待制定相关限量标准,改进检测方法,加大监管力度。     

2016年辽宁省婴幼儿配方食品及 谷类辅助食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因的鉴定

摘要：目的 了解婴幼儿配方食品和谷类辅助食品中蜡样芽胞杆菌的毒力基因携带特点,对辽宁省婴幼儿配方食品和谷类辅助食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况进行调查。方法 依据GB4789.14?2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验》及采用PCR扩增技术和血平板检测的方法对2016年采自辽宁省15个监测点,收集的176份乳源性食品中检出的22株蜡样芽胞杆菌进行10种毒力基因检测。结果 婴幼儿配方食品和谷类辅助食品蜡样芽胞杆菌检出率为12.5%（22/176）,非溶血性的肠毒素Nhe基因、溶血素BL基因、肠毒素T基因和细胞毒素K基因是辽宁省乳源性蜡样芽胞杆菌的主要毒力基因,至少携带2种毒力基因的菌株达到检出菌总数的100.0%。结论 研究结果证实辽宁省婴幼儿配方食品及谷类辅助食品存在蜡样芽胞杆菌污染情况,严格监控婴幼儿配方食品及谷类辅助食品的蜡样芽胞杆菌污染,对于生产出优质婴幼儿配方食品及谷类辅助食品具有重要意义,以期提高婴幼儿食品的质量安全。     

PlcR在炭疽芽胞杆菌A16R中的功能研究

炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽胞杆菌(B. cereus)和苏云金芽胞杆菌(B. thuringiensis)均属于蜡样芽胞杆菌群,在遗传学上有很高的相似性。PlcR (Phospholipase C regulator)在蜡样芽胞杆菌中是十分重要的调控因子,但plcR基因在炭疽芽胞杆菌中发生一个无义突变导致在炭疽芽胞杆菌中产生一个截短PlcR蛋白。为了研究plcR基因对炭疽芽胞杆菌功能的影响,文章以蜡样芽胞杆菌CMCC6330基因组为模板,构建重组表达质粒pBE2A-plcR后导入炭疽芽胞杆菌疫苗株A16R中获得重组菌株,对其进行表型分析。结果显示,炭疽芽胞杆菌重组菌株的溶血活性基本没有恢复,但恢复了部分神经鞘磷脂酶活性,表明将蜡样芽胞杆菌的plcR基因导入炭疽芽胞杆菌后,可以直接激活神经鞘磷脂酶活性。     

从病人血液中分离出侵蚀艾肯氏菌和蜡样芽胞杆菌

从病人血液中分离出侵蚀艾肯氏菌和蜡样芽胞杆菌河北省廓坊市人民医院检验科１０２８００孙波,于似,黄伟我院收治１例由侵蚀艾肯氏菌和蜡样芽胞杆菌所致脑外伤败血症１例。病历简介：患者乔××男２４岁、住院号１４７０２４。被汽车撞倒,昏迷。送至找院急诊。头颅ＣＴ...     

几种芽胞杆菌溶血素BL基因及其溶血素的检测

用PCR方法对几种芽胞杆菌溶血素BL基因进行了检测,结果表明7株蜡样芽胞杆菌含有溶血素BL基因hblA、hblC、hblD,其他枯草芽胞杆菌、多粘类芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌检测到部分溶血素基因;通过血平板培养的方法检测结果表明只有含有溶血素全部基因的菌株才会产生溶血环,从而为筛选不产生溶血素的有益芽胞杆菌奠定一定基础。     

常见4种微生态制剂菌种产淀粉酶的比较

目的 探索常见4种微生态制剂菌种地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌和纳豆芽胞杆菌产生淀粉酶的能力,以筛选和研制动物微生态制剂和饲料添加剂的使用菌种。方法 将各菌种接于淀粉酶试验培养基,培养后滴加稀碘溶液,观察透明圈,判定产酶能力。结果 地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌和纳豆芽胞杆菌都能产生淀粉酶,以蜡样芽胞杆菌产生的淀粉酶较多。结论 4种常见芽胞杆菌产淀粉酶能力依次为：蜡样芽胞杆菌＞纳豆芽胞杆菌＞枯草芽胞杆菌＞地衣芽胞杆菌。     

