中华蚊母树染色体制片及核型分析

以中华蚊母树根尖为材料,采用常规压片法制片,比较材料的不同采集时间、预处理方法、固定剂、解离方法、解离时间及染色方法对中华蚊母树根尖染色体制片的影响.结果表明最佳的制片技术为:取材时间为上午9:00~11:00或下午13:00~15:00,以饱和对二氯苯预处理3 h,用1 mol?L-1盐酸60℃下解离8 min,卡诺固定剂固定,以改良石碳酸品红染色10 min.以该最佳制片方案对中华蚊母树进行体细胞染色体核型分析,首次揭示了中国特有植物———中华蚊母树体细胞染色体数目为2n=2x=24,染色体基数x=12,染色体核型公式为2n=2x=24=12m(2SAT)+10sm+2st,主要由中部和近中部着丝点染色体组成;染色体相对长度组成为2n=24=2L+8M2+12M1+2S,核型不对称指数为64.29%,属于2A型.结果显示中华蚊母树核型对称程度较高,在进化中属于比较原始的类型.     

风信子根尖预处理及核型分析

采用秋水仙素、8-羟基喹啉、放线菌酮3种试剂及秋水仙素与8-羟基喹啉的混合液、冰水混合物等,按不同时间梯度对风信子‘Pink Pearl’根尖进行预处理,以获得进行染色体分析的清晰制片,为风信子品种染色体分析及其微结构研究奠定基础。结果表明:‘Pink Pearl’根尖经5种预处理后,再经固定、解离、染色、压片均可获得分散良好、形态正常、易于计数并进行核型分析的高质量染色体制片。秋水仙素和8-羟基喹啉的最适预处理时间分别是12h、20h;放线菌酮、秋水仙素与8-羟基喹啉混合液、冰水混合物的最适预处理时间均是24h。染色体核型分析表明:风信子的核型公式为2n=2x=16=6m+4sm+2smsat+4st;核不对称系数为60.2%,为2C核型。     

华中五味子染色体制片优化及核型分析

比较不同预处理和解离方法对华中五味子染色体制片的影响,采用华中五味子的萌发芽、新枝茎尖、幼叶等不同部位进行染色体制片,观察500个细胞,比较不同部位中期细胞和适宜核型分析的中期细胞所占比例,结果显示,0.1%秋水仙素预处理1 h、1 mol/L盐酸常温解离12 min制片所得染色体分散效果最佳。5~15 mm幼叶侧边组织制片最适宜华中五味子核型分析。核型公式为2n=2x=28=26 m 2sm,核型不对称系数(As.k)为56.30%,属于1B类型,核型对称性程度高,表明华中五味子在进化中处于比较原始类型。     

用组培芽鉴定组培材料染色体数目的方法

通过与根尖比较研究组培芽制片方法的结果表明:用组培芽制片在预处理方法上,以低温(0℃)结合0.002 mol*L-1 8-羟基喹啉处理4～4.5 h的效果较好;解离时,以2.5%混合酶液(纤维素酶与果胶酶各占2.5%)于25℃下解离4～4.5 h效果较好.利用所确立的组培芽制片程序,鉴定出新创制的Cucumis属种间杂种双单倍体和马铃薯无性变异系的染色体分别为2n=19和2n=96.证明以组培芽为材料进行染色体制片是一种快捷而有效的鉴定组培材料染色体数目的方法.     

芒属植物核型分析技术体系的建立

芒属植物(Miscanthus)属禾本科多年生高大草类,多分布于热带非洲至亚洲东南部.近年来在欧美国家受到广泛的关注,被认为是一种开发潜力巨大的生物质能源.本文研究了芒属植物染色体制片过程中的几个关键步骤,建立了较成熟的核型分析技术体系:预处理液为0.2%秋水仙素+o.002mol/L8-羟基喹啉混合溶液,常温下处理2h;卡诺氏固定液在4℃下固定20 h;解离步骤为:先用1 mol/L盐酸在60℃下处理15 min,再用2%纤维素酶在28℃下处理1h;再固定,压片,用改良卡宝品红染色.同时,对采自广西柳州的芒进行了核型分析,结果显示其体细胞染色体数目为38条,核型公式是2n=2x=38=32m+6sm,按Stebbins核型标准分类属于2B型.     

