不结球白菜根尖体细胞染色体制片及其二倍体和四倍体有丝分裂过程观察

以不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)根尖为材料,对染色体制片过程中根长(小于0.5 cm、0.5 ～ 1.0 cm、1.0～2.0 cm及大于2.0 cm)、预处理方法、预处理剂种类(2 mmol·L-1 8-羟基喹啉、2 mmol·L-1 8-羟基喹啉与质量浓度0.2g·L-1秋水仙素等体积混合液、质量浓度0.2g·L-1秋水仙素、饱和对二氯苯、质量浓度20或40 mg·L-1放线菌酮、质量浓度40mg·L-1放线菌酮与2 mmol·L-1 8-羟基喹啉等体积混合液)及预处理时间(1.0～3.5 h)进行了比较和筛选;在此基础上,对二倍体和四倍体不结球白菜根尖体细胞有丝分裂过程进行观察.结果表明:根长度对分裂相的数量有显著影响;根长1.0～2.0 cm,分裂相相对较多,占细胞总数的64.75％.冰冻预处理22 ～ 23 h,能获得一定量的分裂相.采用不同的预处理剂及预处理时间,分裂相的数量及染色体形态有明显差异;用质量浓度40 mg·L-1放线菌酮溶液处理3.5h,分裂相数量最多,但易导致染色体加倍;用质量浓度20mg·L-1放线菌酮预处理3.5h,染色体长且着丝点及随体清晰,且分裂相较多,占细胞总数的53.65％.因而,根长度以1.0 ～2.0 cm为宜,适宜的预处理方法为用质量浓度20 mg·L-1放线菌酮浸泡2.0～3.0 h.二倍体及四倍体不结球白菜根尖体细胞有丝分裂过程基本相似,在有丝分裂的间期、前期、中期、后期和末期染色体的行为基本一致,但在四倍体的有丝分裂过程中会出现多价体、染色体桥、落后染色体、染色体异常分离及内源有丝分裂等异常现象.     

风信子根尖预处理及核型分析

采用秋水仙素、8-羟基喹啉、放线菌酮3种试剂及秋水仙素与8-羟基喹啉的混合液、冰水混合物等,按不同时间梯度对风信子‘Pink Pearl’根尖进行预处理,以获得进行染色体分析的清晰制片,为风信子品种染色体分析及其微结构研究奠定基础。结果表明:‘Pink Pearl’根尖经5种预处理后,再经固定、解离、染色、压片均可获得分散良好、形态正常、易于计数并进行核型分析的高质量染色体制片。秋水仙素和8-羟基喹啉的最适预处理时间分别是12h、20h;放线菌酮、秋水仙素与8-羟基喹啉混合液、冰水混合物的最适预处理时间均是24h。染色体核型分析表明:风信子的核型公式为2n=2x=16=6m+4sm+2smsat+4st;核不对称系数为60.2%,为2C核型。     

百日草根尖和花药愈伤组织染色体制片技术

以种子萌发根尖和花药愈伤组织为材料,研究了取样时间、预处理方法对百日草染色体制片的影响。结果表明:根尖上午8:00～9:00,花药愈伤继代3～5d上午9:00～10:00为最佳取样预处理时间;采用三种药剂预处理活体根尖,以4℃下饱和对二氯苯溶液或0.002mol/L的8-羟基喹啉液预处理8h效果最佳,花药愈伤则以饱和对二氯苯溶液预处理6h效果最佳。本实验的预处理温度是固定的,可克服预处理随季节和时间温度的变化而带来的不稳定性,且百日草花药愈伤染色体观察为首次报道。     

