小水榕染色体数目及核型分析

以小水榕根尖为材料,通过取材时间,8-羟基喹啉、饱和对二氯苯2种药剂预处理,并以细胞中有丝分裂相的数目、染色体的清晰度、分散程度为指标,探索出适于小水榕染色体分析的方法.结果表明:小水榕有丝分裂中期在一天的16:00达到高峰期,取样时间确定在16:00.饱和对二氯苯水溶液预处理2 h,卡诺氏固定液固定2 h,1 mol/L盐酸60 ℃水浴中解离3 min～4 min,并以醋酸洋红染色效果较好.小水榕核型为2 n=2 x=30=12 m+14 sm+4 st,属于"2B"类型.     

甜瓜有丝分裂染色体制片技术及核型分析

以萌发种子根为材料,研究预处理取样时间和预处理药剂对甜瓜染色体制片的影响.结果表明,上午8:00左右为最佳预处理取样时间,可以观察到近14%的中期分裂相;在4种药剂预处理活体根尖中,以添加对二氯苯(饱和)的放线菌酮(40 m g.L-1)水溶液的效果最佳.用此方法对厚皮和薄皮两种类型甜瓜进行核型分析,结果发现:两类甜瓜核型相似,都具有一对随体,核型均为2A型,核型公式均为2n=2x=24=14m+10st(2SAT).但两类甜瓜的染色体总长、平均长度以及随体在染色体上的分布都不相同.     

中华蚊母树染色体制片及核型分析

以中华蚊母树根尖为材料,采用常规压片法制片,比较材料的不同采集时间、预处理方法、固定剂、解离方法、解离时间及染色方法对中华蚊母树根尖染色体制片的影响.结果表明最佳的制片技术为:取材时间为上午9:00~11:00或下午13:00~15:00,以饱和对二氯苯预处理3 h,用1 mol?L-1盐酸60℃下解离8 min,卡诺固定剂固定,以改良石碳酸品红染色10 min.以该最佳制片方案对中华蚊母树进行体细胞染色体核型分析,首次揭示了中国特有植物———中华蚊母树体细胞染色体数目为2n=2x=24,染色体基数x=12,染色体核型公式为2n=2x=24=12m(2SAT)+10sm+2st,主要由中部和近中部着丝点染色体组成;染色体相对长度组成为2n=24=2L+8M2+12M1+2S,核型不对称指数为64.29%,属于2A型.结果显示中华蚊母树核型对称程度较高,在进化中属于比较原始的类型.     

不同预处理对鹰嘴豆根尖细胞染色体制片的影响

采用常规压片法,以鹰嘴豆根尖为材料,研究了秋水仙素、对二氯苯和8-羟基喹啉等预处理剂对积累鹰嘴豆根尖细胞中期分裂相的效果,并比较了不同预处理剂对中期染色体形态的影响。结果表明,3种预处理剂均能使根尖细胞的有丝分裂停留在中期,但0.1%的秋水仙素溶液进行预处理后的中期分裂相,染色体粗短,分散度不理想;0.006 mol/L的8-羟基喹啉溶液进行预处理后的鹰嘴豆中期染色体形态不清晰,边缘缺失;对二氯苯饱和水溶液4 h处理后的根尖细胞染色体背景清晰,缢痕明显,分散度较适宜,适合核型分析。     

橙花破布木染色体制片及核型分析

为了解橙花破布木的遗传背景,以其根尖为试验材料,采用体细胞染色体常规制片法着重探索取材和预处理两个实验环节,选取染色体分散较好的细胞进行数目确定及核型分析。结果表明:(1)橙花破布木最佳取材时间为9:30～10:00和14:00～14:30,最佳预处理试剂及时间为饱和对二氯苯预处理2h;(2)橙花破布木染色体数目为32条,共16对染色体,为二倍体植物;核型公式为2n=2X=32=32m,核型属于"1A"型;染色体组绝对长度变化范围为0.38～0.69μm,相对长度(%)变化范围为4.48～8.24,相对长度组成为2n=2L+14M1+14M2+2S;核型不对称系数(As.K%)为58.40%。研究结果为破布木属植物染色体制片技术及核型分析提供参考,也可为橙花破布木基因进行染色体定位等细胞遗传学及表观遗传学研究奠定基础。     