致病性大肠杆菌和蜡样芽胞杆菌的分离鉴定

【背景】猪只消化道疾病是养猪业上一大重要疾病,给养猪业带来一定的经济损失。大肠杆菌是引起猪腹泻的一种常见病原菌,可以引起不同日龄的猪腹泻,但主要以幼龄猪为主。【目的】旨在分离鉴定引起四川省眉山市一规模化养猪场病猪大规模腹泻的病原菌。【方法】采用常规细菌分离方法结合16S rRNA基因序列的分析方法从发病猪肝脏、胃以及污染的饲料分离鉴定细菌,并对分离株进行小鼠致病性试验、16S rRNA基因遗传进化树分析、毒力基因的检测、药物敏感试验。【结果】从腹泻猪肝脏中分离到一株致病性大肠杆菌,胃中分离到一株蜡样芽胞杆菌,并且追溯到传染源是该猪场饲料。通过检测这两株菌相应的毒力基因发现大肠杆菌不属于肠外致病性型,蜡样芽胞杆菌检测到了nheA、nheB、nheC、bceT、entFM 5种毒力基因;药敏试验表明常规的氨基糖苷类和头孢类抗生素对大肠杆菌抑菌效果较好,红霉素、氟苯尼考、头孢氨苄、头孢哌酮对蜡样芽胞杆菌抑菌效果较好,而蜡样芽胞杆菌对青霉素、阿莫西林等常规药物不敏感。【结论】饲料存在大肠杆菌和蜡样芽胞杆菌的混合污染。     

普洱茶中微生物的筛选及其安全性初步评价

目的在对普洱茶中微生物筛选和鉴定基础上对蜡样芽胞杆菌毒素基因的分布、普洱茶下调毒素基因的表达和改善肠上皮细胞的损伤进行研究。方法分别采用无菌水和沸水泡制普洱茶,获得分离株,通过16SrDNA测序以及生理生化试验确定其归属;对所筛选的菌株进行耐模拟胃肠液能力评价和毒力基因的检测;采用细胞实验和荧光定量PCR技术,研究普洱茶对蜡样芽胞杆菌毒素的抑制作用。结果无菌水浸泡普洱茶获得的45株菌中44株为芽胞杆菌属,沸水浸泡获得的7株菌均为蜡样芽胞杆菌(FBCE01、FBCE06、FBCE10、FBCE14、FBCE20、FBCE26和FBCE29),多重PCR技术结果表明其分别含有毒力基因cytK、nheA和hblD的2种或3种。耐模拟胃肠液实验表明,7株菌均具有很强的耐模拟胃肠液消化能力;细胞实验结果发现,普洱茶汤能显著降低蜡样芽胞杆菌对Caco-2细胞的粘附(P0.05);MTT实验结果显示,普洱茶能有效降低蜡样芽胞杆菌对细胞的损伤;荧光定量PCR技术结果进一步说明,普洱茶使蜡样芽胞杆菌肠毒素的mRNA表达水平下调。结论普洱茶具有抑制蜡样芽胞杆菌毒素的作用。     