8-羟基喹琳和对苯二酚对几种常用植物材料根尖细胞有丝分裂中期指数的影响

为了了解8-羟基喹啉（8-Hydroxyquinoline）和对苯二酚（P-hydroquinone）对蚕豆、洋葱和大蒜几种实验室常用植物有丝分裂材料根尖细胞中期分裂指数的效应．应用不同浓度的8-羟基喹啉和对苯二酚（0.002mol／L、0.004mol／L、0.006mol／L、0.008mol／L）分别处理3种植物根尖细胞．结果表明,8-羟基喹啉在0.004mol／L时处理洋葱和大蒜根尖,中期分裂指数较高：对苯二酚在0．004mol／L时处理蚕豆根尖,中期分裂指数较高;而对苯二酚处理洋葱和大蒜根尖时最佳浓度是0.008mol／L．该浓度根尖细胞有丝分裂指数达到最大值。     

用风油精预处理制备植物染色体标本的新方法

目前,在植物细胞染色体的研究工作中,常用的染色体预处理药物为秋水仙素、对二氯苯、α-溴萘和8-羟基喹啉等。我们经过多次对水稻、绿豆等小型染色体植物的摸索,发现风油精也可作为一种新的植物染色体预处理药物。水稻、绿豆的根尖经风油精预处理后,可以省去常规的酸解压片和酶解去壁低渗步骤而直接捣碎涂片,制得的标本可获得良好的染色体图象。我们将这一方法称为风油精法。何凤发等将此法加以改进应用于高梁、芝麻和荞麦等小型染色体植物中也得到了满意的结果。因而,风油精法比较适合于小型染色体植物的染色体标本制备。本文介绍这一新方法。     

一串红染色体制片技术优化与计数

以一串红商品种‘展望红’萌发种子根尖、幼苗茎尖生长点以及嫩叶为实验材料,利用常规压片法比较不同材料、不同预处理液及预处理时间对一串红染色体制片的影响,探索实验预处理条件。然后利用去壁低渗法对一串红4个商品种和一串红株型突变体及其野生型进行染色体计数。实验结果显示:以一串红萌发种子的根尖为实验材料,用0.002 mol/L 8-羟基喹啉预处理3~4 h压片所得染色体效果最好;分别观察6个供试品种(系)分散良好、清晰的30个分裂相细胞,86.7%及以上的细胞染色体数目为2n=44。研究表明,一串红株型突变体与野生型及4个商品种在染色体数目上没有差异。     

小水榕染色体数目及核型分析

以小水榕根尖为材料,通过取材时间,8-羟基喹啉、饱和对二氯苯2种药剂预处理,并以细胞中有丝分裂相的数目、染色体的清晰度、分散程度为指标,探索出适于小水榕染色体分析的方法.结果表明:小水榕有丝分裂中期在一天的16:00达到高峰期,取样时间确定在16:00.饱和对二氯苯水溶液预处理2 h,卡诺氏固定液固定2 h,1 mol/L盐酸60 ℃水浴中解离3 min～4 min,并以醋酸洋红染色效果较好.小水榕核型为2 n=2 x=30=12 m+14 sm+4 st,属于"2B"类型.     

秋水仙素对洋葱根尖细胞染色体结构变异的影响

用0.05%和0.1%秋水仙素溶液对洋葱Allium cepa根尖进行控时处理,研究不同秋水仙素浓度和不同处理时间对洋葱根尖细胞有丝分裂畸变的影响。结果显示,秋水仙素有促进细胞有丝分裂染色体停滞在中期的能力;不同固定时间对洋葱根尖细胞有丝分裂有影响;秋水仙素对洋葱根尖细胞染色体有畸变效应,诱导产生畸变的能力受溶液浓度和处理时间的影响。     

莲藕根尖染色体制片与免疫荧光染色技术的优化

在细胞遗传学研究中,莲藕根尖染色体制片比较困难,研究了莲藕根尖染色体制片过程中适宜取材的根尖长度、有丝分裂指数、预处理试剂和处理时间、固定时间、酶解与低渗时间等相关因素,并对莲制片进行了免疫荧光染色。结果表明:根尖长为1.5 cm左右时有丝分裂指数最高,预处理采用冰水冷冻处理24 h分裂相较多,染色体形态清晰;用4%多聚甲醛固定1h,染色体形态较好;采用2.5%纤维素酶和2.5%果胶酶混合液37℃消化30 min,酶解较彻底,细胞质残留少,染色体分散良好;1×PBS低渗30 min,染色体形态较好;免疫荧光染色后经检测可观察到较强的信号。     