不结球白菜根尖体细胞染色体制片及其二倍体和四倍体有丝分裂过程观察

以不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)根尖为材料,对染色体制片过程中根长(小于0.5 cm、0.5 ～ 1.0 cm、1.0～2.0 cm及大于2.0 cm)、预处理方法、预处理剂种类(2 mmol·L-1 8-羟基喹啉、2 mmol·L-1 8-羟基喹啉与质量浓度0.2g·L-1秋水仙素等体积混合液、质量浓度0.2g·L-1秋水仙素、饱和对二氯苯、质量浓度20或40 mg·L-1放线菌酮、质量浓度40mg·L-1放线菌酮与2 mmol·L-1 8-羟基喹啉等体积混合液)及预处理时间(1.0～3.5 h)进行了比较和筛选;在此基础上,对二倍体和四倍体不结球白菜根尖体细胞有丝分裂过程进行观察.结果表明:根长度对分裂相的数量有显著影响;根长1.0～2.0 cm,分裂相相对较多,占细胞总数的64.75％.冰冻预处理22 ～ 23 h,能获得一定量的分裂相.采用不同的预处理剂及预处理时间,分裂相的数量及染色体形态有明显差异;用质量浓度40 mg·L-1放线菌酮溶液处理3.5h,分裂相数量最多,但易导致染色体加倍;用质量浓度20mg·L-1放线菌酮预处理3.5h,染色体长且着丝点及随体清晰,且分裂相较多,占细胞总数的53.65％.因而,根长度以1.0 ～2.0 cm为宜,适宜的预处理方法为用质量浓度20 mg·L-1放线菌酮浸泡2.0～3.0 h.二倍体及四倍体不结球白菜根尖体细胞有丝分裂过程基本相似,在有丝分裂的间期、前期、中期、后期和末期染色体的行为基本一致,但在四倍体的有丝分裂过程中会出现多价体、染色体桥、落后染色体、染色体异常分离及内源有丝分裂等异常现象.     

盾叶薯蓣花药培养及单倍体植株的获得

以处于单核期的盾叶薯蓣花药为材料,经愈伤组织途径成功获得单倍体盾叶薯蓣新材料。对盾叶薯蓣花药培养、植株再生过程的研究表明:来自不同居群的外植体对花药愈伤组织诱导有显著影响;W14是适合花药愈伤组织诱导的基本培养基;花药愈伤组织增殖和分化的适宜培养基为:MS基本培养基 BA2.0mg/L IAA0.2mg/L;生根培养基为添加了IBA2.0mg/L、NAA0.4mg/L和0.5g/L活性碳的MS培养基。以流式细胞仪和根尖染色体压片法检查花培植株的结果表明,有8%～12%的个体为单倍体。实验结果为进一步开展单倍体育种及相关理论研究提供了材料和技术基础。     

红掌花药培养

研究了发育时期、基因型、培养基、低温预处理等因素对红掌花药愈伤组织诱导的影响.结果表明,小孢子中晚期是红掌花药培养的适宜时期;基因型对花药膨大率有显著的影响;不同培养基上的Sweet Dream和Jungle Bush的花药膨大率差异显著;低温预处理明显提高Sweet Dream的花药膨大率.从Sweet Dream花药诱导出致密和疏松两种愈伤组织,两种愈伤组织芽分化率和生根率存在明显差异,致密愈伤组织的小苗生根率为95.00%,而疏松愈伤组织的小苗生根率为30.00%.Sweet Dream的花药再生植株与叶片再生植株在形态特征上有差异,染色体鉴定结果表明,花药再生植株均是二倍体.     

从“湖北光敏感核不育水稻”的未受精子房和花药培养出单倍体植株

采用10种诱导培养基,培养湖北光敏感核不育水稻农垦58品种的未受精子房和花药。共培养未受精子房2790个,获得胚囊愈伤组织17块,最高诱导频率达3.33%,其中2块分化出绿苗。培养花药16740个,获得花药愈伤组织15块,最高诱导频率为0.92%,其中3块分化出苗,2丛白苗,1株绿苗。胚囊植株和花粉植株经根尖染色体检查为单倍体,2n=x=12。实验证明,液体培养、2,4-D0.2-0.5 mg/1、低温预处理对诱导胚囊愈伤组织及花粉愈伤组织的形成具良好效果。     

小麦花培苗染色体加倍技术研究

为了提高冬小麦花培苗染色体加倍效率,分别用不同浓度的秋水仙碱对参试的冬小麦材料的花药愈伤组织、再生植株根系和花培苗分蘖节进行了加倍处理。结果表明,用0.02‰和0.05‰秋水仙碱浓度处理的愈伤组织再生植株结实率达33.3%～61.5%。用0.2％的秋水仙碱浸根处理5 h,结实株率平均高达37.5％。用0.04％的秋水仙碱1%的二甲亚砜溶液浸泡分蘖节的时间应在5～10 h之间较为适宜,结实株率平均可达50％以上。     

