辽宁省食源性副溶血性弧菌毒力基因、血清分型及耐药性分析

目的 研究辽宁省2017-2020年市售水产品及其制品中分离的158株副溶血性弧菌的毒力基因、血清分型和耐药性,为食源性疾病的暴发和散发进行评估和预警.方法 采用多重荧光定量PCR技术对毒力基因tlh、tdh和trh进行检测,同时检测血清分型;采用肉汤稀释法测定副溶血性弧菌MIC值并分析其耐药性.结果 158株副溶血性...     

辽宁省2006-2016年集中空调冷却水中 嗜肺军团菌毒力岛基因组携带情况

摘要:目的 了解2006?2016年辽宁地区集中空调冷却水中军团菌携带毒力岛基因情况及其致病性。方法 根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物,采用PCR法对2006?2016年辽宁省各大公共场所委托及抽样检测中分离到的军团菌,进行了毒力岛基因组检测,并与血清型进行比较分析,其中嗜肺军团菌15株、非嗜肺军团菌8株。结果 标准菌株ATCC（33152）12个毒力岛基因全阳性;9株LP1型嗜肺军团菌分别检出9~11个毒力岛基因,6株LP2-14型嗜肺军团菌分别检出6~9个毒力岛基因,8株非嗜肺军团菌分别检出2~11个毒力岛基因。结论 辽宁地区军团菌广泛存在公共环境集中空调冷却系统中,以LP1型嗜肺军团菌居多,LP2-14型嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌也普遍存在,而且所测菌株均携带毒力岛基因,是细菌感染性肺炎的重要隐患病源之一。     

2016-2019年辽宁省肠炎沙门菌分离株分子分型及其耐药性

目的分析辽宁省肠炎沙门菌分离株的分子分型特征及耐药情况,为辽宁省肠炎沙门菌的分子流行病学及防控措施提供参考依据。方法采用PFGE分子分型方法对辽宁省2016-2019年肠炎沙门菌分离株进行分子分型,应用BioNumerics 7.6软件对酶切片段进行聚类分析,明确菌株的特征及同源性;采用最低抑菌浓度(MIC)法测定菌株对14种药物敏感性。结果共获得49株肠炎沙门菌,分子分型结果证明其呈17种PFGE带型,相似度区间为77.4%~100.0%,有2种优势带型;对萘啶酸的耐药率最高,达89.80%,其次氨苄西林的耐药率为69.39%,对3种以上抗生素的耐药率为55.10%。结论辽宁省肠炎沙门菌PFGE分子分型具有独特的优势带型,存在带型较多的特点;肠炎沙门菌分离株多重耐药状况比较严重,对萘啶酸的耐药率最高。     

应激状态下机体与肠道菌群的相互作用及天然多酚干预作用研究

机体长期处于应激状态下,导致焦虑和抑郁等精神疾病的发病率不断上升,严重威胁着人类健康和社会发展。许多研究表明应激会导致肠道菌群的紊乱,影响神经通路发生精神性疾病、使细菌移位产生免疫炎症。天然多酚类化合物具有多种生物活性,但绝大部分难以直接进入体内,而是在肠道中被肠道菌群降解。多酚可以调整机体应激反应状态下被扰乱的肠道菌群的组成和结构,使之恢复动态平衡,进而改善机体各种应激因素所致的焦虑和抑郁等症状。     

2016年辽宁省婴幼儿配方食品及 谷类辅助食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因的鉴定

摘要：目的 了解婴幼儿配方食品和谷类辅助食品中蜡样芽胞杆菌的毒力基因携带特点,对辽宁省婴幼儿配方食品和谷类辅助食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况进行调查。方法 依据GB4789.14?2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验》及采用PCR扩增技术和血平板检测的方法对2016年采自辽宁省15个监测点,收集的176份乳源性食品中检出的22株蜡样芽胞杆菌进行10种毒力基因检测。结果 婴幼儿配方食品和谷类辅助食品蜡样芽胞杆菌检出率为12.5%（22/176）,非溶血性的肠毒素Nhe基因、溶血素BL基因、肠毒素T基因和细胞毒素K基因是辽宁省乳源性蜡样芽胞杆菌的主要毒力基因,至少携带2种毒力基因的菌株达到检出菌总数的100.0%。结论 研究结果证实辽宁省婴幼儿配方食品及谷类辅助食品存在蜡样芽胞杆菌污染情况,严格监控婴幼儿配方食品及谷类辅助食品的蜡样芽胞杆菌污染,对于生产出优质婴幼儿配方食品及谷类辅助食品具有重要意义,以期提高婴幼儿食品的质量安全。     

辽宁省溶藻弧菌REP-PCR和 PFGE分子分型、耐药谱的研究

目的利用PFGE和REP-PCR两种分型方法对溶藻弧菌进行分子分型和亲缘关系的研究;并将两种分型方法进行对比,并结合对抗生素耐药试验结果对其关联性进行初步探讨。方法应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对辽宁省2017年食品中分离的39株溶藻弧菌进行分型,应用BN(7.6版本)软件分析同源性。以基因外重复回文序列(REP)为引物,对40株溶藻弧菌DNA进行扩增,得到DNA指纹图谱,并利用SPSS 13.0统计软件对DNA扩增图谱进行聚类分析,同时将两种聚类分析结果进行比较,并用肉汤稀释法测定对15种抗生素的耐药性。结果 PFGE和REP-PCR两种方法的聚类分析结果均可分出两种优势带型A型和B型,且包含的菌株一致。PFGE分型方法在一些菌株中出现的DNA条带更多更复杂一些,分辨力指数(DI)为0.974,REP-PCR分型方法的DI为0.936。溶藻弧菌对头孢唑啉耐药率最高达57.5%,其次是氨苄西林(20.0%)和红霉素(12.5%),三重耐药菌比例达12.5%。结论 PFGE和REP-PCR两种方法均可以对溶藻弧菌进行分型,且均具有较好的分型能力,分辨力和再现性都很好,但PFGE分型方法的分辨力更优于REP-PCR分子分型。耐药菌株间带型具有高度同源性,优势带型菌株易耐药。综上所述,PFGE和REP-PCR两种分子分型方法对于评估溶藻弧菌流行及分布规律均是有用的,并且分型结果是一致的,都可以对菌株间亲缘关系进行有效溯源,因此在溶藻弧菌所致疾病爆发流行时,在普遍缺乏昂贵的PFGE专业设备和昂贵的配套BN软件以及专业操作人员的实验室,可以应用REP-PCR方法和SPSS统计软件代替PFGE方法和BN软件对菌株进行快速有效溯源。     