陇东野生紫花苜蓿的核型分析

采用0.15%秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉的混合液对陇东野生紫花苜蓿萌发种子的根尖预处理3h,室温条件下用1%果胶酶和1%纤维素酶酶解1.5h,得到清晰染色体制片.核型分析结果显示,陇东野生紫花苜蓿染色体数目为32条,具有1对随体,为2B核型,染色体核型组成公式为2n=32=30m(2SAT)+2sm,染色体长度组成公式为2n=2L+18M2+8M1+4S.     

锦鸡儿属植物染色体制片与3个种的核型分析

对锦鸡儿属植物根尖染色体制片中的几种预处理、解离、染色方法进行了比较.结果表明,用0.002 m o l/L8-羟基喹啉和饱和对二氯苯混和液(1∶1)预处理,1 m o l/L HC l预热60℃解离,改良苯酚品红染色效果较好.对锦鸡儿属植物3个种的体细胞中期染色体制片,核型分析结果表明,小叶锦鸡儿(C arag ana m icrophy lla)为2n=2x=16=8m(2SAT) 4sm 4M,中间锦鸡儿(C.interm ed ia)为2n=2x=16=6m 8sm 2M,青海锦鸡儿(C.ch ing-ha iensis)为2n=2x=16=4m 8sm 4M 2B,核型不对称性为“2A”型.此外,还发现这3种植物的根尖细胞中均有内源有丝分裂现象.     

高粱的染色体组型

高粱因其染色体较小,形态上较难鉴别,至今国内尚缺详细报道。本文应用了去壁、低渗、火焰干燥制片法,一次获得了可供组型分析的大量细胞,取得了较为满意的结果,现报道如下。 材料和方法 所用材料为高粱品种“白五大两”。由本校遗传实验室提供。萌发的种子根长0.5—1.0厘米时切下根尖,在0.002M 8-羟基喹啉的0.2％秋水仙素溶液中处理3小时,然后在0.075M     

甜瓜有丝分裂染色体制片技术及核型分析

以萌发种子根为材料,研究预处理取样时间和预处理药剂对甜瓜染色体制片的影响.结果表明,上午8:00左右为最佳预处理取样时间,可以观察到近14%的中期分裂相;在4种药剂预处理活体根尖中,以添加对二氯苯(饱和)的放线菌酮(40 m g.L-1)水溶液的效果最佳.用此方法对厚皮和薄皮两种类型甜瓜进行核型分析,结果发现:两类甜瓜核型相似,都具有一对随体,核型均为2A型,核型公式均为2n=2x=24=14m+10st(2SAT).但两类甜瓜的染色体总长、平均长度以及随体在染色体上的分布都不相同.     

高山榕染色体制片优化及核型分析

以高山榕种子的根尖为材料进行染色体常规压片,比较不同预处理方法和解离方法对高山榕染色体制片的影响,以选择最优的压片方法制片并进行核型分析。结果显示,预处理24 h的总体效果优于12 h;3种预处理液的总体作用效果为0.05%秋水仙素>混合液>0.002 mol.L-18-羟基喹啉,综合比较后认为混合液低温4℃处理24 h为最佳预处理方法。解离方法选择1 mol.L-1HCl中60℃水浴2~3 min较为适宜。首次报道了高山榕核型公式为2n=2x=30=22m(2SAT)+6sm+2T,核型不对称系数为61.54%,核型属于Stebbins核型分类中的2C类型。     