水稻花药培养力的遗传分析及基因定位

在栽培稻的籼粳亚种间,花药培养力存在显著差异,这一差异主要是由遗传因素引起的。以适合籼粳稻杂种花药培养的SK_3培养基,经花药培养获得了一个籼粳交F_1代的加倍单倍体(DH)群体,对该群体的110个株系用同一种培养基进行花药培养,利用该群体构建的分子图谱进行有关水稻花药培养力的数量性状基因座位(QTLs)的分析。结果表明,与水稻花药培养力有关的4个性状在DH群体中均表现为连续分布,愈伤组织诱导率与绿苗分化率之间不存在相关性,而绿苗产率与愈伤组织诱导率和绿苗分化率均显著相关。在第6、7、8、10和12 5条染色体上分别检测到与愈伤组织诱导率有关的5个QTLs,其加性效应均为正。在第1和第9染色体上检测到与绿苗分化率有关的2个QTLs,这两个性状间的QTs不存在连锁。在第9染色体上有一个主效基因与白苗分化率有关,对绿苗产率则没有检测到特有的QTL。     

Analysis of quantitative trait loci which contribute to anther culturability in rice (Oryza sativa L.)

Anther culturability of rice is significantly different between indica and japonica varieties. A doubled haploid (DH) population was established via anther culture of an indica/japonica hybrid on SK₃ medium, which had been shown particularly suitable for anther culture of indica/japonica hybrids. For analyzing the quantitative trait loci (QTLs) responsible for anther culturability, anthers of the DH lines were again cultured with SK₃ medium and parameters for four traits representing the anther culturability were surveyed and analyzed with the molecular map constructed from the same DH population. The parameters for four major traits were as follows: callus induction frequency (CI), green plantlet differentiation frequency (GPD), albino plantlet differentiation frequency (APD), and green plantlet yield frequency (GPY). All four traits displayed continuous distributions among the DH lines. The correlation coefficients between these traits were also tested and showed that there was no relationship between callus induction and green plantlet differentiation frequencies, but both showed strong positive correlation with the frequency of green plantlet yield. For callus induction frequency, five QTLs were identified on chromosomes 6, 7, 8, 10 and 12. Two QTLs for green plantlet differentiation frequency were located on chromosomes 1 and 9. There was a major QTL for albino plantlet differentiation frequency on chromosome 9. No independent QTL was found for green plantlet yield frequency. The results may be useful in the selection of parents with high response to anther culture for rice haploid breeding and in the establishment of permanent DH populations for molecular mapping.     

RFLP analysis to identify putative chromosomal regions involved in the anther culture response and callus formation of maize

Summary RFLP analysis was performed with anther culture-derived callus lines developed from the maize F₁ hybrids Pa91 x FR16 (PF), H99 x Pa91 (HP) and H99 x FR16 (HF). Relatively evenly spaced RFLP markers were selected to cover the maize genome with 52, 58 and 35 RFLP markers for the PF, HP and HF callus lines, respectively. The results from populations PF and HP combined with limited information from HF showed that six chromosomal regions on chromosomes 1, 2 (two regions), 3, 6 and 8 appear to be associated with the formation of embryo-like structures (ELSs) from microspores or the subsequent formation of regenerable callus from the ELSs. Regions at the end of the long arm of chromosome 2 and on the long arm of chromosome 8 appear to be associated with ELS formation, and the other regions appear to be associated with either ELS or regenerable callus formation or both. Certain regions that we have identified are the same as those found in other studies to be important for friable, embryogenic callus formation (chromosomes 1 and 3 and near the centromere of 2) and for ESL formation (chromosomes 1 and 3). This study has provided evidence for the genetic basis of the maize anther culture response and callus formation.     