陇东野生紫花苜蓿的核型分析

采用0.15%秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉的混合液对陇东野生紫花苜蓿萌发种子的根尖预处理3h,室温条件下用1%果胶酶和1%纤维素酶酶解1.5h,得到清晰染色体制片.核型分析结果显示,陇东野生紫花苜蓿染色体数目为32条,具有1对随体,为2B核型,染色体核型组成公式为2n=32=30m(2SAT)+2sm,染色体长度组成公式为2n=2L+18M2+8M1+4S.     

黄果龙葵和龙葵染色体制片优化及核型分析

该实验以黄果龙葵和龙葵的根尖为实验材料,进行不同的预处理、固定和解离,确定出各种材料适合于核型分析的制片方法。结果表明:龙葵于15℃条件下经0.05%秋水仙素预处理2.5h,固定后用1mol/L HCl酸解后,染色观察,得到的染色体分散,易于染色体计数和形态观察。用此方法对黄果龙葵和龙葵进行核型分析,结果发现:黄果龙葵和龙葵都属于小型染色体,黄果龙葵为四倍体,核型公式为K(4n)=48=4sm+44m,核型不对称系数为56.22%,属于2B核型。龙葵为六倍体,核型公式为K(6n)=72=72m,核型不对称系数为55.89%,属于1B核型。     

甜瓜有丝分裂染色体制片技术及核型分析

以萌发种子根为材料,研究预处理取样时间和预处理药剂对甜瓜染色体制片的影响.结果表明,上午8:00左右为最佳预处理取样时间,可以观察到近14%的中期分裂相;在4种药剂预处理活体根尖中,以添加对二氯苯(饱和)的放线菌酮(40 m g.L-1)水溶液的效果最佳.用此方法对厚皮和薄皮两种类型甜瓜进行核型分析,结果发现:两类甜瓜核型相似,都具有一对随体,核型均为2A型,核型公式均为2n=2x=24=14m+10st(2SAT).但两类甜瓜的染色体总长、平均长度以及随体在染色体上的分布都不相同.     

锦鸡儿属植物染色体制片与3个种的核型分析

对锦鸡儿属植物根尖染色体制片中的几种预处理、解离、染色方法进行了比较.结果表明,用0.002 m o l/L8-羟基喹啉和饱和对二氯苯混和液(1∶1)预处理,1 m o l/L HC l预热60℃解离,改良苯酚品红染色效果较好.对锦鸡儿属植物3个种的体细胞中期染色体制片,核型分析结果表明,小叶锦鸡儿(C arag ana m icrophy lla)为2n=2x=16=8m(2SAT) 4sm 4M,中间锦鸡儿(C.interm ed ia)为2n=2x=16=6m 8sm 2M,青海锦鸡儿(C.ch ing-ha iensis)为2n=2x=16=4m 8sm 4M 2B,核型不对称性为“2A”型.此外,还发现这3种植物的根尖细胞中均有内源有丝分裂现象.     

一串红染色体制片技术优化与计数

以一串红商品种‘展望红’萌发种子根尖、幼苗茎尖生长点以及嫩叶为实验材料,利用常规压片法比较不同材料、不同预处理液及预处理时间对一串红染色体制片的影响,探索实验预处理条件。然后利用去壁低渗法对一串红4个商品种和一串红株型突变体及其野生型进行染色体计数。实验结果显示:以一串红萌发种子的根尖为实验材料,用0.002 mol/L 8-羟基喹啉预处理3~4 h压片所得染色体效果最好;分别观察6个供试品种(系)分散良好、清晰的30个分裂相细胞,86.7%及以上的细胞染色体数目为2n=44。研究表明,一串红株型突变体与野生型及4个商品种在染色体数目上没有差异。     

‘陇东’紫花苜蓿原生质体最佳分离条件

以‘陇东’紫花苜蓿（Medicago sativa L.cv.‘Longdong’）下胚轴愈伤组织为材料,研究酶液组合、酶解时间、酶液渗透压、愈伤组织继代培养时间及预处理措施对原生质体分离效果的影响。结果表明：获得产量最高（8.8×105个·g-1）、活力最高（88.55%）的原生质体最佳酶液组合为2%纤维素酶＋0.5%果胶酶＋0.3%崩溃酶、酶解时间为10h、酶液渗透压即甘露醇浓度为0.55mol·L-1,愈伤继代培养天数为12d、预处理措施为4℃、黑暗条件下放置24h。     

小水榕染色体数目及核型分析

以小水榕根尖为材料,通过取材时间,8-羟基喹啉、饱和对二氯苯2种药剂预处理,并以细胞中有丝分裂相的数目、染色体的清晰度、分散程度为指标,探索出适于小水榕染色体分析的方法.结果表明:小水榕有丝分裂中期在一天的16:00达到高峰期,取样时间确定在16:00.饱和对二氯苯水溶液预处理2 h,卡诺氏固定液固定2 h,1 mol/L盐酸60 ℃水浴中解离3 min～4 min,并以醋酸洋红染色效果较好.小水榕核型为2 n=2 x=30=12 m+14 sm+4 st,属于"2B"类型.     