野生东亚钳蝎消化道可培养细菌的分离鉴定、耐药性及产消化酶活性

目的分离东亚钳蝎消化道中的可培养细菌,并研究其产消化酶活性和耐药性,探讨消化道细菌对东亚钳蝎消化食物的影响。方法野生东亚钳蝎采用传统细菌分离培养方法分离其消化道内可培养细菌,利用16S rRNA序列进行细菌的分子鉴定;利用平板透明圈法测定可培养细菌产淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶等消化酶的活性;采用药敏纸片扩散法进行消化道可培养细菌的药敏试验。结果在东亚钳蝎消化道中共分离到4个属10种细菌,其中芽胞杆菌属7种,分别为蛋白水解芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、婴儿芽胞杆菌和长形赖氨酸芽胞杆菌;葡萄球菌属、纤维微菌属和短波单胞菌属各1株,分别为松鼠葡萄球菌、纤维化纤维微细菌和泡囊短波单胞菌。对10种细菌的产消化酶活性分析表明,8种细菌有产消化酶活性,占细菌总数的80%;5种细菌有产蛋白酶活性,分别为蛋白水解芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、松鼠葡萄球菌和纤维化纤维微细菌;7种细菌有产淀粉酶活性,分别为蛋白水解芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、松鼠葡萄球菌和婴儿芽胞杆菌;未筛选到产纤维素酶和脂肪酶活性的细菌;蛋白水解芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌和松鼠葡萄球菌可同时产2种消化酶。在药敏试验中,8种细菌对多粘菌素B耐药,5种细菌对四环素耐药,3种细菌对万古霉素耐药。结论东亚钳蝎消化道中可培养细菌的组成相对单一,多数细菌有分泌淀粉酶和蛋白酶的功能,说明东亚钳蝎消化道中的细菌可能有协助其进行食物消化的功能。消化道细菌对抗生素多表现为敏感,推测其生存环境中抗生素的污染较少,同时在对东亚钳蝎人工饲养的场所进行消毒时,要谨慎选择抗生素,防止抗生素使用不当致使东亚钳蝎肠道菌群紊乱引起疾病。     

需氧芽孢杆菌属在医学和兽医学上的重要性

<正> 在绝大部份最近的医学微生物学教科书中,需氧芽胞杆菌章节可能集中在炭疽芽胞杆菌,并谈及众所周知的食物中毒菌——蜡样芽胞杆菌的一些资料。最近个别课本可能指出,蜡样芽胞杆菌是条件致病菌,但更常见的是蜡样和其它需氧芽胞杆菌常被作为污染来菌予以排除。诚然,它们作为污染杂菌都是重要的。如果从另一方面提到,在大自然界、医院及家庭的外环境中,处处都有这些菌大量存在,并产生有抵抗力的菌内芽胞,这些事实将使人吃惊。事实上,一项研究已经显示需氧芽胞杆菌属各个种是注射海洛因和注射器械上最常见的杂菌,也     

学生食堂餐厨垃圾中淀粉的生物利用菌株筛选

目的探索地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌分解大学生食堂厨余中淀粉的能力,以筛选和研制餐厨垃圾生物降解的使用菌种。方法将各菌种接于淀粉酶试验培养基,培养后滴加碘溶液,观察透明圈,判定产淀粉酶能力;收集大学生食堂的厨余,观察三种细菌在不同接种量（5%、10%、15%、20%、25%）、不同接种时间（24 h、48 h、72 h）及不同菌株配伍方式下发酵淀粉的能力。结果地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌都能产生淀粉酶,以地衣芽胞杆菌产生的淀粉酶较多,其次为枯草芽胞杆菌,蜡样芽胞杆菌较少,三种细菌分解厨余中淀粉的最佳接种量都为15%-20%,最佳发酵时间为48 h,枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌各7.5%的接种量混合配伍发酵效果最佳。结论可采用枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌各7.5%的接种量混合配伍发酵学生食堂的厨余中的淀粉。     

炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点

【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。     

蜡样芽胞杆菌族毒素研究进展

蜡样芽胞杆菌族（Bacillus cereus sensu lato）包括几个具有密切系统发育关系的芽胞杆菌物种,产生的毒素种类繁多,备受人们关注。质粒在菌株中的水平转移,会改变其表型、致病性和毒力,同时也带来分类的问题。通过综述几种蜡样芽胞杆菌毒素的结构特性、作用机制及其危害或生物应用,从质粒水平转移的角度介绍蜡样芽胞杆菌族成员错综复杂的关系。     