脉络膜黑色素瘤中整合素α_vβ_3表达的研究

目的:整合素α_vβ_3为整合素家族成员之一,是一类跨膜粘附分子,其在多种肿瘤细胞及新生内皮血管细胞中高表达而在成熟血管内皮、上皮细胞及正常细胞中表达较低或无表达。基于这些特征,整合素α_vβ_3近年来成为分子影像研究的热点之一。鉴于整合素α_vβ_3在人眼脉络膜黑色素瘤中是否存在表达尚不可知,本课题拟研究整合素α_vβ_3在人脉络膜黑色素瘤中表达情况,为以整合素α_vβ_3为基础的分子显像提供理论基础。方法:培养人源脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1,使用蛋白免疫印迹方法检测整合素α_vβ_3在OCM-1中表达水平,并使用免疫组化方法检测人脉络膜黑色素瘤病理切片中整合素α_vβ_3表达分布。结果:蛋白免疫印迹实验表明在OCM-1细胞株中存在整合素α_vβ_3表达,其表达水平介于已知高表达整合素α_vβ_3的头颈鳞癌细胞株HEP-2和较低表达整合素α_vβ_3的头颈鳞癌细胞株CNE-1之间,免疫组化方法检测人脉络膜黑色素瘤病理切片中也存在整合素α_vβ_3表达。结论:人脉络膜黑色素瘤中具有整合素α_vβ_3表达,可以为后期研究基于整合素α_vβ_3的分子显像技术提供依据。     

辽宁省2012年至2013年呼吸道腺病毒型别鉴定

目的基于国家重大传染病防治科技重大专项项目平台,对2012年1月至2013年12月间辽宁省采集的发热伴呼吸道症状患者标本进行检测,了解腺病毒的流行情况并对其型别进行分析。方法采集具有发热伴呼吸道症状患者的咽拭标本470份,经多重PCR检测,检出阳性标本30份,选取阳性标本进行病毒分离,共获得人类腺病毒(Human Adenovirus,HAdv)毒株20株。将所得腺病毒的核酸进行巢式PCR扩增并进行测序,获得Hexon基因序列。将基因序列在NCBI进行Blast比对。结果在分离的得到的20株腺病毒毒株中包含HAdv-2型6株,HAdv-3型11株,HAdv-5型2株,HAdv-14型1株。结论2012至2013年间,辽宁省引发发热伴呼吸道症状的腺病毒型别以2型和3型为主,同时也有少量其他型别检出。     

黄连-黄芩药对化学成分的UPLC-PDA-MS分析

本文建立了黄连-黄芩药对化学成分的UPLC-PDA-MS分析方法。实验采用ACQUITY UPLC BEH C18柱,流动相为0.05%甲酸水和甲醇梯度洗脱;检测波长280 nm;MS一级全扫描模式。综合分析标准品及不同样品的色谱峰保留时间、紫外光谱及MS一级全扫描质谱图,归属了黄连-黄芩提取液中的12个主要色谱峰,鉴别出8种成分,推断出2种成分,同时对鉴别出的8种成分进行了定量,被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.9991),精密度、重复性的RSD均小于5.0%,加样回收率基本在95%～105%内。本方法快捷、准确,重复性好,能同时测定8个主要化学成分,可较全面地控制黄连-黄芩药对化学成分的含量。     

辽宁省食源性副溶血性弧菌PFGE分子分型及血清型、耐药谱

目的分析辽宁省副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别及血清型、耐药谱,探讨辽宁省副溶血性弧菌污染的同源性,为食源性疾病溯源和预警提供基础。方法对50株从辽宁省2015年食源性疾病和食品中分离的副溶血性弧菌进行PFGE分子分型、血清学分型、药物敏感试验,采用BioNumerics version 6.6软件进行分析,比较同源性。结果 50株副溶血性弧菌共分为19个血清型,食源性疾病分离株分为5个血清群,主要的血清型为O3群,其次为O1群;食品分离株分为9个血清群,主要的血清型为O3群,其次为O1和O4群。50株副溶血性弧菌对15种抗生素的耐药试验,对头孢唑啉耐药率最高达72%。50株副溶血性弧菌共分为4种PFGE优势带型,相似度为90.8%~100.0%。结论辽宁省食源性副溶血性弧的血清型以O3群和O1群为主,致病菌流行株血清型为O3:K6;食品中分离菌株血清型和PFGE带型非常分散,提示这些多为遗传不相关菌株。PFGE图谱可看出,绝大部分相同血清型菌株的PFGE带型相似度很高,O3与O1血清型菌株有高度同源性密切相关,耐药菌株间PFGE带型相似度很高,均具有高度同源性。相比2014年的耐药情况,对头孢唑啉耐药率显著增高。另外,少数菌株出现多重耐药,耐药情况不容乐观。