盐生植物盐地碱蓬酪氨酸酶的酶学特性

酪氨酸酶是植物甜菜素生物合成的限速酶,但是,其酶学特性尚不了解。以黑暗培养3d的盐地碱蓬幼苗为材料,采用NaF抽提、饱和硫酸铵沉淀法提取盐地碱蓬中的酪氨酸酶,以研究其酶学特性。结果表明,酪氨酸酶氧化活性的最适温度为35℃,最适pH值为6.6,最适条件下Km=1.09mmol·L-1,Vmax=71.43μmol·g-1（FW）·min-1;酪氨酸酶羟化活性的最适温度为40℃,最适pH值为6.6,最适条件下Km=3.16mmol·L-1,Vmax=0.645μmol·g-1（FW）·min-1。Na2S2O3是盐地碱蓬酪氨酸酶的强效抑制剂,0.05mol·L-1Na2S2O3几乎完全抑制酪氨酸酶氧化及羟化活性。而0.01mmol·L-1的Cu2＋可以显著激活酪氨酸酶的氧化及羟化活性,分别为对照的126%和128.2%。这些结果表明盐地碱蓬中酪氨酸酶的羟化活性是影响甜菜红素合成速率的关键,也为深入研究盐地碱蓬酪氨酸酶在甜菜素合成中的作用及其与环境之间的关系奠定了基础。     

4-丁内酰胺水解酶法制备γ-氨基丁酸

以吡咯烷酮为唯一碳源,从采集的土样中分离、筛选得到具有4-丁内酰胺水解酶活性的菌株.采用响应面分析法对该菌株的产酶培养基组分进行了优化研究并对酶促转化反应条件也进行了研究.结果表明:编号为HHSW-16的菌株水解活性最高.优化后的培养基组成为:葡萄糖11.50 g·L-1,牛肉膏6.35 g·L-1,酵母粉5.58 g...     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞凋亡及VCAM-1/ICAM-1 表达的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对血管内皮细胞增殖、凋亡及VCAM-1/ICAM-1表达的影响,探讨As2O3对血管内皮细胞增殖生长以及炎症反应的影响。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养,以不同As2O3浓度及时间对其进行干预。采用CCK-8测定细胞增殖活性,流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测VCAM-1mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞间黏附分子(VCAM-1)及血管细胞黏附分子(ICAM-1)的表达情况。结果:当As2O3浓度在3μmol.L-1时HUVEC培养24 h的的凋亡率为(0.134±0.03)%,48 h为(3.305±0.53)%,72 h为(3.748±0.84)%(P<0.05),凋亡率均在一较低水平。当As2O3浓度>3μmol.L-1时HUVEC凋亡率明显增加(P<0.01)。不同浓度As2O3作用HUVEC48 h后检测上清液中ICAM-1与VCAM-1浓度时发现1μmol.L-1时VCAM-1表达即开始增加(123.32±3.78 mmol.L-1,P<0.01),而HUVEC表达ICAM-1含量与对照组相比差异并不明显(38.94±2.59 mmol.L-1,P>0.05),随着As2O3浓度的增加,HUVEC表达ICAM-1/VCAM-1的量均增加但敏感性不同。对照组及(1.0、2.0、3.0、4.0、5.0)μmol.L-1As2O3作用于HUVEC 48 h实时荧光定量PCR法检测VCAM-1mRNA表达量明显增加,与对照组相比实验组的表达量分别为(1.657±0.287,1.858±0.241,2.321±0.280,3.012±0.235,3.508±0.342)(P<0.01)。结论:As2O3可直接降低细胞活性,诱导细胞凋亡,并且呈一定的时间-浓度依赖性。在较低浓度时VCAM-1/ICAM-1的表达在一个相对较低的水平,随着As2O3浓度的逐渐升高,内皮细胞凋亡率增高,VCAM-1/ICAM-1表达增加,并且VCAM-1/ICAM-1对As2O3的敏感性呈现一定的差异性。     