SigmaK和GerE对芽胞外壁基质结构基因exsB的转录调控

[目的]明确SigmaK和GerE对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)芽胞外壁(exosporium)基质结构基因exsB的转录调控.[方法]序列比较蜡样芽胞杆菌群exsB及启动区序列,利用启动子融合lacZ技术检测exsB启动子的转录活性;通过凝胶阻滞方法检测GerE与exsB启动子的结合.[结果]在蜡样芽胞杆菌群中,exsB及其启动区具有较高的相似性,exsB启动子在芽胞形成期的晚期大量转录;sigK和gerE的突变影响了exsB启动子的转录活性,凝胶阻滞结果显示GerE蛋白与exsB启动子可以结合.[结论]本研究证明exsB在芽胞形成晚期受到SigmaK转录调控,并直接受到GerE的正调控.     

蜡样芽胞杆菌制剂临床用药调查

为临床合理使用蜡样芽胞杆菌制剂提供参考。方法：收集我院2002年1～12月门诊西药房蜡样芽胞杆菌制剂的处方,对其临床合并用药、与抗菌药的合并使用、与其他胃肠道药物合并使用等三方面情况进行统计,并参考有关文献对其临床用药的合理性进行判断分析。结果：我院临床蜡样芽胞杆菌制剂的使用存在不少不合理的情况。结论：蜡样芽胞杆菌制剂的不合理使用应该引起临床医生的注意。     

1株产聚-β-羟基丁酸芽胞杆菌的分离、筛选与鉴定

从浙江省金华市花生地土样中筛选、分离纯化得到1株产聚-β-羟基丁酸编号为PX-95的芽胞杆菌,PHB产量为135.81 mg/L。根据形态特征、生理生化特征初步鉴定为芽胞杆菌属蜡样芽胞杆菌群,16S rDNA序列分析显示PX-95菌株与苏云金芽胞杆菌以及蜡样芽胞杆菌均具有高度同源性,最后采用扩增gyrB（DNA促旋酶B亚单位）基因的方法将其鉴定为苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）。     

三种益生菌对种鸡肠内环境及生产性能的影响

本文考察了蜡样芽胞杆菌、乳杆菌和丁酸芽胞杆菌三种益生菌对种鸡肠内菌群、粪便ｐＨ值、氨含量、硫化物含量、水份等肠内环境指标和生产性能指标的影响,结果表明三种益生菌都能够改善种鸡肠内环境,减少腐败菌和腐败物质的含量,其中蜡样芽胞杆菌和丁酸芽胞杆菌的混合制剂对种鸡生产性能亦有明显的提高作用。     

蜡样芽胞杆菌对羔羊,仔猪和鸡腹泻控制的流行病学分析

本文报道了自中国土壤中分离出的一株蜡样芽胞杆菌(DM423)活菌制剂对羔羊、仔猪和鸡腹泻控制效果的流行病学分析,结果表明,蜡样芽胞杆菌的实验组的腹泻控制效果明显好于抗生素治疗组及未处置组,统计学处理具有显著意义。因此我们相信,利用蜡样芽胞杆菌制剂是一条控制人和动物腹泻的新途径。     

炭疽芽胞杆菌染色体特异序列的筛选及实时定量检测

筛选117条炭疽芽胞杆菌(Bacillusanthracis)特异序列,经双重特异性验证后得到19条理想的特异序列(genomicsignatures),其中6条符合设计TaqMan探针建立实时定量PCR的要求,根据常规PCR检测结果选择其中C04片段与炭疽芽胞杆菌毒性质粒pX01、pX02上的pagA、capB基因建立实时定量PCR检测体系。经试验证实这一体系检测灵敏度达到每PCR反应10~100个拷贝。利用12种相关菌株评价后获得100%特异性,对10份模拟污染标本和20份对照标本检测,所有污染标本均被检出,所有对照标本均为阴性。此方法特异、灵敏、高效,在炭疽芽胞杆菌感染的诊断和环境污染的检测等领域有潜在的应用前景。