利用染色体G显带技术鉴定人永生细胞实验条件初探

目的:探索利用染色体G显带技术鉴定人永生淋巴细胞的最佳实验条件。方法:在常规染色体制片技术的方法和手段的基础上,分别观察不同PHA浓度和培养时间对永生淋巴细胞分裂增殖的影响;然后,选择不同浓度秋水仙素处理细胞,观察染色体分散程度和中期分裂相的形态。结果:在永生淋巴细胞培养48h,PHA终浓度为0.1mg/mL,秋水仙素终浓度为0.04μg/mL,且其作用时间为1.5~2h的条件下,所获得的细胞染色体标本分裂相较多、染色体较长、分散较好、利于带型分析。结论:利用染色体G显带技术鉴定人永生淋巴细胞提供了技术保证,降低了实验成本,并且缩短了实验时间。     

增强UV-B辐射对小麦根尖分裂期细胞肌动蛋白的影响

以增强UV-B（10．08kJ·m^-2·d^-1）辐射后的小麦根尖细胞为材料,异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽（FITC-Ph）为探针,利用激光共聚焦扫描显微镜,观察分析小麦根尖分裂期细胞肌动蛋白在分裂周期的分布及形态变化。结果表明：uV-B辐射处理后,问期细胞肌动蛋白纤丝排列紊乱;前期细胞周质中肌动蛋白纤丝变为短的片段,点状荧光随机分布在周质;中期细胞荧光强度明显减弱,明亮的肌动蛋白片段消失,点状荧光消失;有丝分裂后期到末期,成膜体区域肌动蛋白纤丝或成弥散状或完全消失,且出现落后染色体、染色体桥、不均等分裂及三束分裂等染色体畸变类型和异常分裂现象。     

中华鲟染色体组型的研究

材料和方法 试验鱼于1983年冬天和1984年春天取自湖北省武汉市市场(长江水系),二雌一雄,体长为2.0—3.2米,体重为99—220公斤。取肾脏组织在无菌的条件下用PBS溶液进行多次洗涤后,用剪刀剪成小块,再用0.02％胰蛋白酶消化15分钟,离心分离肾细胞,进行短期培养,用0.075M氯化钾溶液低渗处理,气干法制片,吉姆萨染色。在油镜下观察、计数、确定染色体数目。然后选择分散好、形态清晰的中期分裂相做显微镜照相,将标准的中期分裂相剪下,按同源染色体配对、测量,并用统计学方法计算其臂比和相对长度。根据Levan等(1964)提出的按着丝点的位置进行染色体的命名和分类。     

鹰嘴紫云英根尖细胞有丝分裂同步化诱导

采用羟基脲和氟乐灵结合的双阻断方法处理鹰嘴紫云英根尖,以诱导根尖细胞有丝分裂中期同步化。结果表明,用1．25mmol．L^-1羟基脲处理18h和1μmol·L^-1氟乐灵处理6h的细胞有丝分裂中期指数可达80％,且有丝分裂正常,染色体形态良好,未见到染色体畸变的现象。     

采用分裂阻断法研究黄鳝的核型和减数分裂

本实验采用在黄鳝腹腔内注入秋水仙素,然后取未成熟性腺进行空气干燥法制片,Ｇｉｅｍｓａ染色,获得了较好的性原细胞有丝分裂中期相,同时还观察到减数分裂阻断后的各期分裂相。并发现黄鳝的第九对染色体在后期Ｉ提前分离;在减数分裂过程中出现多倍性终变期和二倍性不减数细胞,后者为鱼类多倍体育种提出了新的思路。本实验用性原细胞有丝分裂中期相和联会复合体进行了核型分析,结果与前人研究结果相符。     

绒毛滋养层细胞直接制备染色体方法

本方法对绒毛滋养层细胞直接制备染色体作了改进。分别将制片手法,低渗液配制,秋水仙素浓度与固定时间等方面给以改良。后三者不同于Simoni及国内报道,作者认为低渗液成分,秋水仙素浓度与固定时间是不可分割与相互影响的。此法所得分裂相中,染色体形态及分散良好和显带清晰,方法稳定,有利于孕早期诊断的染色体结构分析。