柳杉种子无菌苗组培快繁体系的建立

以柳杉种子在无菌条件下萌发的幼苗为外植体,研究3种基本培养基和3种植物生长调节剂对不定芽诱导、增殖及生根的影响,建立了完整的组培快繁体系。结果表明,柳杉种子经预处理后,用75%酒精消毒20 s,再用0.1%HgCl2浸泡600 s的消毒效果较好,污染率为10.00%,成活率为82.33%;丛生芽诱导的最适培养基配方为DCR＋6-BA 0.2 mg·L-1,诱导率较高,达66.67%;丛生芽增殖的最适培养基配方为DCR＋6-BA 0.2 mg·L-1＋IBA 0.05 mg·L-1,增殖倍数达到11.00;适宜的生根培养基为DCR＋NAA 0.01 mg·L-1＋IBA 0.2 mg·L-1,生根率为90.00%,平均生根数为4.09。     

外源H2O2对水稻幼苗抗寒性的调节作用

在常温下用不同浓度的外源H2O2(0～20 mmol·L-1)预处理水稻幼苗,再进行12 h 6℃低温胁迫,根据幼苗相对含水量和质膜相对透性筛选最佳外源H2O2处理浓度,并分析最佳外源H2O2浓度下幼苗的渗透调节物质和活性氧相关指标的变化.结果表明:(1)0～8 mmol·L-1 H2O2预处理可以增加水稻幼苗的相对含水量,降低其质膜相对透性,并以4 mmol·L-1 H2O2的效果最佳.(2)低温胁迫后,与对照组相比,4 mmol·L-1外源H2O2预处理降低了水稻幼苗萎蔫程度,并使其总呼吸速率、交替途径容量都有增加,同时还抑制了丙二醛的含量,增加了可溶性糖、可溶性蛋白质和脯氨酸的含量.(3)外源H2O2预处理对水稻幼苗的内源H2O2含量以及O(-)/(·)2产生速率没有显著影响.研究发现,外源H2O2可以通过提高呼吸速率、降低脂质过氧化程度、增加碳氮代谢来有效增强水稻幼苗的抗寒性,它可能以一种独立于内源活性氧系统之外的方式发挥作用.     

中国葱属根茎组植物15种25居群的核型研究

采用常规压片法,对15种25居群葱属根茎组植物进行核型研究,首次报道荒漠韭Allium tekesicola、蓝花韭A.beesianum的染色体数目和核型,并增补了一些根茎组植物的细胞学资料。结果表明：供试类群为二倍体或四倍体,核型类型为1A、2A或2B;高山韭A.sikkimense壤塘居群和荒漠韭具短臂随体,宽苞韭A.platyspathum的和布克赛尔居群、奇台居群具居间随体;野黄韭A.rude雅江居群和荒漠韭中各存在1条B染色体。结合前人研究结果,我们讨论了中国根茎组植物的染色体基数、随体染色体的多型性、B染色体的进化意义和该组植物的进化方式,探讨了天蓝韭A.cyaneum、齿丝山韭A.nutans的地理分布成因,得到了如下推论：（1）中国根茎组植物的染色体基数x=8;（2）中国根茎组植物的核型进化趋势为：1A→2A→2B→2C;（3）中国根茎组植物的随体染色体具多型性;（4）多倍化和结构变异是中国根茎组植物进化的两种重要方式;（5）天蓝韭和齿丝山韭以多倍化和无性生殖来克服扩大新的生存空间遇到的困难。     

高效液相色谱法测定血浆中同型半胱氨酸

建立了一种高效液相色谱-库仑阵列电化学测定血浆中同型半胱氨酸的方法。采用3-2-羧乙基膦作为还原剂还原巯基间形成的二硫键,用0.1 mol.L-1HC lO4来沉淀血浆蛋白,离心取上清,进样分析。在0.40~50.00μmol.L-1范围内,线性关系良好。加标平均回收率是98.43%,RSD%是4.35%。该方法简单、快速、灵敏。     

药用植物华泽兰组织培养和快速繁殖

通过比较不同的外植体、植物生长调节剂种类和浓度配比、生根培养基类型以及生根苗的移栽基质,建立华泽兰组织培养快速繁殖体系。结果表明,外植体表面消毒以75%酒精预处理10s,再用0.1%HgCl2浸泡10min,以嫩茎节为外植体诱导效果最好。培养基MS＋6-BA1.00mg.L-1＋IBA0.05mg.L-1利于形成丛生芽,用于继代增殖,30d的增殖系数为9.43;1/2MS＋IBA0.05~0.10mg.L-1适宜诱导生根获得再生植株,生根率100%;生根苗适宜移栽于田园土中,成活率93.3%。