水稻两用核不育系培矮64S花药培养条件的研究

研究了水稻培矮６４Ｓ花药培养的几个条件,认为低温预处理天数以７～８ｄ为宜,诱导愈伤组织的培养基宜采用Ｎ６或ＳＫ３．     

水稻花药对高温胁迫的生理响应

为了探明水稻花药在高温胁迫下的生理反应及适应机理,以耐热水稻品系996和热敏感水稻品系4628为材料,在人工气候室进行高温（9：00-17：00,37℃;17：00-9：00,30℃）和适温处理（9：00-17：00,30℃;17：00～9：00,25℃）,研究高温胁迫对水稻花药可溶性糖、可溶性蛋白质、热稳定蛋白、维生素C含量、膜透性及内源激素含量等生理特性的影响。结果表明,高温使水稻花药中可溶性糖含量、可溶性蛋白质含量和维生素C含量下降,热稳定蛋白含量上升;热敏感品系4628花药中丙二醛含量和相对电导率在高温胁迫下增幅大于耐热品系996;高温胁迫下,水稻花药中GA3和IAA含量降低,ABA含量上升,耐热品系996花药中GA3、IAA含量降低幅度小于热敏感品系4628,ABA含量增加幅度小于热敏感品系4628。     

Haploid plants from in vitro anther culture of the leguminous tree,Peltophorum pterocarpum (DC) K. Hayne (Copper pod)

The development of haploid callus, embryos and plantlets from cultured anthers and the various factors affecting androgenesis in Peltophorum pterocarpum (Copper pod), a tropical legume tree is reported. A pretreatment of flower buds at moderate temperature of 14°C for 8 days was most effective for callus production. The colour of the anther was found to be a reliable and efficient indicator for identification of suitable stage of anther for culture. The frequency of anthers which produced callus and shoots was highest when anthers were cultured at mid or late-uninucleate stage. A high sucrose concentration of 10% is a specific media requirement for androgenesis. The haploid nature of the embryos, callus and regenerated plants (n=14) were confirmed by chromosome count.Abbreviations 2,4-D 2,4-dichlorophenoxyacetic acid - KN kinetin - NAA naphthaleneacetic acid - BAP bezylaminopurine     

光照、温度和湿度对桔小实蝇飞翔活动的影响

于2004年6月在云南元江芒果园内通过性诱剂诱捕,对桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)的飞翔活动日节律进行了全天24h的监测,并就光照、温度和相对湿度3个环境因子的影响进行了测试和综合分析。研究表明,桔小实蝇雄成虫仅在白天有光照的情况下进行飞翔活动,夜晚停止飞翔。在1d内有2个飞翔活动高峰期,分别发生在上午8∶00~9∶00和下午18∶00~20∶00,且前者进行飞翔活动的虫量相对后者要大。在下午2∶00左右进入白天飞翔活动的低谷。光刺激是桔小实蝇飞翔活动的基本条件,其趋光性因芒果园内树荫下的光照强度变化而异,在100~200lux之间对桔小实蝇飞翔活动明显有利,而当光照强度低于100lux或高于200lux,飞翔活动也相应减小。气温总体上位于桔小实蝇飞翔活动的适宜范围,而下午低于60%的相对湿度对其飞翔活动有一定的抑制作用。气温、湿度和光照对桔小实蝇飞翔活动的作用机理各不相同并且各因子之间也相互作用,最终对桔小实蝇的飞翔活动产生综合效应。     

影响农杆菌介导玉米愈伤组织遗传转化因素的研究

用农杆菌介导玉米愈伤组织的转化,其筛选的结果得到的抗性愈伤组织受玉米愈伤组织的继代时 间、浸染的农杆菌菌液浓度、共培养的温度以及其共培养时间等因素的影响。玉米愈伤继代后7～9d,农杆菌 浓度为OD600值0.3左右、共培养温度约22℃、培养时间3d时,抗性愈伤的获得率最高。     

开花期低温胁迫对水稻花粉性状及剑叶理化特性的影响

以耐冷水稻品种996和冷敏感品种4628为材料,开花期在人工气候室进行7 d低温（06:00-8:00和19:00-23:00,19 ℃;08:00-10:00和16:00-19:00,21 ℃;10:00-16:00,23 ℃;23:00-06:00,17 ℃）和适温（06:00-8:00和19:00-23:00,24 ℃;08:00-10:00和16:00-19:00,26 ℃;10:00-16:00,30 ℃;23:00-06:00,22 ℃)处理,研究了低温胁迫对水稻花药开裂、花粉性状及剑叶叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白质含量、膜透性等理化特性的影响.结果表明：开花期低温胁迫导致水稻花药开裂系数、花粉萌发率显著下降,中部和下部颖花的不育花粉率增加.996的花药开裂系数和花粉萌发率显著高于4628,表明耐冷品种996在开花期低温胁迫下能保持较好的花粉散落特性和花粉萌发特性.低温胁迫下,996的剑叶可溶性蛋白质和游离脯氨酸含量及其增幅显著高于4628,而丙二醛含量和相对电导率及其增幅却显著低于4628,说明耐冷品种在低温胁迫下的保护性反应更迅速和强烈,其膜结构及功能更稳定.